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1、型! 兰曼! ! ! ! ! ! 盟塑! ! 型曼! ! 生兰坚! 竺竺! 婴! ! ! ! ! ! ! g ! l 坚! 堡! ! ：里! ! ：! ：! ! 何颖，李经才，张杨，徐峰沈阳药科大学药学院( 沈阳1 1 0 0 1 6 ) 摘要 目的：研究褪黑索( m e l a t o n i n ，M T ) 对环磷酰胺( c y c l o p h o s f f , J a m i d e ，C Y ) 、地塞米松( d e x a m e t h a s o n e ， D E X ) 所致免疫低下的对抗作用。方法：在C Y 、D E X 处理的免疫低下动物模型均q 定脾指数及胸腺指
2、数、碳粒 廓清指数，抗体形成细胞及血清溶血素水平，迟发超敏反应，淋巴细胞增殖能力。结果：对于C Y 所致免疫低F 小鼠，M T 能显著井高脾指数及胸腺指数，提高碳粒廓清能力，促进血清溶血素生成，增强抗体形成细胞溶血能 力。M T 能明显促进D E X 处理小鼠的迟发超敏反应。体外实验，M T 可显著增强C Y 处理小鼠的脾淋巴细胞增殪 反应，呈剂量依赖性。绪沦M T 对C Y 、D E X 所致免疫低下有对抗作用，使免疫功能部分或全部恢复正常。 关睦词褪黑素：对抗作用；免疫低下；环磷酰胺；地塞米松 C o u n t e r a c l i o no t m d a t o n i n 蚰n
3、豫如佃哪m k m 氆商呲i n d u c e db ye y d o p h o s p i m l i d ea n d t l e x a n l e l t l 吣o n e H e Y m g ，L i J i n g e a i ，2 h a n g Y a n g ，X u F e n g ( S c h o o l o fP l 】印m 叫，S h e n y a n g P h a r m a c e u l i c a l U n i v e r s i t y ，S h e n y a n g1 1 0 0 1 6 ) A h s l r a c t ：O b j e
4、c t i v e ：T os t u d y t h ec o u n t e r 枷o no fm e l a t o n i n ( M r ) t h ei m m n 曲口疏i n d u c e db y c y c l o p h o s p h 删d e ( C Y ) a r d d e S E X ) M e t h o d s ：I n 6 a e a n i m a l m o d e l s o f i m m u n o d e l r r _ e s s i o n i n d u c e d b y C Y a n d D E ( ，t h es p l e e
5、 na n d t h y m u s i n d e x ，t h e d a 日n c e r a t e o f c h a r l c o o 1 p 碰c l e s 。t h e l e v e l s o f s p l e e n p l a q u e f o r m i n g c e l l s a n d s e r u m h e m o l y s i n ，t h e d e l a y e dh ) p 强刎“哆( D T H ) r e a c t i o n a n d t l a e a b i h 时o f l y m p h o c y t e t x
6、 o l i f e r a t i o n w e a e m e a s t w e d R e s u l t s ：N r rs i g n i t i c a a t l y i n c r e a s e d t h e , s p l e e na n d t h y m u s i n d e x , t h e c l e a r a n c er a t e o f c h a r c o a l p l i c l e s ，t h e 珊o d u c l J o r l o f s e n l mh e m o l y s i na n da n u t 呻f o n
7、 n a l i o f 印曩e 球) c y t e si nC Y - i n d u c e di n , m u n o s a p l t e s s i v em i c e M Ta l s or e m a r k a b l y e i i h a l K ：e d c r I H r l j t c t i o r l i n D E X - t r e a t e dr r I i o BI n v i t r o , M r 曲b l v i n c r e a s e d t h e l y , 蛳y t e p r o l i f e a a t i o r t o
8、 f s p l e e n c e l l s o fC Y - U e a t e dm i c ei nac o n c e n t r a l i o n - d e p e n d e n tm C o n c l u s i o n ：盯c o u l dc c u n t e a a c tt h ei m m u n o d e p r e s s i o n i n d u c e d b y C Y a n d D E ) ( a n d i n c o m p ! e 屺l y o r c o m p I 鲥y r e s t 堪e t i l e i m m u n e
9、 f l 1 枷o n s t o t h e n o r m a l l e v e l s K e yw o r d s M e l a t o n i n ；C o u n t e a “ a c l J o n ：l m I I 】1 0 匏p 蜷函；啡1 0 p I 甲h 锄i d e ；D e x 棚w 蚰韬讲静 褪黑素( m e l a t o n i n ，M T ) 是由松果腺分泌的内分泌激素，其功能主要是调节内环境稳态。近年来，松果腺 M T 的神经内分泌及免疫调节日益受到众多学者的关注“2 o 本实验室以往的研究显示。M T 具有广泛的兔疫促进 作用。本文考察了补充松果腺
10、激素M T 对环磷酰胺、地塞米松所致免疫低F 的对抗作用。 1 奉 料与方法 1 1 材料 1 1 1 实验动物昆明种小鼠，体重2 0 一2 2 9 。5 6 周龄j 动物置于室温( 2 2 1 ) 、相对湿度( 5 5 5 ) 的环境中，自由摄食、饮水；豚鼠，4 唪重4 0 0 5 0 0 9 。均由沈阳药科大学实验动物电C 提供。 1 1 2 药品与主要试剂褪黑素( m e l a t o n i n ，M T ) ，S I G M A 公司产品，用无水乙醇溶解，临用时用生理盐水稀释； 环磷酰胺( c y c l o p h o s p h a m i d e ，C Y ) ，上海华联制药
11、公司产品；地塞米松( d e x a m e t l a a s o n e ，D E X ) ，江苏连云港东 风制药总厂产品：刀豆球蛋白A ( c o n c a m m l i n A ，C o n A ) ，S I G M A 公司产品；R P M l l 6 4 0 培养液，瓜S C I E N I 啊C 公司产品：四甲基偶氢脞蓝( M T r ) ，J A N S S E NC H I C A 公司产品：印度墨汁，北京硬中化工厂产品，使用前 摇匀，用生理盐水按照1 ：5 稀释，经超声波发生器处理2 m i n ，3 0 0 0 r r a i n 离心1 5 r a i n ，弃去沉
12、淀使用；绵羊红细 2 0 0 4 全国时间生物医学学术会议( 海口蒂1 2 月38 日) 胞( S R B C ) ，沈阳前进生化试剂J 产品，保存于2 倍体积的d g e v e r s 液中，置于4 冰箱内，临用时用生理盐水 洗至b 箭夜无色，配成所需浓度的S R B C 悬液；补体，取豚鼠新鲜血清，加入压积的S R B C ( V ：v = 5 ：1 ) ，于4 。C 冰箱中放置3 0 r a i n 后取出，2 0 0 0 r r a i n 离心1 0 m i n ，取L 清血清于- 2 0 保存，I 赫用时用生理盐水配成所需浓度。 1 2 方法 1 2 1 脾指数、胸腺指数的测定“
13、小鼠称重后脱颈处死，取脾脏、胸腺，称其湿重，计算脾指数和胸腺指数。脾 指数= 脾重，体重，胸隙指数胸腺重，体重。 12 2 碳粒廓清实g 秽小鼠尾静脉i v 印度墨 十1 0 m l k g 体重，于注射后1 ( t I ) 及5 ( t 2 ) m i n 从眼眶静脉丛各取 血2 0 p l ，溶于2 m lI N a C 0 3 溶液中，用7 2 1 分光光度计于6 8 0 n m 处测吸收度，并取小鼠肝、脾称其湿重，计 算廓清指数K 及吞噬指数a 。l ( - 0 9 A l - l g A 9 ( t 2 - t 1 ) ，Q = K ”体重，( 肝重 脾蓟。 1 2 3 抗体形成细胞
14、( P F C ) 溶血实裂1 致敏：末次给药前3 d 每只小鼠i p 3 ：5 ( V ，v ) S R B C 悬液0 2 m l 。末次 给药后2 4 h 将小鼠脱颈处死，取适量脾脏匀浆，用p H 7 4 的磷酸盐缓冲液( P B S ) 洗脾细胞2 次，1 0 0 0 r m i n 离 心1 0 m i n ，悬浮脾细胞( 1 5 m g 脾m l P B S ) 。取该脾细胞悬液、0 2 S R B C 悬液和1 ：5 0 豚鼠血清备1m l ，混匀， 作为测定管。另设不加样品的空白对照管。于3 7 温育1 h ，3 0 0 0 r m i n 离心5 m i n 。吸取E 清液，
15、用7 2 1 分光光 度计于4 1 3 a m 处澳I 吸收度，以空白对照管校正零点。实验结果以吸收度表示。 1 2 4 血清溶血素的测定“小随改敏同1 2 3 。末次给药后2 4 h ，摘除小鼠日球取血，按照1 ：5 0 0 稀释血清。取此 血清样品1m l 于冰水浴中自t b x 1 0 S R B C 悬液0 5m l 及1 ：1 0 稀释的豚鼠血清lI I l l ，作为测定管。另设不加血清 样品而以生理盐水代替的空白对照管。于3 7 温育1 0 m i n ，冰浴终止反应。2 0 0 0 r m i n 离心1 0 m i n ，取E 清液l 珊加都P 昏i 浏3m l ，混匀，放置
16、1 0m i n ，用分光光度计于5 4 0m 处测吸收度，以空白对照管校正零点。另取 1 0 S R B C 悬液0 2 5 I l 】l ，加都氏试剂至4 m l ，摇匀，放置1 0 m i n ，于5 4 0 n m 处测吸收度，该吸收度即为样品使 S R B C 半数溶血时的吸收度。实验结果以样品的半数溶衄值H c 5 0 表示，H C s o = ( 样品的吸收度样品使S R B C 半 数溶血时的吸收度) X 稀释倍数( 5 0 0 ) 。 1 2 5 迟岌超敏( I Y r H ) 反膨”小鼠左懊足垫s c1 0 S R B C 悬液0 0 5 m l 致敏，5 d 后右侧足垫s c 5 S R I 悬液 0 0 5 m l 攻击，2 4 h 后将小鼠脱颈处死，用外径千分尺分别测量双足足垫厚度，计算厚度差( 即肿胀度) 。 1 2 6 淋巴细胞增殖实验8 将
