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2、文责自负。 研究生签名：乳镶容导师签章：谬多搠 二口10 年；月彳日 1 。0 I 二E ! - f 目录 l I I I III IIII l l l lI I I II II I I I 、t17 7 9 8 4 0 中文摘要l 英文摘要”4 研究论文间尼索地平质量控制与药代动力学研究 弓l 言”“”9 第一部分胶束电动毛细管电泳法测定间尼索地平原料药的含量 前言1 0 翮吾”l U 材料与方法”l O 结果m 1 3 I 村I 圉1 4 讨论一1 6 小结”1 6 参考文献1 7 第二部分环糊精电动毛细管电泳法手性分离间尼索地平对映体 前言1 8 材料与方法1 9 结果与讨论2 0 附图
3、_ 2 3 附表2 7 小结2 9 参考文献2 9 第三部分胶束电动毛细管电泳法同时测定间尼索地平及其有关物质 前言31翮吾”3l 材料与方法3 2 结果与讨论3 5 附图3 9 附表4 3 月、结”4 4 参考文献”4 4 第四部分H P L C P D A 法研究微生物转化问尼索地平的代谢物 前言_ 4 7 材料与方法4 7 结果4 9 附图51 讨论”5 4 d 、结“”“”5 4 参考文献5 4 第五部分H P L C - M S 法测定大鼠血浆中间尼索地平及其3 个主要代谢物 前言5 6 翮舌。5 6 材料与方法5 7 结果6 0 附图”6 2 附：表6 9 讨孛仑”7 1 小结7
4、2 参考文献7 2 结论7 5 综述手性选择剂在高效毛细管电泳手性分离中的应用与进展鬯! ! ! ? 7 6 致 射9 0 个人简历9 1 中文摘要 间尼索地平质量控制与药代动力学研究 摘要 间尼索地平( m - n i s o l d i p i n e ) 是河北医科大学药学院自主研发的国家 一类新药，存在一对光学异构体( 尺，$ - m - n i s o l d i p i n e ) ，是新的1 ，4 二氢 吡啶类血管扩张性钙通道受体拮抗剂，适用于心绞痛和高血压的治疗，目 前处于临床前研究。 本实验旨在建立用胶束电动毛细管电泳法测定问尼索地平及其有关 物质的含量，建立环糊精电动毛细管
5、电泳法手性分离间尼索地平对映体的 方法，为间尼索地平的质量控制提供新的手段。利用微生物转化法进一步 研究间尼索地平的代谢，发现并确定代谢产物结构，总结间尼索地平及其 代谢产物的质谱裂解规律，最后采用高效液相质谱联用技术( 肿L C M S ) 分析测定大鼠体内的间尼索地平和代谢产物，阐明间尼索地平的代谢规 律，为评估母体药物和代谢产物的药理学和毒理学性质、理解不同药物在 代谢过程中发生相互作用和产生的毒副作用、进一步改造药物的化学结构 提供依据和研究思路。 第一部分胶束电动毛细管电泳法测定间尼索地平原料药的含量 目的：建立间尼索地平的胶束电动毛细管电泳测定方法。 方法：以未涂层融硅石英毛细管(
6、 6 0c m 7 5 岬，有效长度5 0c m ) 为分离柱，1 0m m o l L 磷酸二氢钠5m m o l L 硼砂缓冲溶液+ 3 0m m o l L 十 二烷基硫酸钠( p H8 1 ) 为电泳介质，在分离电压为3 0l 【V ，紫外检测波 长为2 1 4n n l 的条件下对间尼索地平进行测定。 ” 结果：建立了间尼索地平的胶束电动毛细管电泳测定方法，间尼索地 平在3 0 - 一1 2 0m g L 的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数 为r = O 9 9 9 0 ，检测限为0 9m g L 。 结论：该方法简便、快速、分析成本低，同样适合用于间尼索地平的 含量测定
7、，更适用于药物在生产与贮藏过程中的质量控制及杂质检查。 第二部分环糊精电动毛细管电泳法手性分离间尼索地平对映体 目的：建立分别用S B E p C D 和C M 1 3 1 C D 手性拆分间尼索地平对映 体的方法。 中文摘要 方法：分别用S B E p C D 和C M q 3 C D 手性拆分间尼索地平对映体， 详细考察手性选择剂、p H 、缓冲溶液的种类和浓度、有机改性剂和温度 对分离试验的影响。通过与尼索地平和尼莫地平比较，探讨可能的手性识 别机制。 结果：建立了分别用S B E p C D 和C M - I B C D 手性分离间尼索地平对映 体的方法，结果表明s B E p C D
8、 更适合于其对映体的拆分，而且S B E p C D 的取代度为7 0 的分离效果比4 0 的好。证实了二氢吡啶环才可能是地平类 化合物的主要手性识别位点；4 位苯基上的硝基位置的不同分离效果也不 同，其邻位上的硝基( 如尼索地平) 可增加环糊精对其的手性识别能力。 结论：环糊精电动毛细管电泳法是手性分离间尼索地平对映体的另一 备选手段，为间尼索地平的制剂及体内后续研究工作打下基础。提出的手 性识别机制证实了文献报道的论断，为其它二氢毗啶类药物的C D E K C 分 离提供理论依据。 第三部分胶束电动毛细管电泳法同时测定间尼索地平及其有关物质 目的：建立间尼索地平及其有关物质的胶束电动毛细管
9、电泳测定方 法。 方法：以未涂层融硅石英毛细管( 6 0c m X7 5 岬，有效长度1 1c m ) 为分离柱，2 0m m o l L 硼砂+ 2 0m m o l L 十二烷基硫酸钠+ 体积比为15 的 乙腈( p H8 6 8 ) 为缓冲溶液，在分离电压为2 5k V 、温度2 4 、紫外检 测波长为2 1 4n n l 的条件下对间尼索地平及其有关物质进行分离测定，同 时考察影响分离效果的因素，并用该法研究间尼索地平的加速试验口 结果：建立了胶束电动毛细管电泳法同时测定间尼索地平及其有关物 质的方法，6 种物质在9m i n 全部实现基线分离。试验中，十二烷基硫酸 钠及乙腈的浓度对分
10、离效果影响较大。在考察间尼索地平的加速试验中发 现其对光较稳定，但易被氧化成另一未知化合物。 结论：该方法快速、分析成本低，为间尼索地平的质量控制提供了新 的方法，同时也为地平类其他化合物的毛细管电泳分离测定提供参考。 第四部分I t P L C - P D A 微生物转化法研究间尼索地平的代谢物 目的：建立微生物转化研究间尼索地平代谢产物的方法，确定代谢物 的结构及转化途径。 方法：通过比较1 4 种加药菌液样品和相对应的菌空白、药物空白的 中文摘要 印? L C - P D A 图谱，发现代谢物并进行放大制备。 结果：经1 H - N M R 、1 3 C - N M R 及E S I -
11、 M S 2 确定了间尼索地平2 个 代谢产物的结构，并推断出间尼索地平的微生物转化途径。 结论：微生物转化可模拟间尼索地平的体内代谢，是研究药物代谢的 一种切实可行的方法。 第五部分H P L C M S 法测定大鼠血浆中间尼索地平及其3 个主要代谢 物 目的：建立间尼索地平及其3 个主要代谢物的L C M S M S 测定方 法，研究代谢物的体内变化趋势。 方法：6 只S D 大鼠，按大鼠体重以9m g k g 的给药量灌胃给予间尼 索地平。分别在1 5 ，3 0 ，6 0 ，9 0 ，1 2 0 ，1 8 0 ，3 0 0 ，4 8 0 ，7 2 0 ，1 4 4 0m i n 不同时间点取血，置于肝素化离心塑料管中，离心取血浆，经过液液萃取 后，进样l Om 进行L C - M S M S 分析。血浆样品的分析测定采用S y m m e t r y R P - C 1 8 分析色谱柱( 1 5 0m m X4 6m mi
