《蜜环菌优良菌株的筛选、鉴定及对乌天麻产量的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蜜环菌优良菌株的筛选、鉴定及对乌天麻产量的影响（50页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、吉林农业大学 硕士学位论文 蜜环菌优良菌株的筛选、鉴定及对乌天麻产量的影响 姓名：季宁 申请学位级别：硕士 专业：植物病理学 指导教师：李玉 20080601 蜜环菌优良菌株的筛选、鉴定及对乌天麻产量的影响 捅矍 蜜环菌是寄主范围广，致病能力强，世界性分布的重要病原菌。蜜环菌具有许多与众 不同的特性，它既能寄生，又能腐生，还可与天麻和猪苓共生。蜜环菌又是一种具有较高 经济价值的食药用菌。天麻为名贵药用植物，具有治疗d , J L 惊风，中风手足不遂，神经痛 等疾病的作用，特别是近几年来研究发现天麻具有抗老年痴呆等作用。天麻是一种植物却 没有根、叶的分化，因此它不能通过根吸收营养，不能进行光合作
2、用。天麻的生长发育必 须依赖于蜜环菌为其提供绝大部分的营养。因此培育提高天麻产量和质量的蜜环菌菌株对 生产优质天麻有重要的作用。 目前吉林省境内生产中天麻栽培主要是以红天麻和乌天麻为主。乌天麻又以形态好、 药用品质好、折干率高，因而经济价值可观。本实验对从天麻主要产区长白山地区采集的 野生蜜环菌和天麻进行分离纯化，共得到1 4 个蜜环菌菌株，从中筛选出性状优良的5 个菌 株，与长白山乌天麻进行伴栽试验。最终确定适合于长白山乌天麻生长的优良蜜环菌菌株， 并对其进行生物种鉴定。 本研究主要完成了以下工作，并得出相应的结论： l蜜环菌培养基的筛选。通过菌株心1 1 在不同培养基上培养特性观察及不同时
3、期菌体 生物量的测定，得出以下结论：蜜环菌在蛋白胨培养基上菌索萌发时间、满瓶时间都较短， 菌索发达，菌体生物量较高。因此在以快速培养蜜环菌菌株为目的时，可以选用蛋白胨培 养基。菌株心1 1 在P D A 培养基上培养，2 5 培养2 5 d 时菌体生物量较大，表明在P D A 培养基上蜜环菌生长稳定，老化速度慢，P D A 培养基适合作为蜜环菌菌种保存用。 2 蜜环菌优良菌株的筛选。通过对1 4 个蜜环菌菌株的固体培养特性、液体培养特性的研 究，初步筛选出5 个优良的蜜环菌( 菌株A r - 0 4 、A r 0 7 、A r 1 1 、A r - 1 3 、A r - 1 4 ) ，用于天
4、麻伴栽试验，进一步检验其优良特性。 3蜜环菌与乌天麻的伴栽试验，研究蜜环菌菌株对乌天麻产量的影响。将5 个菌株与对照 进行对比试验，试验结果表明：菌株心0 4 在两种试验方法中与对照都存在显著性( P 蛋白胨培养基 G P Y 培养基 麦麸培养基 P D A 培养基。 菌株A r - l l 在不同培养基上的菌索形态也不完全一致。菌索在培养基内生长并分化出 侧枝，在蛋白胨培养基和P D A 培养基上有大量毛刺状小侧枝出现，G P Y 培养基和麦麸培养 基上的菌索也有少量毛刺状小侧枝，而在玉米培养基上生长的菌索则没有这种现象：且在 玉米培养基菌落表面在菌丝生长一定时间后有水滴状晶体出现，并由白色
5、变为棕色，培养 后期培养基表面产生大量的褐色壳皮状物质。 2 2 3 2 菌体生物量的测定 吉林农业太 碗半位论文童H 菌优菌株的筛选鉴定及对乌 严量影响 1 4 12 1 0 o 8 蓦6 4 2 时问( d ) 田2 - 15 种培养基的菌体生桕量比较 F i 鲒- 1T h ec o m p a r i s o n s o f m y c e l i a b l o m a s s o i l f i v ec u l t u r e m e d i a + P D A 培养摹 一6 P Y 培养g 蛋白胨培养基 n 麦麸培养基 一玉米粉培养基 从图2 - 6 可以看到，5 种培养基中玉
6、米粉培养基在2 0 d 时苗体生物量达到最高为 1 1 7 9 5 9 i ，其次是蛋白胨培养基。麦麸培养基菌体生物置最低a 玉米粉培养基和蛋白胨培 养基在2 0 d 后苗体生物量缓慢下降，G P Y 培养基上，蜜环菌苗体衰亡较快。在P D A 培养基 上菌体生物量在2 5 d m f 达到最大为1 0 3 1 9 9 L ，后期菌体生物量缓慢下降r 衰亡较慢 2 3 蜜环菌固体培养特性研究 2 3 1 材料 2 3 1 1 试验菌株 供试材料见表2 - 1 。 2 3 1 2 培养基 蛋白胨综合培养基：马铃薯2 0 0 9 、葡萄糖2 0 8 、蛋白胨5g 、琼脂粉5 9 、磷酸二氢钾 3
7、9 、硫酸镁1 5 9 、水1 0 0 0 m L 、p H 自然。 2 3 2 研究方法 将配制好的蛋白胨综合培养基，1 2 1 下灭菌3 0 r a i n 在无菌条件下倒入无菌的直径 为9 0 m m 的培养皿中制成平扳，每皿倒入1 0 r a L 。将分离纯化得到】4 个蜜环菌苗株活化 l d 后，在平皿中接种，每个接种菌块大小相同，接种后在2 5 “ C 无光条件下进行恒温培养。 吉林农业大学硕士学位论文蜜环菌优良菌株的筛选、鉴定及对乌天麻产量的影响 每株蜜环菌菌株重复3 次。接种在平皿培养基上的蜜环菌菌株，每2 d 观察一次，时间为 2 0 天。观察蜜环菌在生长过程中的菌丝和菌索萌
8、发时间、菌索颜色、菌索形状、荧光强 弱等。 记录各菌株相对应的菌索萌发时间，当生长速度较快的菌株在培养基中菌索生长延伸 接近至培养皿边沿处时，测量各菌株生长速度最快菌索的长度，根据测量长度菌株培养 时间的比值，来计算菌索的平均生长速度。 记录菌株菌索顶端分叉情况( 有些菌株菌索顶端不分叉或分枝不多，为单轴分枝；有 些菌株菌索顶端在延伸时出现分叉，为二叉分枝) ，生长开始停滞，记录各菌株分枝多少 的情况以及菌索粗细情况，菌株固体培养特性性状描述见表2 5 。 表2 5 蜜环菌菌株固体培养特性性状描述 T a b l e 2 5D e s c r i p t i o no f t h eA r m
9、 i l l a r i aS t r a i n sg r o w i n gc h a r a c t e r sb ys o l i dc u l t u r e 2 3 3 结果与分析 本研究在天麻主要产区长白山地区采集到野生蜜环菌菌株，长有蜜环菌的母麻1 0 0 余 份标本，并成功分离纯化培养获得1 4 个蜜环菌菌株。通过对各菌株固体培养特性的观察， 结果表明不同的蜜环菌菌株它们的生长特性存在显著的差异。如菌索颜色有呈褐色、黄棕 色、白色三种颜色，菌索形状有圆柱或扁平两种，菌索顶端分又有单轴或二叉两种形式， 菌索的粗细及分枝也各不相同。不同蜜环菌菌株的培养特性观察结果，见表2 - 6
10、 。 本部分实验从1 0 个方面对蜜环菌菌株进行性状描述，从菌丝、菌索萌发时间来看， 蜜环菌菌株在菌丝、菌索萌发时间上差异较大。其中菌株心1 1 、心0 4 、缸1 3 、心1 4 菌株菌丝萌发时间最早，第2 d 菌丝开始萌发，其菌索萌发时间也最早；菌株触一0 1 、A t - 0 2 、 心一0 3 、心0 5 、A r 0 6 菌株在第4 d 菌丝开始萌发，菌索萌发时间也相对较晚。菌株A r 0 2 、 心0 4 菌索特别粗壮，分枝少，为单轴分枝。A r - 0 6 、A r 1 1 、m 1 3 、m 一1 4 菌株菌索粗 壮且分枝多，在菌索顶端极易分生侧枝，形似二叉状，为二叉分枝。在菌
11、索未萌发前，菌 株A r - 0 4 、A r 1 4 易产成乳白色绒毛状菌丝，且菌丝生长茂盛，菌索萌发后菌丝仍继续生 吉林农业大学硕士学位论文 蜜环菌优良菌株的筛选、鉴定及对乌天麻产量的影响 长，菌丝颜色不改变。菌株心1 1 菌丝形成较弱于前两者。其余1l 号蜜环菌菌株，只在 菌丝萌发初期有少量的乳白色绒毛状菌丝出现，菌丝生长缓慢且稀疏，生长后期部分茵丝 颜色改变为深褐色。 A r 一0 1A r 一0 2A r 一0 3A r - 0 4A t - 0 5A t - 0 6A r - 0 7A r - 0 8A r - 0 9A r 一1 0A r 一11A r 一1 2A r 一1 3A
12、 r 1 4 菌株号 图2 - 2 不同蜜环菌菌株菌索平均生长速度 F i 9 2 - 2A v e r a g eg r o w t hr a t eo fr h i z o m o r p h so fd i f f e r e n tA r m i l l a r i as t r a i n s 由图2 - 7 各蜜环菌菌索平均生长速度比较可以看到，A r 11 菌株生长最快平均生长速 度为6 5 1 m m d ，依次为菌株A t - 0 4 、A r 1 4 、A r 1 3 、A r - 0 8 、A r 0 7 生长速度较快。菌株 A r - 0 6 生长速度最慢为3 6 3
13、m m d 。 7 6 5 4 3 2 1 O p重一巡制霸 謇蚕言 米董 g 粼主勺 羹喜萎：耋董帮1 曰五、毫。 璃懿 翼惑霹翼磷臻霎霎霹羹震霎囊疆 奢1 葬霄1 羹薯霄凳奢并霄并符并1 奢1 斟1哥褂11 ：】：11 l 寸寸寸N寸寸 nnn n N n Nt “ q 十+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 英爨其娶娶馨奠囊翼铎 婿 囊鄙 爨鄂葵黎桑鼙其彝桑鄂英桑 最 枣凰匾犍凰缮凰挺国 丰 函谨匣堪匣姬亟 遐 睁迮 迢函 谴 爨凰 皿 固始极 妯逝褪羽遐般回避椒脚蜷椒 寝 跚驱槛 锄避槭 凹轻 她皿 湖驱椒 口皿 脚
14、送椒 邮皿 函寝锄寝函骡函謇函蒋孵回寝 国孵骥 锄皿 础孵 皿 函寝 寸一山 n 【山N 一= - J o 一- J 岔o - J o J 卜o - J 崞o - J 价o - J 寸o - J n o - J N o - J 一o - J 器c卫。一吾 aJogoN一盂幺 嘲赫辎求撩溜 c互。磊占 mjo暑。芑coIp J o rB一勺。otIol，二 懈龄双 求碧醉艇襁 口互_ 勺磊)Io一工卜 卫。99rI受 再桑般溜 。譬专 二。goZ一蔷 葵葭般飒 8 一o o 工o暮oz一受 印殛舔糨 l _ 1 1 1 _ 一 口。一芯c一星益 。旨oN互醋 p ) 垦 岔辎襁艇通 J o I
15、o o 一盘苟D笺 如骚 捻划祖 oZ一盘茨 伞骣卷粗 掣嚣半州拣磐蜂匝g蜷橱担昏触叵降心曲僻 罾泠窖_菩k燧吣唧絮坡鞠，蝌蜷餐娄粗碰$袒酶镪 议袋覃J扑嘲巨卅K黉博捶枢 吉林农业大学硕士学位论文蜜环菌优良菌株的筛选、鉴定及对鸟天麻产量的影响 2 4 蜜环菌液体培养特性研究 2 4 1 材料 2 4 1 1 试验菌株 供试材料见表2 1 。 2 4 1 2 培养基 同2 3 1 2 2 4 2 研究方法 2 421 摇瓶培养 于2 5 0 m L = _ 角烧瓶内装1 0 0 m L 液体培养基，高压常规灭菌后，每瓶接种约大小相同的 活化菌种3 块，置于2 59 C 恒温培养箱中静止培养2 4
16、 h 后，置于2 5 “ C ，以1 6 0r m i n 恒温培养摇 床中培养1 0 d 。观察菌球状态、荧光强弱。 2 4 2 2 菌球大小 随机取培养基中菌球3 0 “ - - 5 0 个置于培养皿中紧密排成一排，测量总直径，求出菌球平 均直径，重复3 次【7 8 1 。 2 。4 2 3 菌丝体干重 培养液用滤纸过滤后，菌丝用清水冲洗干净，置- z 6 0 * C 烘箱中烘至恒重，称重【7 8 】。 2 4 3 结果与分析 从表2 7 中可以看到，菌株A r - 1 2 菌球直径为2 0 m m 、菌球大小均匀多为刺球状、荧光 性较强，菌体生物量在液体培养第1 0 d 时达到最高值为1 2 1 5 9 L 。菌体生物量依次为菌株 A 卜1 1 、心0 7 、心0 9 、
