《端粒在皮肤光老化中的作用改善皮肤光老化的临床与基础》由会员分享，可在线阅读，更多相关《端粒在皮肤光老化中的作用改善皮肤光老化的临床与基础（26页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、<p><p>&lt;p&gt;&amp;lt;p&amp;gt;&amp;amp;lt;p&amp;amp;gt;南京医科大学第一附属医院皮肤科南京医科大学第一附属医院皮肤科 骆骆 丹丹 闵玮闵玮 高英英高英英 周炳荣周炳荣 -端粒在皮肤光老化中的作用 - -改善皮肤光老化的临床与基础改善皮肤光老化的临床与基础 1.1.研究背景研究背景 &amp;amp;amp;#216;&amp;amp;amp;#216; 光老化光老化：在内
2、源性老化的基础 上加之环境因素（主要为紫外 线辐射）的损害而发生的外源 性老化，临床上表现为提前出 现更加严重的老化表现。 PH 端粒与光老化端粒与光老化 空白组组1 UVA组组 8-MOP+UVA组组 空白组组 UVA 8-MOP+UVA 8-MOP+UVA 照光三个月照光三个月 的小鼠皮肤的小鼠皮肤 光老化皮肤的动物模型观察光损伤作用光老化皮肤的动物模型观察光损伤作用 照光照光7d7d后各组细胞超微结构后各组细胞超微结构 8-MOP+UVA组细胞出现了明显的细胞衰老改变:胞浆中可见较多空泡，细胞核中可见较多 絮状物,核仁不清晰，局部出现核膜内褶,核内染色质凝集且分布不均。线粒体肿胀、粗面内
3、 质网扩张,脱颗粒，可见较多次级溶酶体。 8000&amp;amp;amp;#215; 8000&amp;amp;amp;#215; 8-MOP+UVA8-MOP+UVA组组 15000 &amp;amp;amp;#215;15000 &amp;amp;amp;#215; 8000&amp;amp;amp;#215; 8000&amp;amp;amp;#215; UVAUVA组组 15000 &amp;amp;amp;#215;15000 &amp;amp;amp;#
4、215; 8000&amp;amp;amp;#215; 8000&amp;amp;amp;#215; 8-MOP8-MOP组组 15000 &amp;amp;amp;#215;15000 &amp;amp;amp;#215;8000&amp;amp;amp;#215; 8000&amp;amp;amp;#215; 对照组对照组 15000 &amp;amp;amp;#215;15000 &amp;amp;amp;#215; &amp;amp;amp;#
5、216;&amp;amp;amp;#216; 端粒结构特点端粒结构特点-光损伤易感性：光损伤易感性： 光老化中紫外线引起的基因的氧化应激损伤，大部分情 况下发生在鸟嘌呤残基；端粒的重复序列TTAGGG二 分之一是鸟嘌呤残基且3末端也富含鸟嘌呤。 -TTAGGG-TTAGGG-结构结构 2.2.端粒与光老化端粒与光老化 &amp;amp;amp;#216;&amp;amp;amp;#216; NB-UVBNB-UVB和和PUVAPUVA：临床上光疗法（治银屑病、白癜风 ）的主要副作用之一是皮肤易出现光老化外观 &amp;amp;am
6、p;#216;&amp;amp;amp;#216; 光老化模型：光老化模型： 已联合利用8-MOP+ UVA建立小鼠皮肤光 老化模型， 在此基础上利用人皮肤成纤维细胞经相同处理建 立体外光老化模型 n n 内源性老化中的端粒缩短机制内源性老化中的端粒缩短机制 n n 1.1.是否是否参与紫外线辐射引起的光老化？ n n 2 2.光老化进程中光损伤是如何加快端粒缩短的？ 研究内容研究内容实验流程实验流程 对照组对照组 8-MOP8-MOP组组 oror 8-MOP+UVA8-MOP+UVA UVAUVA组组 MTT法检测 细胞活性绘制 细胞生长抑制 曲线 流式细胞术 检测细胞 周
7、期分布 透射电镜 观察细胞 超微结构 细胞化学酶 法检测-半 乳糖苷酶 处理后24h，48h, 72h, 7d 分光光度法 检测细胞内 氧化应激损伤 水平 ：MDA, SOD及T-AOC 免疫荧光检测 细胞内氧化 光产物 8-oxo-dG Real-Time PCR检测端 粒的相对长 度：T/S Western Blot 检测细胞老化 相关蛋白P53, P21WAF-1及 P16INK-4a 药物组药物组 1.1.各组细胞照光处理后各时间段细胞半乳糖苷酶阳性率各组细胞照光处理后各时间段细胞半乳糖苷酶阳性率 对照组 8-MOP组 UVA组 8-MOP+UVA组 照光后24h、48h、72h及7d
8、后8-MOP+UVA联合处理组SA-Gal 阳性细胞比例较对照组均明显增高（*P0.01）， 且随时间积累而逐渐增高（r=0.988)。 结论： 8-MOP+UVA联合作用可使皮肤FB出现光老化生物学特性改变 SA-Gal 电镜电镜 2. 2. 照光后照光后2h2h各组细胞光产物各组细胞光产物8-oxo-dG8-oxo-dG8-8-羟基脱氧鸟嘌呤羟基脱氧鸟嘌呤 对照组对照组 UVAUVA组组 * * 8-MOP+UVA组8-oxo-dG阳性 细胞核比例明显高于对照组（ *P0.01 ）；UVA组8- oxo-dG阳性细胞核比例也明显 高于对照组（*P0.05 ） 3. Real-Time PC
9、R3. Real-Time PCR检测各组细胞端粒相对长度比较检测各组细胞端粒相对长度比较 8-MOP+UVA联合处理组端粒相对长度明显短于对照组（2.57&amp;amp;amp;#177;0.05 vs 6.63&amp;amp;amp;#177;0.12，P0.01）UVA照射组（4.59&amp;amp;amp;#177;0.07 vs 6.63&amp;amp;amp;#177;0.12, ） 8-MOP+UVA联合处理组（2.57&amp;amp;amp;#177;0.05 vs 4.59&am
10、p;amp;amp;amp;#177;0.07）端粒相对长度 经t检验比较均短于对照组（P0.05） * * 4. WB 4. WB 检测各组细胞老化相关蛋白表达水平检测各组细胞老化相关蛋白表达水平 各组老化相关蛋白表达水平比较 8-MOP+UVA联合处理组P53, P21WAF-1 及 P16INK-4a蛋白 表达水平明显高于对照组（P值均0.01），而UVA辐射组相关蛋 白水平也有明显增高（P值均0.05），8-MOP+UVA联合处理 组及UVA照射组两组间经t检验比较，前者相应蛋白表达水平 均高于后者（P值均0.05）。 讨讨 论论 &amp;amp;amp;#216;在
11、UVA照射下，外源性光敏剂8-MOP使细胞的基因氧化应激损 伤显著加重，产生大量氧化光产物8-oxo-dG ；oxodeoxyguanosine &amp;amp;amp;#216;8-MOP+UVA联合作用后，细胞端粒结构上由于较多氧化光产 物的产生，使其端粒缩加速，提前到达临界长度； &amp;amp;amp;#216; 8-MOP+UVA联合作用后由于端粒缩短加速，提前激活P53老 化检查点，并依次激活下游信号蛋白-细胞周期激酶抑制剂 P21WAF-1 及 P16INK-4a蛋白，相应蛋白表达水平明显增高； &amp;amp;amp;#21
12、6; 综上所述： 8-MOP+UVA联合作用可导致基因的氧化应激损 伤，端粒受损严重，缩短加速，并激活老化相关蛋白表达。 3. 3. 药物药物- -端粒端粒- -光老化光老化 1. 1. GS-Rg1GS-Rg1有效降低老化特征酶有效降低老化特征酶-半乳糖苷酶表达半乳糖苷酶表达 各组细胞各组细胞照光后相应时间点照光后相应时间点SA-GalSA-Gal 及及8-oxo-dG8-oxo-dG表达水平表达水平 GS-Rg1各浓度干预组基因氧 化产物8-oxo-dG及SA-Gal阳 性率均明显低于光老化模型组 （P0.05）且与药物剂量负相 关（r值依次为0.968, 0.943）。 * * * 3.
13、 3. GS-Rg1GS-Rg1显著减缓端粒缩短显著减缓端粒缩短 各组细胞于照光后第7日端粒长度比较 GS-Rg1各浓度干预组端粒相对长度（2.57&amp;amp;amp;#177;0.05） 明显长于8-MOP+UVA联合处理组（6.63&amp;amp;amp;#177;0.12，P0.01）， 且各浓度组之间端粒相对长度与GS-Rg1浓度有明显的正相关， 表现出一定的剂量依赖性（P0.05） * * * 4. 4. GS-Rg1GS-Rg1显著降低老化相关蛋白的表达水平显著降低老化相关蛋白的表达水平 -Actin-Actin P53P53 P21P21W
14、AF-1 WAF-1 P16P16INK-4a INK-4a 照光后第7日老化相关蛋白表达水平 GS-Rg1各浓度干预组老化相关蛋白 P53, P21WAF-1 及 P16INK-4a的表达 水平明显低于8-MOP+UVA组 （P值均0.01），且各浓度组之间 蛋白表达水平与GS-Rg1药物浓度有 明显的负相关 (r1=0.981，r2=0.916，r3=0.914)。 &amp;amp;amp;#216;GS-Rg1预处理的人真皮成纤维细胞显示出较强的氧化应激耐 受性，细胞内基因氧化产物8-oxo-dG产生明显减少； &amp;amp;amp;#216;GS-
15、Rg1预处理的细胞端粒结构中相应碱基损伤较光老化模型 组明显减弱，端粒结构稳定性加强，端粒缩短减缓； &amp;amp;amp;#216; GS-Rg1预处理的细胞由于端粒缩短减缓，其对老化检查点的 激活受抑制，老化相关蛋白表达水平明显降低； &amp;amp;amp;#216; 综上所述：GS-Rg1预处理可阻止基因损伤后对细胞老化P53 检查点的激活，抑制其后细胞周期激酶抑制剂P21WAF-1 及 P16INK-4a的表达，减弱两者对细胞周期激酶CDK的抑制作用， 使得CDK得以和核因子Rb蛋白结合，Rb蛋白磷酸后促进细胞 生长周期相关基因进行转录，使得细胞
16、恢复分裂活性。 讨讨 论论 1 1、黄芩苷对、黄芩苷对UVAUVA辐射后辐射后-半乳糖苷酶阳性细胞比率的影响半乳糖苷酶阳性细胞比率的影响 黄芩苷黄芩苷对端粒缩短及光老化的影响对端粒缩短及光老化的影响 2. 2. 黄芩苷对黄芩苷对UVAUVA辐射后细胞端粒长度的影响辐射后细胞端粒长度的影响 3. 3. 黄芩苷对黄芩苷对UVAUVA辐射后细胞辐射后细胞p53p53、p16p16 和和c-mycc-myc mRNA mRNA水平的影响水平的影响 p53p16c-myc 4. 4. 黄芩苷对黄芩苷对UVAUVA辐射后细胞辐射后细胞p16p16和和c-mycc-myc蛋白水平的影响蛋白水平的影响 结结
17、论论 n n 人参皂苷人参皂苷-Rg1-Rg1可有效缓解细胞内氧化应激损伤，减少基可有效缓解细胞内氧化应激损伤，减少基 因中光产物形成，减轻端粒损伤从而抑制端粒缩短，阻止因中光产物形成，减轻端粒损伤从而抑制端粒缩短，阻止 端粒临界长度激活端粒临界长度激活P53P53老化检查点，阻止细胞周期受抑的信老化检查点，阻止细胞周期受抑的信 号转导，降低老化相关蛋白表达水平，从而发挥显著的抗号转导，降低老化相关蛋白表达水平，从而发挥显著的抗 光老化作用光老化作用 n n 黄芩苷黄芩苷可有效保护人成纤维细胞免于氧化损伤和延缓光老可有效保护人成纤维细胞免于氧化损伤和延缓光老 化进程。其抗光老化机制包括延缓端粒
18、缩短、调节老化相化进程。其抗光老化机制包括延缓端粒缩短、调节老化相 关基因包括关基因包括p66p66、p53p53、p16p16、c-mycc-myc、MMP-1MMP-1和和TIMP-1TIMP-1表表 达有关，但黄芩苷对细胞端粒酶活性没有影响达有关，但黄芩苷对细胞端粒酶活性没有影响。 光疗临床改善光老化光疗临床改善光老化 “Traditonal 激光磨削 ”(临床图片) 点阵激光（临床图片）点阵激光（临床图片） 强脉冲激光强脉冲激光 治疗光老化及保健嫩肤（临床图片治疗光老化及保健嫩肤（临床图片 ） 空白2 UVA+IPL组组 8-MOP/UVA +IPL IPLIPL对小鼠光老化皮肤的改善
19、作用对小鼠光老化皮肤的改善作用 空白组组1 UVA组组 8-MOP/UVA组组 LuoLuo D, D, CaoCao Y, Wu D, Y, Wu D, XuXu Y, Chen B, Y, Chen B, XueXue Z/ Impact of intense pulse light irradiation on BALB/c mouse skin-in Z/ Impact of intense pulse light irradiation on BALB/c mouse skin-in vivo study on collagens, matrix vivo study on coll
20、agens, matrix metalloproteinasesmetalloproteinases and vascular endothelial growth factor. Lasers Med and vascular endothelial growth factor. Lasers Med SciSci; ; 2007 Dec 15.2007 Dec 15. 空白组组1 &amp;amp;lt;/p&amp;amp;gt;&amp;lt;/p&amp;gt;&lt;/p&gt;</p></p>
