《血栓调节素活化蛋白c内皮细胞蛋白c受体系统抗炎症作用研究进展》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血栓调节素活化蛋白c内皮细胞蛋白c受体系统抗炎症作用研究进展（123页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、上海交通大学 博士学位论文 血栓调节素-活化蛋白C-内皮细胞蛋白C受体系统抗炎症作用研 究进展 姓名：陈平 申请学位级别：博士 专业：内科学（消化系疾病） 指导教师：袁耀宗 20070210 上海交通大学医学院博士学位论文 7 英文缩写索引英文缩写索引 缩写缩写 英文全称英文全称 中文全称中文全称 APC Activated protein C 活化蛋白 C APTT Activated partial thromboplastin time 活化部分凝血活酶时间 BCA Bicinchonini acid 二喹啉甲酸 BF Blood flow 血流量 BSA Bovine serum al
2、bumin 小牛血清白蛋白 BV Blood volume 血容量 CRP C reactive protein C 反应蛋白 CT Computed tomography 计算机断层扫描 DAB Diaminobenzidine 二氨基联苯胺 DEPC Diethyl Pyrocarbonate 碳酸二乙酯 DIC Disseminated intravascular coagulation 弥漫性血管内凝血 DMSO Dimethylsulfoxide 二甲亚砜 DTT DL-Dithiothreitol 二硫苏糖酸醇 EB Ethidium bromide 溴化乙锭 EDTA Ethyl
3、ene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸 ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附实验 EPCR Endothelial cell protein C receptor 内皮细胞蛋白 C 受体 ERK Extracellular signal-regulated kinase 细胞外信号调节激酶 上海交通大学医学院博士学位论文 8 FCM Flow cytomatry 流式细胞仪 FITC Fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 GAPDH Glyceraldehyde-3-phos
4、phate dehydrogenase甘油醛-3-磷酸脱氢酶 HAF Hepatic arterial fractio 肝动脉指数 HE Hematoxylin and Eosin 苏木精和伊红 HRP Horseradish Peroxidase 辣根过氧化物酶 HUVEC Human umbilical vein endothelium cell 人脐静脉血管内皮细胞 ICAM Intercellular adhesion molecule-1 细胞间黏附分子 IL Interleukin 白介素 JNK C-jun N-terminal kinase c-Jun N 端激酶 LPS Li
5、popolysaccharide 脂多糖 MAPK itogen activated protein kinases 丝裂原活化蛋白激酶 MCP-1 Monocyte chemoattractant protein-1 单核细胞趋化因子-1 MIP-1 Monocyte chemotactic protein 1 单核细胞炎症蛋白 1 MMP-9 Matrix metallo-proteinase 9 基质金属蛋白酶 9 MTT Methylthiazolyl tetrazolium assay 四甲基偶氮唑盐法 MTT Mean transit time 平均通过时间 NF-B Nuclea
6、r factor kappa B 核因子B PAGE Ployacrylamine gel electrophoresis 聚丙烯酰胺胶电泳 PAI-1 Plasminogen activator inhibitor-1 型纤溶酶原激活物抑制因 子 上海交通大学医学院博士学位论文 9 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PC Protein C 蛋白 C PCNA Proliferation Cell Nuclear Antigen 增殖细胞核抗原 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链扩增反应 PI Propidium Io
7、dide 碘化丙啶 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 PS Permeability surface 毛细血管表面通透系数 PT Prothrombin time 凝血酶原时间 RT Reverse-transcription 逆转录 SAP Severe acute pancreatitis 重症急性胰腺炎 SAPK Stress-activated protein kinase 应激活化蛋白激酶 SIRS System inflammatory reactive syndrome 全身炎症反应综合症 SDS Sodium dodecyl
8、sulfate 十二烷基磺酸钠 SSC Sodium citrate 柠檬酸三钠 TdT Terminal deoxynucleotidyl Transferase 脱氧核糖核苷酸末端转移酶 TAFI Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor 凝血酶活化的纤溶抑制剂 THP-1 Human acute monocytic leukemia cell line 单核细胞细胞系 TM Thrombomodulin 血栓调节素 TMD Tetramethyloctahydrochrysene 四甲基联苯胺 TNF Tumor necrosis facto
9、r- 肿瘤坏死因子 Tris Hydroxymethyl aminoethane 三羟甲基氨基甲烷 上海交通大学医学院博士学位论文 10 TUNEL TdT mediated dUTP nick end labelling 末端脱氧核苷酰转移酶原位 标记 VEGF Vascular endothelial cell growth factor 血管内皮细胞生成因子 vWF von Willebrand factor 血管性假血友病因子 1 上海交通大学上海交通大学 学位论文原创性声明学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中
10、已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。 对本 文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 2 上海交通大学上海交通大学 学位论文版权使用授权书学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。 本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密保
11、密，在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密 不保密。 （请在以上方框内打“”） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 上海交通大学医学院博士学位论文 1 活化蛋白 C 对重症急性胰腺炎疗效及机制的研究 摘 要 目的 通过建立脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）凋亡模型，观 察活化蛋白 C(APC)的疗效及机制。通过建立重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型，观察 APC 治疗 SAP 的疗效， 进而了解蛋白 C 途径主要成分表达水平和丝裂原活化蛋白激 酶(MAPKs)信号通路主要激酶的影响及后续炎症介质的变化。 观察 SAP 时
12、肝脏的血 流动力学表现以及 APC 的应用对其的调节作用。最终，为今后该药物的临床应用提 供可能的理论依据。 方法方法 1. 将培养成功的 HUVECs 通过 LPS 1g/ml 诱导凋亡模型，并给予 APC （10ng/ml 或 50ng/ml）设立治疗组及对照组。通过形态学和分子生物学方法观察细 胞凋亡及增殖变化。另外，同时测定相关凋亡基因的表达。 2. SD 大鼠随机分为：对照组、SAP 组、SAP+注射溶媒组、不同剂量 APC 治疗 组（10g/kg, 50g/kg） 。于造模后 16 小时取材，观察各组凝血指标（PT、APTT、 vWF、D 二聚体）水平、胰腺损伤程度（组织学改变、湿
13、/干重系数、血清淀粉酶、 TNF-、IL-8、CRP 水平）及动物生存率等指标。 3. SD 大鼠随机分为： SAP 组、不同剂量 APC 治疗组（10g/kg, 50g/kg） 、 对照组，于造模后 16 小时取材。 测定胰腺组织基质金属蛋白酶 9（MMP-9） ，血栓调节素（TM）和内皮细胞 蛋白 C 受体（EPCR）mRNA 和蛋白表达。 基因芯片筛选胰腺组织 MAPKs 信号通路基因表达， Real-time PCR 和 Western blot 验证该通路中胞外信号调节激酶(ERK1/2)、 c-Jun N 端激酶(JNK)/应激活化蛋白 激酶(SAPK)、p38MAPK mRNA
14、和蛋白的变化。同时检测胰腺组织 TNF- 和 IL-1 蛋白水平。 上海交通大学医学院博士学位论文 2 动态观察各组大鼠局部肝血流量 （BF） 、 血容量 （BV） 、 平均通过时间 （MTT） 、 毛细血管表面通透系数（PS）和肝动脉指数（PAF） ，24 小时处死动物行肝脏和胰腺 组织学观察。 结果 1. LPS 组细胞可见明显的凋亡现象，而通过 APC 治疗的细胞凋亡改变显著减轻 和细胞凋亡率下降，细胞存活率和 PCNA 表达率增高，尤其在 50ng/ml 时，与 LPS 组细胞比较有显著差异 （P 0.05) （见图 1-7）。 A C D B 上海交通大学医学院博士学位论文 27 0
15、 5 10 15 20 25 30 ABCD Apoptosis rate 图1-7. Annexin V / PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡散点图及各组凋亡率 Figure 1-7. Scattergram of cell apoptotic expression by Annexin V / PI double staining and apoptotic rate in HUVECs with each group A, LPS 1g/ml group; B, Control group; C, LPS 1g/ml + APC 10ng/ml treated group；D, LPS
16、1g/ml + APC 50ng/ml treated group vs A： P 0.05) （见图1-7）。 A B CD -actin （42 kD） PNCA （17 kD） 上海交通大学医学院博士学位论文 28 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 ABCD Levels of PCNA protein 图1-8. Western blot测定各组细胞PCNA和-actin蛋白表达及PCNA表达水平 Figure 1-8. Representative western blot of proteins in HUVECs were detected with PCNA, -actin antibodies in each group. Graph showed the levels of PCNA protein expression (measured the ratio of PCNA to-actin
