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1、Pharmacokinetic of intravenous phenacetin in rats 导师： 答辩： 关于非那西丁方法设计样品处理HPLC操作数据处理 目录 / CONTENTS 12345 药物性质 第一部分 分子式：C10H13NO2 分子量：179.2158 类别:原料药药、解热镇痛类原料药。 性状：本品为白色，有闪光的鳞片状结晶或白色 结晶性粉末，无嗅，味微苦。本品在乙醇或氯仿 中溶解，在沸水中略溶，在水中极微溶解。 药物性质 内服易吸收，服后20-30分钟始现药效。持续 5-6小时，吸收后非那西丁大部分在肝脏迅速 去乙基生成对对乙酰酰氨基酚（扑热热息痛）而呈 现解热、镇
2、痛作用。其后主要以结合形式从 尿中排除；小部分经去乙酰基生成对氨苯乙 醚，后者使血红红蛋白变为高铁铁血红红蛋白，因 而表现为非那西丁的发绀发绀 毒性反应。 体内过程 亚氨基醌能使血红红蛋白变成高铁铁血红红蛋白而失去携氧能 力，造成组织缺氧、红细胞溶解而致溶血、黄疸，肝脏 损害等。正常情况下，毒性中间代谢物迅速与谷光甘肽 结合或转化成无毒的硫醚氨酸（meracpturic acid），从 尿中排出。只有当剂量过大或动物缺乏葡萄糖醛酸结合 代谢方式时，才出现中毒反应。 药动学 方法设计 第二部分 国内相关研究综述 实验动物仪器与试剂参数操作 Waters高效液相色谱仪 (包括 泵、 检测器) ;
3、色谱工作站 非那西丁标准品 硫酸阿托品标准品 乙腈为色谱纯 水为重蒸水 其余试剂均为分析纯 清洁级健康 Wistar 大鼠32只， 雌雄各半 体重 (250 10) g 禁食16小时 自由饮水 由实验室动物房提供 1.灌胃： 称取标准品非那西丁 1250mg-乙醇定容至 100ml 250g大鼠灌胃2.5ml （125mg/1000g） 眼眶静脉丛取血时间 每次300l，0.5h-1h -1.5h-2h-2.5h-3h- 3.5h-4h-6h-8h-12h -24h-48h 13次-3900l 配标准液 大鼠灌胃 125mg/1000g （或者尾静脉注射 20mg/1000g） 眼眶静脉丛取血
4、 血浆处理 HPLC检测 数据处理 主要参考文献：反相高效液相色谱法检测非那西丁血药浓度刘军 亦有用茶碱做内标 2.尾静脉注射: 丙三醇注射剂 非那西丁5mg/ml- 40ml 250g大鼠注射1ml（ 20mg/1000g） 5 10 15 30 45 60 90 120 min 于眼底静脉 丛取血0. 5 ml 样品处理 第三部分 血浆处理 取血 检测 解冻 眼眶静脉丛取血13次，每次300l 置肝素化离心管中,4 000 r/min离 心10 min,移取上层血浆,密封 -20冰冻待用 RP-HPLC 1.精密吸取血浆1 mL,加氨水100L,轻摇,再加氯仿5 mL,涡旋3 min,超
5、声40min,静置过夜。收集下层氯仿,于60水浴上用氮气吹干,再用甲 醇溶解残渣,并定容至200L,加入内标硫酸阿托品， 浓度为 15 mg L 1。12 000 rmin-1离心6 min,取上清液20L进样分析。 2. 200 l 血浆中加入100 l 10%高氯酸( 含内标硫酸阿托品， 浓度 为 15 mg L 1) ， 漩涡振荡 1 min，15 000 r min 1离心10 min， 取上清供 HPLC 分析 3.精密吸取血浆样品02 mL,精密加入冷藏的10%三氯乙酸40 L ( 含内标硫酸阿托品， 浓度为 15 mg L 1),涡旋3 min,12 000 r/min离心10
6、min,吸取上清液约120L置于尖底进样瓶中,HPLC自动 进样 HPLC操作 第四部分 12 34 色谱柱C18 流动相：乙腈-水（25：75）三乙胺0.1% 磷酸调节pH至3.0 灵敏度0.02AUFS 流速1ml/min 波长210nm 柱温30 硫酸阿托品16ng为最低检测限 非那西丁0.08g（SN=3：1）为最低检测限 色谱条件 HPLC系统一般由输液泵、进样器、 色谱柱、检测器、数据记录及处理 装置等组成。其中输液泵、色谱 柱、检测器是关键部件。 系统组成 流动相的准备： 将去离子水和有机溶剂分别用0.45um微孔滤膜过滤，除去颗 粒性杂质，倒入贮液瓶，超声波脱气15分钟后，将之
7、放置在 仪器的试剂架上。 开启稳压电源 方法编辑和参数设定 SOP 自动进样序列表及数据文件的设置 样品测定与数据报告 关机 每次分析样品之前必须用已知含量 的参照样对仪器进行校验,当实测与 标值的相对偏差0.3% 注意事项及维护 SOP HPLC 数据处理 第五部分 数据处理 药-时 标准曲线 质量控制 （新的标准曲线，双 质控样品） 方法学验证 专属性 回收率 精密度 参数计算AUC 汇总全班同学的数据 关键技术 与实践难点 讨论 关键技术 实践难点 研究方案可行性给药途径 72% 28% 灌胃？（乙醇） 静注？（尾静脉or股静脉） 研究方案可行性取血途径 72% 28% 眼眶静脉丛取血？
8、 断尾取血？ 尾静脉取血？ 实践难点 眼眶静脉丛采血 体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml； 体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml， 可适用于某些生物化学项目的检验。 采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠 或大鼠的颈部（大鼠采血需带上纱手套），应 防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻 压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右 手持续接7号针头的1ml注射器或长颈（3 4cm）硬质玻璃滴管（毛细管内径0.5- 1.0mm），使采血器与鼠面成45的夹角， 由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再 转180度使斜面对着眼眶后界。刺入约4 5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时， 将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺 适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的 血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采 血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟 练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。 左右两眼轮换更好。 2NDAw.html 谢谢观看 恳请老师和同学批评指正 ！ 导师： 答辩：
