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1、第四章药物的鉴别试验药物分析学总论1本章要求v掌握鉴别试验的目的和常用的鉴别方法v熟悉鉴别试验的项目和分析方法学验证v了解一般鉴别试验的方法Date2什么是药物的鉴别试验？v根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方法来检验药物，了解所要检验的药物是哪一类、哪一种药物评价药品质量的三种分析手段：鉴别（identification）检查（testforpurity）含量测定（assay）首项任务药物的真伪Date3v鉴别真伪证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物判断已知药物的真伪Date4v注意区分：药物的鉴别试验判断已知药物的真伪化学中的定性分析鉴别未知物、全分析不足
2、以确证其结构去粗取精、去伪存真确认结构是否正确Date5物理常数测定法化学鉴别法光谱鉴别法色谱鉴别法显微鉴别法生物学法常见的鉴别方法鉴别项目性状(description)鉴别(identification)一般鉴别试验专属鉴别试验外观、溶解度、物理常数Date6包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数即判断真伪又反映纯度第一节物理常数测定法性状-反映了药物特有的物理性质，包括:（外观、溶解度、物理常数）Date7初熔全熔初熔样品开始局部液化、出现明显液滴全熔样品全部液化1熔点固体熔化成液体的温度熔融同时分解的温度自初熔至全熔的一段温度Date8
3、中国药典收载有三种测定方法第一法：测定易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品第三法：测定凡士林或其他类似物质要求报告初熔和全熔雌二醇熔点：本品的熔点为175180；维生素C熔点测定：本品的熔点为190192，熔融同时分解。例子Date9tD=100CL2比旋度在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1mL中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度。作用：反映手性药物特性及其纯度的主要指标，用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。例子ChP葡萄糖Date10加酸、弱碱或加热可加速、两种异构体达到旋光平衡ChP采用加氨试液加速平衡的到达Date11摩尔吸收系数C=1molLl=1cm百分吸
4、收系数C=1%(g100ml)l=1cm在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度不仅可以用来考察原料药的质量，还是UV测定含量的依据3吸收系数维生素B1的吸收系数测定：246nm波长处测定吸光度，吸收系数应为406436。（调整浓度使供试液的吸光度在0.30.7之间）例子Date12第二节化学鉴别法颜色变化沉淀生成气体生成荧光反应测定生成物熔点特点：操作简便、快速、现象明显，实验成本低，应用广，但专属性比仪器分析法差Date13三氯化铁呈色反应-含有酚羟基或能产生酚羟基；重氮化-偶合显色反应-具有或水解后有芳伯氨基；黄体酮的专属反应-甲酮基显蓝紫色特征；维生素
5、C的2，6-二氯靛酚反应-烯二醇具有还原性，氧化剂盐酸褪去颜色变化-指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物或颜色褪去Date14与重金属离子的沉淀反应-在一定条件下，药物(酰胺、含N杂环、生物碱、巴比妥)和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；与氨制硝酸银的沉淀反应-还原性药物如具有C17-醇酮基的肾上腺皮质激素，反应生成黑色银沉淀沉淀生成-指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的不同颜色的沉淀Date15v一般鉴别试验依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪注意区分专属鉴别试验根据每一种药物化学
6、结构的特点和性质，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪Date16一般鉴别试验专属鉴别试验注意：某一项鉴别试验只能表示药物的某一特征，绝不能将其作为判断的唯一依据强调区别不同类别的药物区别各个药物单体Date17有机药物-采用典型的官能团反应无机药物-根据其组成的阴离子和阳离子的特殊反应v一般鉴别试验有机氟化物类丙二酰脲类芳香第一胺类有机酸盐托烷生物碱类Date18有机氟化物的鉴别n有机破坏：样品经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸收成为无机氟化物n鉴别反应：与茜素氟蓝、硝酸亚铈在pH4.3溶液中形成蓝紫色络合物反应原理：Date19水杨酸盐三氯化铁反应n在中性或弱酸性条件下，水杨酸和试液
7、生成配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。n加稀HCl，即析出白色沉淀；分离，沉淀溶于醋酸铵溶液。反应原理：Date20酒石酸盐银镜反应取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银即游离并附在试管内壁成银镜。反应原理：Date21无机药物-阴、阳离子的特殊反应包括：钠盐、钾盐、钙盐、钡盐、铵盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、氯化物等离子的鉴别钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显各离子的特征颜色Date22测定原理钠火焰光谱：589.0nm、589.6nm鲜黄色钾火焰光谱：766.49nm、769.90nm紫色钙火焰
8、光谱：622nm、554nm、442.67nm与602nm显砖红色Date23铵盐鉴别方法取供试品，加过量氢氧化钠试液，加热，即分解，发生氨臭；遇湿润的红色石蕊试纸，能使之变蓝，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色测定原理：Date24氯化物鉴别供试液硝酸硝酸银白色白色氨试液沉淀溶解硝酸白色硫酸盐鉴别供试液氯化钡白色白色硝酸（盐酸）沉淀不溶注：一般鉴别试验只能证实是某一类药物，不能证实是某一种药物。Date25UV鉴别法IR鉴别法NIR鉴别法AAS鉴别法NMR鉴别法MS鉴别法XRD鉴别法紫外近红外红外原子吸收核磁共振质谱法X射线衍射第三节光谱鉴别法Date26紫外光谱鉴别法（UV法）紫外光谱相同
9、的不一定是同一种物质紫外吸收光谱：分子价电子能级跃迁。光谱较简单、平坦，曲线变化不大。波长范围：100-800nm.(1)远紫外光区:100-200nm(2)近紫外光区:200-400nm(3)可见光区:400-800nm特点：操作简便、快速、应用广，但用作鉴别的专属性不如红外光谱Date27仪器紫外-可见分光光度计generalprocess光源单色器样品室检测器显示Date28美法仑核对吸收光谱的特征参数max，或同时核对min核对max及其A核对max、min及肩峰规定和比较A1A2对照品比较法12常用的测定方法：Date29例ChP（2010）盐酸布比卡因的鉴别：取本品，精密称定，按干
10、燥品计算，加0.01mlL盐酸溶液溶解并定量稀释成每mL中约含0.40mg的溶液，照紫外-分光光度法测定，在263与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.530.58与0.430.48注意溶剂的种类、溶液pH及浓度等注意仪器的校正和检定Date30例ChP（2010）维生素B2的鉴别：取含量测定项下的溶液，照分光光度法测定，在267、375与444nm的波长处有最大吸收；在375与267nm处的吸收度比值应为0.310.33；在444与267nm处的吸收度比值应为0.360.39Date31USP常采用对照品法，将供试品与对照品按同法处理，在200400nm波长范围内扫描两溶液，要求
11、两者的吸收光谱一致。例西米替丁的鉴别：取供试品和对照品，分别加0.05mlL硫酸溶液制成每mL中约含12.5g的溶液，照紫外-分光光度法测定，两者的紫外吸收光谱图一致。Date32特征区指纹区几乎没有两种化合物具有完全相同的光谱红外光谱鉴别法(IR)红外光谱：分子振动和转动能级跃迁。每个基团一般都有相应的吸收峰，且特征性强。三个区域：(1)近红外光区(2)中红外光区4000400cm-1(3)远红外光区特点：专属性强、准确度高，应用最广泛Date33n原料药：几乎所有的原料药都采用IR鉴别n制剂：一般需前处理（溶剂提取法）后再采用IR鉴别需考虑辅料干扰、晶型变化等影响应用：IR适用于组分单一、
12、结构明确的药物Date34n标准图谱对照法（ChP、BP）要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与药品红外光谱集中的相应对照图谱对比，如果关键谱带的峰位、峰型、相对强度都一致时，即为同一种药物n对照品比较法（USP）分别绘制供试品和对照品的红外光谱图，进行比对常用的测定方法：Date35仪器：Bruker、NicoletIR380光谱范围：近红外中红外远红外分辨率：0.9cm-1、0.5cm-1IR200光谱范围：7800-375cm-1分辨率：1cm-1Date36傅里叶变换红外光谱仪结构框图干涉仪光源样品室检测器显示器绘图仪计算机干涉图光谱图FTSDate37压片法用于固体(最常用)糊
13、法用于固体膜法用于液体溶液法用于液体试样制备方法硬度大、光滑Date38利用物质各自的特征色谱行为（Rf值或保留时间）进行鉴别试验方法：供试品与对照品在相同条件下进行色谱分离，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪第四节色谱鉴别法Date39色谱鉴别法TLC鉴别法HPLC鉴别法GC鉴别法Date40TLC（Thin-layerchromatograph）一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品斑点颜色、Rf值应与对照品斑点一致。优点：简便、实验成本低，应用最广泛薄层色谱法供试对照Date41Oll0比移值：最佳范围0.30.5可用范围0.20.8Date42（High-pera
14、nceliquidchromatograph）（Gaschromatograph）一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。高效液相色谱HPLC气相色谱GCDate43HPLC的分离分析型号：Agilent1100色谱分离流动相固定相Date44作为药物鉴别方法时由峰位（保留时间）来判断t对照供试Date45第六节鉴别试验的分析方法学验证v专属性IR或MS专属性强，可单独用作鉴别专属性不强的需要2种或2种以上方法共同使用鉴别仅需专属性、耐用性、检测限药典：采用一组（二个或几个）试验项目全面评价一个药物Date46药物鉴别方法特点v仪器方法，尤其是IR法和HPLC法v原料药、制剂广泛采用IR法鉴别v鉴别条目简练，选择专属方法，平均每个品种收载2条左右Date47v理解药物鉴别试验是为了鉴别已知药物的真伪v熟悉物理常数鉴别的项目及意义v注意一般鉴别试验与专属鉴别试验的区别，熟悉一般鉴别试验相关的鉴别反应v掌握化学鉴别法、紫外光谱鉴别法、红外光谱鉴别、色谱鉴别法的应用及特点知识点回顾Date48
