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1、S t u d y o nI n h i b i t o r yE f f e c ta n dM e c h a n i s m o fP E S Vo n H u m a nO v a r i a nC a n c e rC e l lL i n eS K O V 3 B y Y a n Z h a n g U n d e rt h eS u p e r v i s i o no f P r o f W e i d o n gZ h a n g AT h e s i sS u b m i t t e dt ot h e U n i v e r s i t y o fJ i n a n I
2、nP a r t i a lF u l f i l l m e n to ft h e R e q u i r e m e n t s F o rt h eM a s t e r D e g r e e o fM e d i c i n e U n i v e r s i t yo f J i n a n J i n a n ，S h a n d o n g ，P R C h i n a M a y ，2 0 1 2 ，IfIflf 研究生指导老师及课题小组成员介绍 指导老师简介： 张维东，女，1 9 5 2 年出生，研究员，硕士研究生导师，山东省肿瘤病理学会委 员。研究方向：主要从事环境病理
3、学，实验病理学和中药抗肿瘤的实验研究。对细胞 病理学、分子病理学理论与技术及肿瘤血管生成研究有深入研究和认识。在中西医结 合治疗肿瘤和中药抗肿瘤转移的作用及机制方面有较深入的研究。承担并完成国家自 然科学基金课题“蝎毒多肽提取物抑制非小细胞肺癌化疗期间肿瘤细胞再增殖机理研 究”( 项目编号：3 0 8 7 3 4 0 8 ) ，“蝎毒多肽提取物( P E S V ) 对肿瘤血管中H I F 。1 V E G F 通路的调控”( 项目编号：8 1 0 7 3 1 0 2 ) 等多项科研课题，发表论文5 0 余篇。 课题指导小组成员介绍： 武利存，男，1 9 6 2 年出生，副研究员，硕士研究生导
4、师，一直从事中西医结合 抗肿瘤转移及血管生长抑制剂的开发与实验治疗工作。参加国家自然基金课题、省自 然基金课题、省科委课题等科研课题1 0 余项。发表论文4 0 余篇。 崔亚洲，男，1 9 7 2 年出生，副研究员，硕士研究生导师，山东大学获博士学位。 主要从事肿瘤蛋白质组学研究，为主承担省重大科技专项“胰腺癌蛋白质组学研究与 开发”，针对胰腺癌等肿瘤开展生物标记物的研究。 王兆朋，男，1 9 7 6 年出生，硕士，助理研究员，主要从事实验病理学与分子生 物学方面的研究。 贾青，男，1 9 7 6 年出生，硕士，助理研究员，主要从事实验病理学与分子生 物学方面的研究。 张月英，女，1 9 8
5、0 年出生，硕士，助理研究员，主要从事实验病理学与分子生 物学方面的研究。 王朝霞，女，1 9 7 9 年出生，技师，主要从事实验病理学方面的研究。 i l 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论 文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本 文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标 明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：埠 日 期：上丑幺曼巫 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解济南大学有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留或向国家有关部门或
6、机构送交论文的复印件和电子版，允 许论文被查阅和借鉴；本人授权济南大学可以将学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复 制手段保存论文和汇编本学位论文。 口公开口保密(年，解密后应遵守此规定) 论文作者签名： 圣量鸳 导师签名： 日期：f 2 ：茎! 苎L 目录 摘要I I I A b a t r a c t V I 主要符号表X 前言1 日U吾1 材料和方法4 1 实验材料4 1 1 细胞株4 1 2 药物：4 1 3 主要试剂4 1 4 主要仪器5 1 5 主要试剂配制5 1 6 其他6 2 实验方法及步骤7 2 1 蝎毒多肽的质量标准及制作流程7 2 2
7、S K 0 v 3 细胞的培养8 2 3M T T 法检测P E S V 对S K O V 3 细胞增殖活性的影响9 2 4 流式细胞仪检测细胞周期9 2 5 免疫细胞化学法检测检测P E S V 对S K O V 3 细胞V E G F 、T S P 一1 、I d 一1 表达的 影响1 0 2 6S K O V 3 细胞蛋白的提取1 1 2 7W e s t e r nb l o t 检测P E S V 对S K O V 3 细胞V E G F 、T S P 1 、I d 1 蛋白表达的影响 11 2 8S K O V 3 细胞总R N A 提取1 3 2 9R T P C R 检测P E
8、 S V 对S K O V 3 细胞V E G F 、T S P 1 、I d 1 m R N A 表达的影响 1 z I 3 统计学方法1 5 结果1 6 1 蝎毒多肽对S K O V 3 细胞形态学的影响1 6 蝎毒多肽提取物对人卵巢癌S K O V 3 细胞的抑制作用及作用机制研究 2M T T 检测蝎毒多肽对S K O V 3 细胞增殖抑制作用1 6 3 蝎毒多肽对S K O V 3 细胞周期的影响1 6 4 蝎毒多肽对S K O V 3 细胞V E G F 、T S P 1 、I d 1 蛋白表达的影响17 4 1 免疫细胞化学法1 7 4 2W e s t e r nb l o t
9、 法1 7 5 蝎毒多肽对S K O V 3 细胞V E G F 、T S P 1 、I d 1 m R N A 表达的影响1 8 讨论1 9 一、P E S V 对S K O V 3 细胞的增殖抑制的作用1 9 二、P E S V 对S K O V 3 细胞增殖周期的影响2 0 三、P E S V 对S K O V 3 细胞内V E G F 、T S P 1 、I d 1 表达的影响一2 1 1 肿瘤血管生成2 1 2P E S V 抑制V E G F 对肿瘤血管生成的正调控作用2 2 3P E S V 增强T S P 1 对肿瘤血管生成的负调控作用2 3 4 P E S V 抑制I d 1
10、 对肿瘤增殖及血管生成的正调控作用2 4 5P E S V 对肿瘤血管及微环境正常化的影响2 5 附图2 7 参考文献3 5 综述4 0 攻读学位期间取得的研究成果4 7 一、在校期间发表的学术论文4 7 二、在校期间参加的项目4 7 致谢_ 4 8 宣 、参、0 济南大学硕士学位论文 蝎毒多肽提取物对人卵巢癌S K o V 3 细胞的抑制作用及作用机 制研究 专业：病理学与病理生理学 研究生：张妍 导师：张维东研究员 摘要 卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤，近年来其发病率和死亡率有缓慢上升趋 势。据最新统计，在女性生殖系统恶性肿瘤中卵巢癌发病率已从第三位上升到第二位， 由于大部分患者就诊时
11、已是临床晚期，其死亡率更是高居各类妇科肿瘤的首位。目前， 卵巢恶性肿瘤的标准治疗方案为肿瘤细胞减灭术联合以铂类为基础的辅助性化疗，五 年生存率仅为2 0 “ - - 2 5 左右，对女性生命仍存在严重威胁，如何控制卵巢癌的发 展以及寻找新的治疗方法，已成为目前重点研究课题。 肿瘤内部及周围的血管生成被认为是其增殖、转移的前提，因此，抑制肿瘤血管 生成对于控制肿瘤进展、改善预后和提高患者生存率具有十分重要的意义。中医治疗 肿瘤病症有着悠久的历史，蝎毒作为一种传统中药已被应用于多种疾病的治疗，它的 抗肿瘤作用也受到越来越多的重视。蝎毒多肽是从东亚钳蝎蝎毒中提取的一种多肽组 分，本研究组前期实验证实
12、解毒多肽对肝癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤具有抗血管生 成及抑制肿瘤生长、转移的作用，但目前蝎毒多肽对卵巢癌的具体作用及机制研究较 少。因此，本实验通过检测蝎毒多肽对卵巢癌细胞的增殖抑制作用、对细胞周期影响 以及血管生成过程中关键因子的表达，进一步探讨蝎毒多肽抑制人卵巢癌细胞的可能 作用机制。 目的： 观察蝎毒多肽提取物( P E S V ) 对人卵巢癌S K O V 3 细胞增殖的抑制作用和对细 胞周期的影响，以及P E S V 干预后S K O V 3 细胞中V E G F 、T S P 1 、I d - 1 蛋白及m R N A 蝎毒多肽提取物对人卵巢癌S K O V 3 细胞的抑制作用及作用机制研究 表达水平变化，揭示P E S V 抗肿瘤作用机制
