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1、1 中国药典2015年版微生物内容 增修订概况及执行中的问题 天津市药品检验所 抗生素室 曹晓云 xiaoyuncao 2 1101 无菌检查法 1105 非无菌产品微生物限度检查法：微生物计数法 1106 非无菌产品微生物限度限度检查法：控制菌检查法 1107 非无菌产品微生物限度标准 1121 抑菌效力检查法 （用于指导生产企业在研发制剂中抑菌剂浓度的确定） 1421 灭菌法 2015年版微生物相关内容收载情况 1、6个通则 2、制剂通则中 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则 9202 非无菌药品微生物限度检查指导原则 9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 9204 微生物
2、鉴定指导原则（新增） 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（新增） 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（新增） 3、6个指导原则 制剂通则中各制剂项下【无菌】、 【微生物限度】及抑菌剂效力检查 4、品种正文 （原料、辅料、制剂） 品种正文中的【无菌】或【微生物限度】 （检查方法和限度，或指向通则） 5、制药用水 灭菌注射用水 【无菌】 注射用水、纯化水 【微生物限度】 6、药包材 【无菌】或【微生物限度】 3 p中国药典2015年版微生物内容增修订概况 p2015年版无菌检查法执行中的问题 p2015年版微生物限度执行中的问题 p相关通则主要内容 p制药用水、药包材微生物检测
3、 内容 4 1101 无菌检查法(修订) 1105 非无菌产品微生物限度检查法：微生物计数法（修订） 1106 非无菌产品微生物限度限度检查法：控制菌检查法（修订） 1107 非无菌产品微生物限度标准（修订） 1121 抑菌效力检查法（修订） 1421 灭菌法(未修订) 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则（未修订） 9202 非无菌药品微生物限度检查指导原则（修订） 9203 药品微生物实验室质量管理指导原则（修订） 9204 微生物鉴定指导原则（新增） 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（新增） 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（新增） 中国药典2015年版微
4、生物内容增修订概况 5 中国药典2015年版微生物内容增修订概况 一、整合 2010年版一、二、三部合一 1101 无菌检查法 1105 非无菌产品微生物限度检查法：微生物计数法 1106 非无菌产品微生物限度限度检查法：控制菌检查法 1107 非无菌产品微生物限度标准 1421 灭菌法 2010年版一、二部合一 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则 9202 非无菌药品微生物限度检查指导原则 9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 6 中国药典2015年版微生物内容增修订概况 二、检验方法与国际接轨，涵盖标准和方法的整体变化 无菌检查法 非无菌产品微生物限度检查法：微生物计数法
5、非无菌产品微生物限度限度检查法：控制菌检查法 非无菌产品微生物限度标准 抑菌效力检查法（2010版为指导原则） 药品微生物检验替代方法验证指导原则 药品微生物实验室质量管理指导原则 2010年版微生物限度 7 中国药典2015年版微生物内容增修订概况 三、新理念 1、微生物限度的检查结果为不符合规定时，不得复试。 2、加强检验过程控制，增订相关指导原则 p微生物鉴定指导原则（新增） p药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（新增） p无菌检查用隔离系统验证指导原则（新增） 8 p中国药典2015年版微生物内容增修订概况 p2015年版无菌检查法执行中的问题 p2015年版微生物限度执行中的问题
6、 p相关通则主要内容 p制药用水、药包材微生物检测 内容 9 2015年版无菌检查法执行中的问题 1、试验环境要求 2010年版2015年版 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局 部洁净度100级的单向流空气区域内或隔 离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌 操作，防止微生物污染，防止污染的措施 不得影响供试品微生物的检出。 无菌检查应在无菌条件下进 行，试验环境必须达到无菌 检查的要求，检验全过程应 严格遵守无菌操作。 10 无菌检查的试验环境要求？ 通则9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 “环境” 1、实验室的布局与运行 微生物实验的各项工作应在专属的区域进行，以降低交叉污染、
7、假阳性结果和假阴性结果出现的风险。无菌检查应在B级背景下的 A级单向流洁净区域或隔离系统中进行。 2010年版 2015年版 万级下的局部百级（A+C） A+B或隔离器（建议D级） 1、试验环境要求 2015年版无菌检查法执行中的问题 11 p单向流空气区域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（ 区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进 行洁净度确认。 p隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度 须符合无菌检查的要求。 p日常检验还需对实验环境进行监控。 通则9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则 通则9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则 1、试验环
8、境监控 12 2、无菌检查法首选薄膜过滤法 包括薄膜过滤法和直接接种法。 只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 一般应采用封闭式薄膜过滤器。 3、进行产品的无菌检查时，应进行培养基适用性检查和方 法适用性试验。 4、检验数量和检验量 采用薄膜过滤法时，只要供试品性质允许，应将所有容 器内容物过滤。 2015年版无菌检查法执行中的问题 13 4、检验数量和检验量 检验数量 检验量 指一次试验所用供试品最小包 装容器的数量。除另有规定外 ，出厂产品按表1规定；上市 产品监督检验按表2规定。表1 、表2中最少检验数量不包括 阳性对照试验的供试品用量。 供试品每个最小包装接种至每份培养基的最小量（g
9、 或ml）。除另有规定外，供试品检验量按表3规定。若每 支（瓶）供试品的装量按规定足够接种两种培养基，则 应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培 养基。采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允许，应将 所有容器内的全部内容物过滤。 14 4、检验数量和检验量 （表1-1） 15 4、检验数量和检验量 （表1-2） 16 5、保留生物制品无菌检查的特点 除阴性对照外药品生物制品 样品检测 13035硫乙 硫乙 22025/硫乙 32025TSBTSB 阳性对照43035硫乙 硫乙 17 6、培养基体系的修订 7、风险评估和偏差调查的要求 8、无菌检查结果一次检出为准，不得复试。 仅在充分证明
10、试验结果无效后方可重新试验。 18 供试品的检查 培养基适用性检查 试验菌液制备 方法适用性试验 19 p中国药典2015年版微生物内容增修订概况 p2015年版无菌检查法执行中的问题 p2015年版微生物限度执行中的问题 p相关通则主要内容 p制药用水、药包材微生物检测 内容 20 通则1105-非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 1、微生物计数培养基与定义的修订 2010年版2015年版 细菌数： -生长在营养琼脂培养基上 的菌落 需氧菌总数： -生长在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上的所有菌落（细 菌、霉菌和酵母菌菌落数） 霉菌和酵母菌数： -生长在玫瑰红钠琼脂培养 基上的菌落 霉菌
11、酵母菌总数： -生长在沙氏葡萄糖琼脂培养基上的所有菌落（包括细菌菌 落）。若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和 酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生 素的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰 红钠琼脂培养基进行测定） 。 2015年版微生物限度执行中的问题 21 2、试验环境 2010年版药典： 环境洁净度万级下的局部洁净度百级单向流空气区域内进行。 2015年版药典： 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。 22 2、试验环境 微生物限度检查的试验环境要求？ 通则9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 “环境” 1、实验室的布局与运行 微生物限度检
12、查应在不低于D级背景下的B级单向流空气区域 内进行。 2010年版 2015年版 万级下的局部百级（A+C） D级背景下的B级(B+D） 23 2、试验环境 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。 新增 通则9205- 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则 24 3、培养基及检验方法适用性试验 培养基和供试品检测所选方法的适用性须经确认。 方法适用性试验（方法验证） 试验组菌落数与菌液对照组菌落数的比值应在0.52范围内。 加菌步骤提前，加菌量为供试品体积的1%，难度更大。 4、阴性对照 如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 25 5、菌种和菌液的制备 菌株中国药典 协调案 枯草芽
13、孢杆菌 Bacillus subtilis CMCC(B)63 501ATCC6633 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus CMCC(B)26 003ATCC6538 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa CMCC(B)10 104ATCC9027 白色念珠菌 Candida albicans CMCC(F)98 001ATCC10231 黑曲霉 Aspergillus niger CMCC(F)98 003ATCC16404 26 5、菌种和菌液的制备 原则： 中国药典2015年版通则9203-药品微生物实验室质量管理指导原则 菌种 “药品微生物
14、检验用的试验菌应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的 标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业派生 菌株” 。标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。 27 6、培养条件 2010版2015版 细菌 3035培养3天 霉菌和酵母菌 2328 培养5天 ， 必要时可适当延长7天 。 除另有规定外， 需氧菌总数 3035，培养35天； 霉菌和酵母菌总数 2025培养，5天7天。 28 各品种项下要求执行的微生物限度标准解释如下： 101cfu： 可接受的最大限度为20； 102cfu： 可接受的最大限度为200； 103cfu： 允许的最大限度为 2000：依此类推。 7、结果判断
15、29 关于限度标准的表述方式 微生物限度标准以10的指数形式表示： 101cfu： 可接受的最大限度为20； 102cfu： 可接受的最大限度为200； 103cfu： 允许的最大限度为 2000：依此类推。 问题 3104cfu 可接受的最大限度为 标准表述为数字的，按数字执行，如，纯化水。 取本品不少于1 ml，经薄膜过滤法处理，采用 R2A琼 脂培养基，3035培养不少于5天，依法检查（通则 1105）， 1 ml供试品中需氧菌总数不得过100 cfu。 30 限度标准与检验结果的书写 限度标准 检验结果 10的n次幂可接受的最大菌数为2倍 按科学计数法 6.9102cfu 具体数字表示即为具体数字 690cfu 两种表示方式 两种表示方式相等 例，内控标准1000cfu/g 书写方式5102 700cfu/g 合格？ 1000 31 8、不得复试，无相关内容 32 通则1106-非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 1、培养基变化 在增菌过程，使用无选择性增菌培养基培养。疑似菌增加，工作量 加大。 2、结果判断方式变化 在各控制菌项下：改为“较少的生化实验”，以及“应进一步进行适 宜的鉴定试验” 。 较大变动 3、以“耐胆
