《饥饿诱导涡虫差异表达基因的筛选及九产地淡水涡虫hsp70亲缘关系分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《饥饿诱导涡虫差异表达基因的筛选及九产地淡水涡虫hsp70亲缘关系分析（78页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、河南师范大学 硕士学位论文 饥饿诱导涡虫差异表达基因的筛选及九产地淡水涡虫Hsp70亲缘 关系分析 姓名：费利娜 申请学位级别：硕士 专业：生物学、动物学 指导教师：陈广文 20090601 摘要 目的：采用m R N A 差异显示反转录聚合酶链式反应技术( D D R T - P C R ) 筛选塔 岗水库淡水涡虫饥饿诱导中的差异表达序列标签( E x p r e s ss e q u e n c et a g s ，E S T s ) ， 探索淡水涡虫抗饥饿生存的分子机理；对九产地淡水涡虫的H s p 7 0 序列进行分子 系统学研究，对其系统演化关系进行了初步探讨。 方法：饥饿诱导塔岗水
2、库的淡水涡虫，在饥饿一个月时将其处死，提取总 R N A ，用m R N A 差异显示技术( D D R T - P C R ) 研究饥饿情况下差异表达的基因，克 隆与测序后用生物信息学方法对测序结果进行分析；克隆九产地淡水涡虫H s p 7 0 基因序列，进行分子系统学分析。 结果：运用m R N A 差别显示技术筛选饥饿涡虫体内的差别表达基因，获得 1 8 条差异表达片段。6 个为1 8 s r R N A ，2 个为2 8 s r R N A ，1 个为翻译起始因子，1 个为与日本三角涡虫信使m R N A 上与D j C l 9 3 表达有关的C a s p a S e - 3 基因，
3、1 个与 日本三角涡虫D E A Db o x 蛋白表达有关的信使m R N A 同源序列，1 个与H s p T O 基因同源，1 个与H s p 9 0 基因同源，2 个与P o l a r o m o n a s 藻J S 6 6 6 的基因组序列同 源性最高，1 个与S c h m i d t e am e d i t e r r a n e a 克隆H 6 7 8 d 的未知m R N A 序列同源性 最高，还有2 个在G e n b a n k 中未找到同源序列。此外，我们还克隆了九个产地涡 虫的H s p T O 部分e D N A 序列，并用分子进化分析软件M e 9 3 1
4、软件对其分析构树。 九产地涡虫H s p 7 0 亲缘关系显示：信阳新县农科所、信阳寨沟和信阳息县陈湾大 桥下三地聚类一枝，亲缘关系较近；南阳淮源寺和南阳桐柏均属桐柏山区，聚为 一个小枝；山西王莽岭西部河锡崖村和山西王莽岭锡崖沟下两个产地同在王莽岭 风景区内，地理位置及环境都非常相似，聚为一个小枝：新乡卫辉塔岗水库属太 行山区，但与王莽岭两地距离关系而言，相对较远，因此独立为一枝；洛阳白云 山属伏牛山系，地理位置上与前八个产地相对比较远，亲缘关系较远，故也单独 为一枝。 结论：初步筛选出1 8 个饥饿诱导的差异表达E S T s ，为功能基因的克隆与分 析奠定了基础。九产地淡水涡虫H s p
5、7 0 的亲缘关系分析结果与涡虫的地域分布基 A B S T R A C T P U R P O S E ：T or e v e a lt h em o l e c u l a rm e c h a n i s mo ft h ef r e s h w a t e rp l a n a r i a n si nr e s p o n s et o s t a r v a t i o n ，W es c r e e n e da n da n a l y z e dd i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e ds e q u e n c et a g s
6、 ( E S T s ) i n s t a r v a t i o n - i n d u c e dp l a n a r i a n sb yd i f f e r e n t i a ld i s p l a yo fm e s s e n g e rR N A ( D D R T - P C R ) t e c h n i q u e M e a n w h i l e ，m o l e c u l a rs y s t e m a t i c sw a sc o n d u c t e dt oa n a l y z eH s p 7 0s e q u e n c e so ft
7、h ef r e s h w a t e r p l a n a f i a n sf r o mn i n el o c a l i t i e s ，b a s e do nw h i c hw ed i s c u s s e dt h e i rp h y l o g e n e t i ce v o l u t i o n r e l a t i o n s h i p M E T H O D S ：P l a n a r i a n sf r o mT a g a n gR e s e r v o i rw e r es t a r v e df o ro n em o n t h
8、 ，a n dk i l l e df o r t o t a lR N Ae x t r a c t i o n T h e nW eu s e dD D R T - P C Rt os c r e e nt h ed i f f e r e n t i a le x p r e s s i o no ft h eg e n e s b e t w e e nt h en o r m a lp l a n a r i a n sa n dt h es t a r v e do n e s A f t e rs c r e e n e d ，t h ed i f f e r e n t i a
9、 le x p r e s s e d f r a g m e n t so b t a i n e df r o mt h ee x p e r i m e n t sw e r ec l o n e da n ds e q u e n c e d T h er e s u l t sw e r ea n a l y z e d b yb i o i n f o r m a t i c s I na d d i t i o n ，w ec l o n e da n ds e q u e n c e dp l a n a r i a n s H s p 7 0g e n e sf r o mn
10、 i n e l o c a l i t i e s ，t h e nc o n s t r u c t e dH s p 7 0p h y l o g e n e t i ct r e ef o rm o l e c u l a rs y s t e m a t i c sa n a l y s i s R E S U L T S ：U s i n g t h eD D R T - P C Rt e c h n o l o g yt os c r e e nt h ed i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e dg e n e si nt h es
11、 t a r v e dp l a n a r i a n s ，w eo b t a i n e d18e D N Af r a g m e n t s T h er e s u l t s s h o w e dt h a ts i xf r a g m e n t sw e r e18 s r R N A ；t w of r a g m e n t sw e r e2 8 s r R N A ；o n ew a st r a n s l a t i o n i n i t i a t i o nf a c t o r ；o n ew a ss i m il a rt oD u g e s
12、 i aj a p o n i c ao j C l 9 3m R N A ，c a s p a s e l i k eg e n e3 ；o n e w a sh o m o l o g o u st oH s p 7 0g e n e ；o r l ew a sh o m o l o g o u st oH s p 9 0g e n e ；o n ew a ss i m i l a rt op a r t s e q u e n c eo fD u g e s i a j a p o n i c am R N Af o rD E A Db o xp r o t e i n ，t h es
13、i m i l a r i t yW a sa l s o10 0 ；t w o w e r em o s ts i m i l a rt ot h ec o m p l t eg e n o m eo fP o l a r o m o n a ss p J S 6 6 6 ；o n eW a sm o s ts i m i l a rt o S c h m i d t e am e d i t e r r a n e ac l o n eH 6 7 8 du n k n o w nm R N As e q u e n c e W h i l et h e r ew e r et w o f
14、r a g m e n t s ，w ec a n tf i n dt h e i rh o m o l o g o u ss e q u e n c e si nt h eG e n b a n k I na d d i t i o n ，w ec l o n e d p l a n a r i a n sH s p 7 0s e q u e n c e sf r o mn i n ed i f f e r e n tl o c a l t i o n s ，b a s e do nw h i c hw e c o n s t r u c t e dp h y l o g e n e t i
15、 ct r e eb yN Jm e t h o d T h er e s u l ts h o w e dt h eH s p 7 0p h y l o g e n e t i ct r e e w a sc o n s i s t e n tw i t h g e o g r a p h i c a lp o s i t i o n sa n dz o o g e o g r a p h i c a ld i v i s i o n s o ft h e f r e s h w a t e rp l a n a r i a n s F r e s h w a t e rp l a n a
16、r i a n sf r o mi n s t i t u t eo fa g r i c u l t u r es c i e n c e si nX i nC o u n t r y , Z h a i g o ua n dC h e n w a n d a q i a o x i ai nX iC o u n n ys h a r e dab r a n c h ，w h i c hi n f e r e dt h e yh a dac l o s e r e l a t i o n s h i p F r e s h w a t e rp l a n a r i a n sf r o mH u a i y u a n s ii nN a n y a n gC i t ya n dT o n g b a ii nN a n y a n g C i t yw e r eb o t hb e l o n gt ot h ed i s t r i c to fT o n g b a im o u n t a i n ，s h a r
