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1、微生物的显微镜直接计数法微生物的显微镜直接计数法 一、实验目的及要求一、实验目的及要求 1.了解血球计数板的构造、明确其计数 原理。 2. 掌握使用血球计数板显微镜下直接进 行微生物计数的方法。 二、实验原理二、实验原理 显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于 计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快 速、直观的方法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养 悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。菌体较大 的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细 菌则采用彼得罗夫 霍泽（Petrof Hausser）细菌 计数板或Hawksley计数板。三种计数板的原理和 部件相同，只是细菌计数板较薄，可
2、以使用油镜 观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数 板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上 有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台，被一 短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数 区。 计数区的刻度有两种： 一种是计数区（大方格）分为16个中方格，而每 个中方格又分成25个小方格； 另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中 方格又分成16个小方格。 计数区由400个小方格组成。 每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻 片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计 数区的体积为0.1mm3。 使用血球计数板计数时，通常测定五个中方格的 微生物数
3、量，求其平均值，再乘以25或16，就得 到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌 液中微生物的数量。 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个中方格中 细胞平均数（N）系数（K）菌液稀释倍数 （d） 三、实验器材三、实验器材 1菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。 2仪器、材料：显微镜、血球计数板、盖玻 片、吸水纸、计数器、无菌滴管、擦镜纸。 四、实验方法四、实验方法 1无菌生理盐水适当稀释制备酿酒酵母菌悬液。 2镜检血球计数板。 3血球计数板盖上盖玻片，将酵母菌悬液摇匀， 用无菌滴管吸取少许，从计数板平台两侧的沟槽 内沿盖玻片的下边缘摘入一滴，利用表面张力沟
4、槽中流出的多余菌悬液。 4静置5min，将血球计数板置载物台上夹稳，先 在低倍镜下找到计数区，再转换高倍镜观察并计 数。 5计数时若计数区由16个中方格组成，按对角 线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方 格（即100小格）的菌数。如为25个中方格组成 的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央 l个大方格的菌数（即80个小格）。 6如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上 线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。 对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时， 即可作为两个菌体计算。 7清洗血球计数板 五、实验作业五、实验作业 1.结果 各中方格菌数 A B 二室 均值 菌数 /ml 1 2 3 4 5 第一室 第二室 A A表示五个中方格的总菌数；表示五个中方格的总菌数；B B表示菌液稀释倍数。表示菌液稀释倍数。 2.2.思考题思考题 血球计数板计数误差来自哪些方面，应如何避免。
