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1、8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度 一. 灵敏度的表示方法:摩尔吸光系数 () A= b c =A/bc (Lmol-1cm-1) 越大, 灵敏度越高: 1045104 为中等灵敏度; 105为高灵敏度; 104 *选择性好 *显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好, max60 nm . *反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。 *显色条件易于控制，重现性好。 8 8.4.2 显色条件的确定 c(R)c(R) c(R) 1. 显色剂用量（c(M)、pH一定 ） Mo(SCN)32+ 浅红 Mo(SCN)5 橙红 Mo(SCN)6- 浅红 Fe(SCN)n3-n 9 2. 显色反应酸度（c(M
2、)、 c(R)一定） pH1pHpH2 pH 10 邻二氮菲亚铁反应完全度与pH的关系 Fe2+3R H H A 柠檬酸 c(R)R=10-4molL-1 31021.3 3 FeR3 11 pH38为适宜 的酸度范围 12 3. 显色温度及显色时间 另外，还有介质条件、有机溶剂、 表面活性剂等 T1() T2() t(min) A 13 8.4.3 干扰及消除 Co2, Fe3+ Co2+ FeF63- Co(SCN)2 (蓝) NaF SCN Co2+ Fe2+,Sn4+ (2)Sn2+ Co(SCN)2 SCN 测Co2(含Fe3+) : (掩蔽法) 1.化学法 14 Co2+, Zn2
3、+, Ni2+, Fe2+ CoR,ZnR NiR,FeR CoR, Zn2+ , Ni2+ , Fe2+ 钴试剂R H+ 测Co2 :(生成络合物性质不同) 如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰 ， 则需采取分离法。 测Fe3:(控制pH) Fe3+, Cu2+ FeSS （紫红） Cu2+ pH 2.5 SS 15 2. 物理法 选择适当的测定波长 515655 415500 钍-偶氮砷III 钴-亚硝基红盐 AA 络合物 络合物 试剂 试剂 16 1. 仅络合物有吸收，溶剂作参比。 如 phenFe2+ 标准曲线 2.待测液也有吸收，被测液作参比。 如 测汽水中的 Fe 3. 显色剂或
4、其他试剂也有吸收，空白溶液作参比 例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的 Fe， 参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。 4. 干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时： 1）掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比. 2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比. - 选择适当的参比溶液 17 8.5 吸光光度法的应用 1. 单一组分测定 1) 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂 2) 磷的测定: DNA中含P9.2%, RNA中含P9.5%, 可得核酸量. H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O
5、磷钼黄(小) 磷钼(V)蓝(大) Sn2+ 18 3) 蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4) 氨基酸测定茚三酮(紫色化合物) 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、 SO42-、Hg2+- 6) 药物含量测定比吸光系数定量；荷移 光谱法测定. 7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、 SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、 苯丙氨酸、蛋白质等。 19 2. 多组分的测定 x1, y1, x2, y2由x,y标液 在1, 2处分别测得 a) 在1处测组分x, 在2处测组分y b) 在1处测组分x; 在2处测总吸 收,扣除x吸收,可求y c) x
6、,y组分不能直接测定 A1=x1bcx+ y1bcy(在1处测得A1) A2 =x2bcx+ y2bcy(在2处测得A2) 20 3. 光度滴定 NaOH滴定 对硝基酚 pKa=7.15 间硝基酚 pKa=8.39 pKa =1.24 V1 V2 V(NaOH)/mL 对硝基酚 间硝基酚 酸形均 无色. 碱形均 黄色 21 典型的光度滴定曲线 依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。 Vsp 滴定剂吸收 Vsp 被滴物吸收 Vsp 滴定剂与待 测物均吸收 Vsp 产物吸收 22 4. 络合物组成的测定 (1)摩尔比法: 固定cM ,改变cR 1:13:1 c(R)/c(M) A
7、1.0 2.0 3,0 23 (2)等摩尔连续变化法: M:R=1:1 0.5 0.33 cM/c cM/c M:R=1:2 24 表观形成常数的测定 (设M、R均无吸收) 0.5 cM/c M:R=1:1 A0 A c(M)=c(R)=c MmRn型 ? 25 5.一元弱酸离解常数的测定 p330 HL HL KaH+L/HL 高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得AHLHLc(HL)； 低酸度下，几乎全部以L存在，可测得AL Lc(HL). 代入整理： HL L 或 配制一系列c相同,pH不同的溶液,测A. 26 MO吸收曲线 Aa(HL) Ab (L) 1 2 3 4 5 6 Ab6 5
8、4 3 2 1 Aa 350400450500550600 /nm A 曲线pH 11.10, 1.38 22.65 33.06 43.48 53.98 65.53,6.80 由每份溶液的一 对pH、A，可求 得一个Ka, 取平 均值即可. 27 MO离解常数的测定 作图法 AHL 3.32(pKa) 123456 A pH=pKa pH AL 0.6 0.4 0.2 0 -0.2 -0.4 -0.6 3.04.0 pH 3.34 28 6. 双波长分光光度法消除干扰(不要求) 在2， A2 = Ax2+Ay2 在1， A1= Ax1+Ay1 A= A2 - A 1 = Ax2+Ay2 (Ax
9、1+Ay1) = Ax2 Ax1 = Ax Ay2 Ay1 Ax =(x2 x1)bcx 消除了y的干扰 X被测 Y干扰 211 Ay1 AX1 Ay2 AX2 A /nm 29 双波长分光光度法消除浑浊背景干扰 1 2 A A 1 -A 2 = A Ac 例 牛奶中微量 Fe的测定 30 7. 导数分光光度法(不要求) A图 混合物导数光谱 0 1 2 3 4 31 常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定 1.氢氯噻嗪. 2.硫酸双肼肽 嗪 3. 盐酸可乐定 4.常药降压片 250 290 330 4 1 2 3 1 2 A 32 肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取 方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液
10、用6的 HClO4稀释，然后用GDX100大孔树脂萃 取，用二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，40 挥干，剩余物用0.1molL-1NaOH4mL溶 解后，紫外导数光谱测定。 A 0.0 c d a b D a.空白肝普通光谱 b.2.5 mg/L敌鼠溶液的普通光谱 c.空白肝二阶导数光谱 d.2.5 mg/L敌鼠溶液的二阶导数光谱 33 8.1 了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系. 吸收曲线定 性分析的基础。 定量分析的基础朗伯-比尔定律：A=bc=-lgT 式中各参 数的物理意义，定量计算。 8.2 了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的 基本部件。 8.3 灵敏度的表示摩尔吸光系数的意义和计算； 准确度适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。 8.4 显色反应及条件的确定: 显色剂用量、酸度、时间、温 度、干扰及消除。 8.5 应用: 单一组分测定示例、多组分测定、光度滴定、络 合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。 第八章 小 结 34 35
