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2、 保密论文在解密后应遵守此规定。 日期：继 - 上 r 目录 符号说明8 1 1 固态发酵概述9 1 2 苹果渣的开发利用现状l O 1 2 1 固态发酵生产酶制剂l l 1 2 2 固态发酵生产蛋白饲料1 2 1 3 苹果渣的生物活性物质的作用1 3 1 3 1 降低胆固醇作用1 3 1 3 2 抗氧化作用1 3 1 3 3 降低能量，减少蛋白质的吸收作用1 4 1 4 纤维素酶1 4 1 4 1 纤维素酶的研究现状1 4 1 4 2 纤维素酶的分类、作用机理1 5 1 4 3 在食品中的应用1 6 1 4 4 饲料工业中的应用1 8 1 5 木聚糖酶l 8 1 5 1 木聚糖的结构1 8
3、1 5 2 木聚糖酶的分类1 9 1 5 3 木聚糖酶催化反应的机理2 0 1 5 4 木聚糖酶在食品工业中的应用2 0 1 5 5 木聚糖酶在饲料工业中的应用2 2 1 6 1 果胶酶的分类2 3 1 6 2 果胶酶催化反应机理2 3 1 6 3 果胶酶在食品中的应用2 4 1 6 4 果胶酶在饲料中的应用2 5 1 7 复合酶制剂2 5 1 7 1 复合酶制剂的研究进展2 6 1 7 2 复合酶制剂的分类2 6 1 7 3 复合酶制剂的功效及其作用机制2 7 1 7 4 影响复合酶作用效果的因素2 9 1 7 5 复合酶制剂在食品中的应用3 0 1 8 本研究的目的意义3 1 2 材料与方
4、法3 2 2 1 材料、试剂及培养基3 2 2 1 1 菌种3 2 2 1 2 试剂。3 2 2 1 3 基础培养基3 3 2 2 测定方法3 3 2 2 1 纤维素酶活的测定方法3 3 2 2 2 木聚糖酶活的测定方法3 4 2 2 3 果胶酶活的测定方法3 6 3 结果与分析。3 8 3 1 苹果渣成分的分析3 8 3 2 三种酶活测定条件的优化3 8 3 2 1 三种酶活标准曲线3 8 3 2 2 测定波长的选择3 8 3 2 3 酶液稀释度对酶活力的影响4 1 3 。2 4 底物和酶液加量4 l 3 2 5 空白样的选择4 3 3 2 6 酶促反应最适p H 4 4 3 2 7 酶促反
5、应时间4 5 3 3 复合酶学性质的研究4 6 3 3 1 温度对酶活的影响4 6 3 3 2 酶的热稳定性4 6 3 3 3 酶的最适p H 值4 7 3 3 4 酶的p H 稳定性4 8 3 4 固体发酵条件的确定4 9 3 4 1 发酵周期的确定4 9 3 4 2 含水量对酶活性的影响4 9 3 4 3 发酵培养基的确定5 2 3 5 混菌发酵5 8 3 5 1 单菌基本产酶能力的测定5 8 3 5 2 混菌组合筛选5 9 3 5 3 三种菌混合发酵条件的优化6 0 3 5 4 正交试验结果的分析6 6 4 讨论6 8 4 1 酶活测定条件中测定波长的确定6 8 4 2 酶液稀释倍数对于
6、最终酶活结果的影响6 8 4 3 发酵过程中适时适量的补水6 9 5 结论7 0 参考文献7 2 攻读学位期间发表论文情况8 0 致 射81 山东农业大学硕士学位论文 摘要 我国是世界上苹果产量最大的国家之一，其中大约2 0 用于果汁加 工，可产苹果渣1 0 0 万吨左右。目前，苹果渣除少量被用于燃料、肥料和 深加工外，绝大部分被遗弃。不仅浪费了资源，还严重污染了环境。因此， 苹果渣的开发与利用研究，已成为饲料资源开发的重要课题。本文主要研 究了以苹果渣为原料经固态混菌发酵生产复合酶的可行性，并对发酵过程 中纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶的酶活情况进行了分析，主要结果如下： 1 苹果渣的主要成分
7、果皮果肉占9 6 2 ，果籽占3 1 ，果梗占0 7 。苹果渣含无氮浸出 物6 1 5 ，总糖1 2 3 ，粗脂肪6 2 ，粗蛋白含量5 6 ，还原糖11 4 ， 果糖O 5 ，蔗糖O 5 ，总酸O 5 2 ，油酸3 1 8 ，亚油酸3 3 5 ，钠4 5 4 7 2 m g l ( g ，钾0 4 3 6 a 2 三种酶活测定条件的优化 对于果渣发酵产生的复合酶系中的纤维素酶，木聚糖酶，果胶酶三种 酶活测定方法进行探索，对三种酶活性最佳测定波长进行扫描，D N S 加 量，酶液底物添加量，反应时间，反应温度，煮沸时间进行单因素分析， 最终确定测定条件的各种参数：三种酶活的测定波长均选择4 8
8、 0n i l l ，测 定温度4 0 。C ，p H5 0 ，底物和酶液加量各2 蚰，空白样选择终止空白。测 定纤维素酶底物浓度为1 0 l ，酶促反应时间1 0m i r a 木聚糖底物浓度是 1 0 1 ，反应时间1 5m i n i 果胶酶底物最佳浓度0 。8g 1 ，反应时间1 5r a i n 。 3 固态发酵培养基的确定 苹果渣固态混菌发酵产复合酶的研究 发酵周期确定为4 8h ：料水比确定为1 ：1 2 ；从发酵第二天开始，每 天补水1 0m l ，适时的补水对酶活提高有一定的作用。通过单因素试验和 正交试验，考察了不同氮源对苹果渣固态发酵的影响，并确定了固体发酵 苹果渣的培养
9、基配方为：硫酸铵2 O ，磷酸氢二钾O 1 ，尿素2 5 ，果 渣：麸皮= 4 ：1 。 4 混合菌株的选择 以l O 株真菌为出发菌株，利用固体平板上的初筛和固态发酵产酶测 定的复筛，选出活性较高的几种菌。对筛选出的菌种，采用交叉划线的方 法，观察确定菌种之间是否有拮抗作用。对没有拮抗作用的菌种进行混菌 固态发酵，经过实验得到C 2 ，C 6 和A s p 1 混合菌为发酵的最佳菌株， 混合后三种酶活整体得到了提高，较单菌的某一酶活性较高的单一性，混 菌由于菌种之间的协同作用，达到了预期的混合效果。 5 对筛选出来的三种菌混菌发酵条件优化，得到最佳活性配比 采用正交试验对选出来的三菌株混合比
10、例进行优化，发酵温度，装样 量，接种# 2 菌种时间，接种# 3 菌种时间，接种# 2 量，接种# 3 量。试验得 出结论：发酵温度3 0o C ；采用三角瓶容量2 5 0 m 1 ；选择菌种撑1 ，撑2 ，撑3 同时接种，接种撑1 体积1r n l ；接种撑2 体积2m l ；接种撑3 体积1 血。 6 对三种酶的酶活性质研究 酶的最适温度：纤维素酶的最适反应温度为7 0 0 C ，高于或低于这个 温度酶活力均下降。木聚糖酶的最适温度是5 5o C ，果胶酶的最适温度是 4 5o C 。 酶的热稳定性：纤维素酶的热稳定性比较高，在6 0o C 作用3 0r a i n 酶活仍保持在8 0 以
11、上，再升高温度才看到明显的酶活下降；木聚糖酶 山东农业大学硕士学位论文 在4 0o C 条件下相对稳定，酶活没有损失，5 0o C 时酶活损失较小，残余 酶活为7 6 7 2 ，至6 0o C 时残余酶活只剩下1 7 3 5 ；果胶酶在5 0o C 时酶 的稳定性最好，在3 0 一6 0o C 之间酶活保持在7 0 以上。 酶的最适p H 值：纤维素酶最适p H 值4 6 ，木聚糖酶和果胶酶的最适p H 分别是4 4 和5 0 。在p H 4 2 5 4 范围内相对酶活在6 0 以上，说明实验室这 三种酶为酸性酶，在酸性条件下不容易失活。 酶的p H 稳定性：果胶酶在p H4 5 的条件下比较稳定，酶活力基本没 有损失，在p
