《中心实验室微生物基础知识(2016年)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《中心实验室微生物基础知识(2016年)（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、微生物基础知识培训 2016年8月 目录 CONTENTS 第一部 微生物基础知识 第二部 微生物的检验 第一部 微生物基础知识 微生物（microorganism, microbe）:是指存在于自然界的一大群形 体微小、结构简单、进化低级、肉眼直接看不见，必须借助光学显微 镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察到的微小 生物。 一、微生物的定义 体积小，面积大 个体微小，肉眼看不见，需用显微镜观察，细胞大小以微米和纳米计量。 吸收多，转化快 发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重100010000倍的乳糖 生长旺，繁殖快 在实验室培养条件下细菌几十分钟至几小时可以繁殖一代。 二、
2、微生物的特点 适应强，易变异 微生物对环境条件尤其是恶劣的“极端环境”有惊人的适应能力 ，堪称生物界之最。 最常见的变异形式是基因突变。 分布广，种类多 有高等生物的地方均有微生物生活，动植物不能生活的极端环境也有微生物存在。 在局部环境中数量众多，如每克土壤含微生物几千万至几亿个。 二、微生物的特点 三、微生物的分类 按其结构、化学组成及生活习性可分为: 原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。 如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体。 真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完 整。 如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类。 非细胞类:体积微小，
3、能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等。 按其致病性可分为: 病原性微生物 非病原性微生物 细菌基本一般结构：所有细菌都具有 细胞壁 、 细胞膜 、 细胞质 、细胞核 细菌的特殊结构：并非所有细菌都具有 荚膜：荚膜是某些细菌在细胞壁外包围的一层粘液性物质，一般由糖和多肽组成（如肺炎球菌、 脑膜炎球菌等）。荚膜能保护细菌作用，并对其他因子的侵害有一定抵抗力。 鞭毛：在某些细菌菌体上具有细长而弯曲的丝状物，称为鞭毛。鞭毛是细菌的运动器官。 菌毛：菌毛是许多革兰氏阴性菌菌体表面遍布的比鞭毛更为细、短、直、硬、多的丝状蛋白附属 器，也叫做纤毛。菌毛与运动无关。菌毛可分为普通菌毛和性菌毛两种。 芽胞：某些细
4、菌（芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌，少数球菌等）在其生长发育后期，在细胞内形成的 一个圆形或椭圆形，厚壁，含水量低，抗逆性强的休眠体构造，称为芽孢。 四、微生物的细胞结构 细菌的形态： 球状、杆状、螺旋状。 酵母菌的形态： 球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等。 霉菌的形态： 丝状。 病毒的形态： 球状、卵圆形、砖形、杆状、丝状、蝌蚪状等。 五、微生物的形态 菌落单位-CFU 由单个菌细胞或几个同种菌细胞在培养基上长成肉眼可见的菌落， 每个菌落就是1CFU 光滑型菌落 粗糙型菌落 菌落形态 五、微生物的形态结构 六、微生物的作用及危害 u微生物的作用 绝大多数微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业
5、、食品、医 药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常 生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。 u微生物的危害 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的 微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄 灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。 微生物的分布 生物体内外的微生物 土壤中的微生物 水中的微生物 空气中的微生物 极端环境下的微生物 七、微生物的分布 八、微生物的污染途径 n 空气 由于空气中所含微生物的沉降、 附着或被吸入而污染。 n 水 食品加工中，水不仅是微生物的污染源，也是微生物污染食品
6、的主要途径。 n 设备 各种加工机械设备本身没有微生物所需的营养物，当食品颗粒或汁液残留在其表面使微生物得以在 其上生长繁殖。这种设备在使用中会通过与食品的接触而污染食品。 n 原辅料 原辅料中的微生物一是来自于生活在原辅料体表与体内的微生物，二是在原辅料的生长收获、运 输、贮藏、处理过程中的二次污染。 n人员 健康人体的皮肤、头发、口腔、消化道、呼吸道 均带有许多微生物。由病原微生物引起疾病的患着体内 会有大量的病原微生物，它们可通过呼吸道和消化道向体外排出；人体接触食品就可能造成微生物的污染。 九、消毒与灭菌 下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：杀死物体上病源微生物的
7、方法,并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称 为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的 全部病原微生物和非病原微生物，繁殖体，芽孢。 消毒与灭菌常用的方法： 化学试剂灭菌 射线灭菌 干热灭菌 湿热灭菌 过滤除菌 第二部 微生物的检验 菌落总数 大肠菌群 霉菌和酵母 沙门氏菌 一、常见卫生指标及致病菌 志贺氏菌 金黄色葡萄球菌 单增李斯特氏菌 乳酸菌 二、菌落总数的测定 菌落的概念： 菌落（colony）是指细菌在固体培养基上经培养后生 长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物集落，它是 由数以万计的相同细菌集聚而成的。 菌落总数的定义： 样品经过处
8、理，在一定条件下培养后(如培养基成 分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得 1mL(g)检样中所含菌落的总数。所得结果包括一群在 方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧和兼性厌氧 菌。 卫生学意义： 菌落总数主要作为判定样品被污染程度的标志，也可 以应用这一方法观察样品中细菌的性质和繁殖的动态 ，以便对被检样品进行卫生学综合评价时提供科学依 据。 三、菌落总数的检验程序图 检样检样25g/（mL）+225mL稀释释液 10倍系列稀释释 选择选择23个适宜样样品匀液，各取1mL分别别加入无菌培养平皿内 每皿内加入适量培养基 (PCA) 菌落计计数 36 482h 报报告 检验方法 （定 量 ）
9、 GB 4789.2-2010 三、菌落总数的培养 l 及时将46 1的平板计数培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀， 琼脂凝固后，将平板翻转，361培养48h2h。 l 选取菌落数在30cfu300cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌 落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数，大于300cfu的可记录 为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 l 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平 板菌落数的平均值再将平均值乘以相应的稀释倍数，作为每g(ml)中 的菌落总数结果。 l 结果表示为7200CFU/mL或7.2103CFU/mL 四、金黄色葡萄球菌概述
10、 u金黄色葡萄球菌隶属于葡萄球菌属微球菌科， 是人类的一种重 要病原菌。 u金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的机会很多。美国疾 控中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠 杆菌。 u中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油 煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。 五、金黄色葡萄球菌危害及致病性 金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于 其产生的毒素和侵袭性酶： 溶血素：外毒素，分、四种，能损伤血小板，破坏溶酶体 ，引起肌体局部缺血和坏死； 杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞
11、； 血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中 的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球 菌形成的感染易局部化脓与此酶有关； 脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受 高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； 肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠 毒素。 六、金黄色葡萄球菌形态及基本特征 形态 与染色： 呈球形 ， 直径0.4 m1.2 m 繁殖时堆积成 为葡萄串状排列 革兰氏阳性菌 无芽胞 金黄色葡萄球菌的基本特性： 营养要求低,在普通培养基 中生长良好 需氧或兼性厌氧 能在pH4.2-9.3 之间 生 长( 最 适
12、pH 7.4) 耐盐性强 （10%15% ） 1045 可生 长( 最 适 温度 度 37) 对干燥有一定耐受性，对热敏感 七、金黄色葡萄球菌检验程序 检验方法 （定 性 ） GB 4789.10-2010第 一法 1. 样品增菌 7.5%氯化钠肉汤 2. 分离培养 Baird-Parker平板 血平板 3. 鉴定 染色镜检 血浆凝固酶试验 八、金黄色葡萄球菌培养特性 金黄色葡萄球菌 在Baird-Parker 平 板上， 菌 落直径为2mm 3 mm ， 颜色呈灰色到 黑色， 边缘为淡 色，周围为一混浊带 ， 在其外层有一透明圈。 l含有卵磷脂酶分解卵黄使蛋白质变性形成 沉淀环。 l脂酶分解
13、脂肪形成透明圈； l凝固酶阳性的葡萄球菌还能还原亚碲酸钾 形成碲而产生黑色菌落。 八、金黄色葡萄球菌培养特性 在血平板上，形成菌落较大， 圆形 、光滑凸起 、 湿润 、金黄色 （ 有时为白 色 ） ，菌落周围可 见完 全透明溶血圈 。 血琼脂 ：是一种基础培养基，含有5%的脱纤维血(羊 血 或兔血) 用于观察金黄色葡萄球菌的溶血现 象 。在 血琼脂平板上呈 血溶环。 镜检，接到BHI培养基中 进行培养，再做血浆凝固酶试验。 八、金黄色葡萄球菌培养特性 血浆凝固酶试验 取新 鲜配置兔血浆0.5 mL ，放入小试管 中 ，再 加入BHI 培养物0.2 mL 0.3 mL ，振荡摇匀 ， 置 36
14、1 温箱或水浴箱内 ， 每半小时观察 一 次 ， 观察6 h ， 如呈现凝固（ 即将试管倾斜或 倒置时 ，呈现凝块 ）或 凝固体积大于原体积的 一半 ，被判定为阳性结果 。 金黄色葡萄球菌的重要鉴定 ： 血 浆凝固酶试验原 理 ：致病性的金黄色葡萄球 菌产生的血浆凝固酶 ， 使血浆中 纤维蛋白原转 变为白蛋白 ， 附着于细菌表面产生凝固 。 九、金黄色葡萄球菌检验结果与报告 结果判定 ： Baird-Parker平板、血平板、染色镜检、血浆凝固酶试验均符 合，可判定为金黄色葡萄球菌。 结果报告 ：在25 g （ mL ）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。 报告方式： 检验项检验项 目结结果 金黄色葡萄球菌，/25g检检出 金黄色葡萄球菌，/25g未检检出 十、其他检验方法 图1 沙门氏菌检测结果图2 单核细胞增生李斯特氏菌检测结果 十、其他检验方法 图3 大肠菌群检测结果图4 大肠杆菌检测结果 十、其他检验方法 图3 微生物鉴定仪器 图2 soleris仪器 图1 测试片法 Thanks
