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1、回复专家审稿人的问题： 问题1、本文的实验方法部分和结果部分不太一致，比如在实验设计中提到右美有三个剂量，但是在实验方法中仅仅提到了两个剂量，结果的表格中也仅有两个剂量 答：非常感谢老师的提醒，实验中的确设立了三种浓度，小剂量右美托咪定未见效果，提高至中等剂量后仍未有效果，大剂量才出现差异。故本打算中等剂量的结果就仅文字描述，表格内不呈现。 现已根据老师的提醒，完善了实验方法和表格。问题2、被动逃避实验测试的是动物对点击的记忆能力，由于遭到点击，对然老鼠喜欢到暗箱，但是由于记住了到了暗箱就会遭到电击，因此其进入暗箱的潜伏期延长了，但是给了大剂量的右美之后，这种记忆被破坏了，它明明知道进入暗箱要
2、遭到点击但还是毫不犹豫的进去了，如此说来这应该不是保护作用，是对记忆能力的破坏作用才对，请作者给出进一步的解释。答：很同意的老师的观点，被动躲避实验一般是测量小鼠记忆巩固的一个重要工具。伤害性记忆的存在才导致了小鼠的躲避行为。应激本身是个体的一种适应性、保护性机制，但伤害性刺激越强，对应激事件过度回避、过度害怕可能对个体带来更多的负面影响。这种学习就会导致病态的记忆。创伤后应激障碍就是典型的案例，其通常会导致个体正常认知能力的下降。刺激强度越大，个体对此伤害性记忆越深刻，容易出现记忆的泛化，本研究中电击强度为0.8mA，持续2s，此种强度的刺激在其他研究报道中也曾用来制造创伤后应激障碍模型的小
3、鼠【1】。所以本研究中所希望设立的应激是强烈的，容易产生导致负面影响的记忆。本实验中大剂量右美托咪定组小鼠较其他各组小鼠进入暗箱的潜伏期是缩短的（7414s），但较基础训练值（174s）还是升高明显，所以说，该组小鼠还是获取了该伤害性记忆（暗箱内有过电击），但减弱了过度恐惧、过度回避的反应。所以本研究中认为右美托咪定减弱了它们的恐惧反应，产生了保护作用。问题3、这里应该的右美和丙泊酚远远大于临床剂量，请给出应用该剂量的原因。由于剂量很大，动物的血流动力学可能受到影响，比如血压下降，呼吸抑制等，这些因素是否具有影响，应该进行讨论。答：非常感谢老师的指导。曾有文献报道右美托咪定对大鼠被动回避及水迷
4、宫中认知测试的影响，其中右美的最大剂量达到300ug/kg【2】；来自一篇大鼠实验文献中，右美剂量范围为1-500ug/kg，文献中均未报道有关心血管意外事件【3】。我们起始剂量选择为50ug/kg，发现小鼠的镇静程度较低，无记忆遗忘的效果，故加大剂量。本研究中的剂量偏大，很遗憾的是，我们没有对小鼠进行监测，但实验中未出现不良事件。文献报道，丙泊酚对小鼠麻醉的ED50为140mg/kg，ED95为200mg/kg【4】；关于丙泊酚对AD小鼠的影响中，丙泊酚剂量为200mg/kg【5】。本研究中丙泊酚的剂量选择同样也是在其麻醉剂量范围内。根据老师的建议，在讨论中添加了对血流动力学影响的讨论。问题
5、4、加引本刊文献1篇窗体底端答：根据要求，参考文献6 引用了贵刊的文献。【1】Anu Joseph, et al. Temporal association of elevated cholecystokininergic tone and adolescent trauma is critical for posttraumatic stress disorder-like behavior in adult mice.PNAS;2013.110(16):6589-6594.【2】Sirvio J, et al. The effects of dexmedetomidine, an alph
6、a 2 agonist, on learning and memory, assessed using passive avoidance and water maze tasks in rats.Neuropharmacology.1992.31(2):163-8. 【3】Bradford C.R, et al. Role of serotonergic meurotransmission in the hypnotic response to dexmedetomidine, an 2-adrenoceptor agonist. Euorpean J Pharmacology.1996(3
7、06):51-59.【4】M.Irifune, et al. Propofol anesthesia in mice is potentiated by muscimol and reversed by bicuculline. British Journal of Anesthesia.1999;83(4):65-7.【5】Zhang YY, et al. Anesthetic propofol attenuates the isoflurane induced caspase-3 activation and A oligomerization.Plos one.2011.6(11).比较
8、右美托咪定和丙泊酚对小鼠伤害性记忆的影响唐玲 作者单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院麻醉科 上海市瑞金二路197号6号楼麻醉科 邮编：200025 康瑜 庄蕾 于布为 薛庆生 通信作者：薛庆生，邮箱， 基金项目：国家自然科学科学基金资助项目（81301185） 摘要 目的 研究比较右美托咪定和丙泊酚对小鼠伤害性记忆的作用，探讨可能存在的机制。 方法 将C57BL/6J成年小鼠随机分为3组，右美托咪定组、丙泊酚组和生理盐水组，每组小鼠815只。采用被动躲避实验建立小鼠的伤害性记忆研究模型，在记忆的巩固期分别给予药物处理，训练后24小时和1周测试小鼠的记忆功能，并采用western免疫印迹法检测
9、小鼠杏仁核区cAMP反应元件结合相关蛋白（cAMP-response element bingding protein, CREB）、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）的表达。 结果 被动躲避训练后24小时和1周测试，各组小鼠进入暗箱的潜伏期较其训练期的基础值显著升高。和丙泊酚及生理盐水组比较，大剂量右美托咪定（200ug/kg）组小鼠在被动躲避训练后24小时进入暗箱的潜伏期明显缩短（右美托咪定组 7414秒，生理盐水组 18638秒，丙泊酚组 14735秒，p0.05），对小鼠的短期伤害性记忆产生遗忘效应，而被动躲避训练后一周
10、所测定的长期伤害性记忆，两种药物和生理盐水对照组比较均没有显著差异。两种药物处理对小鼠的自主探索行为、运动能力无影响。被动躲避训练后2小时，右美托咪定组的小鼠的杏仁核区CREB磷酸化水平及BDNF含量较丙泊酚组和生理盐水组明显增高。 结论 大剂量右美托咪定影响短期伤害性记忆的巩固；而麻醉剂量丙泊酚对小鼠恐惧反应没有影响。BDNF-CREB通路可能参与了右美托咪定发挥遗忘作用的机制。 关键词 右美托咪定；丙泊酚；伤害性记忆；Comparison the effects of dexmedetomidine and propofol on the nociceptive memory of mic
11、eTANG Ling, KANG Yu, Zhuang Lei, Yu Bu Wei, XUE Qing Sheng. Department of Anesthesiology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiao Tong University school of Medicine, Shanghai 200025, ChinaCorresponding author：XUE Qing Sheng. E-mail： Abstract Objective To compare the effect between dexmedetomidine and propofo
12、l on the nociceptive memory and investigate their mechanisms. Methods Adult C57BL/6 mice were randomly divided into 3 groups (N=8 to 15):dexmedetomidine group, propofol group and control group. Each mouse was trained in the one-trial inhibitory avoidance apparent to form a nociceptive memory, during
13、 the consolidation, mice in different groups were treated with different drugs. the retention memory was evaluated 24 hours and 1week after training. The expression of CREB、BDNF in the amygdala was measured by Western blotting. Results The latency was increased significantly after the inhibitory avo
14、idance training in each group. Compared with propofol and saline group, high dose of dexmedetomidine(200ug/kg) has an amnesia effect, it can decreased the latency performance 24 hours after the training (dexmedetomidine group: 7414s, control group: 18638s, propofol group: 14735s, p0.05) ; One week a
15、fter the training , no difference among the three groups was observed. There was no significant difference in all groups in open field test. After 2 hours after training, the expressions of p-CREB and BDNF in amygdala of mice in high dose dexmedetomidine group were significantly higher than those in
16、 the propofol and saline group . Conclusion High dose of dexmedetomidine can interfere the consolidation of short term nociceptive memory; propofol has no effect on the nociceptive memory; dexmedetomidine promotes the expression of BDNF and p-CREB, which may be involved in the mechanism of the amnesia effect. Key words Dexm
