《药物分析15章甾体激素类药物的分析.》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药物分析15章甾体激素类药物的分析.（59页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、药物分析第十五章:甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析甾体激素类药物环戊烷并多氢菲母核的激素类药物发现史SteriodHormones甾体激素类药物的分析1.甾体激素是在研究哺乳动物内分泌系统时发现的内源性物质发现史2.1932年至1939年间，从腺体中获得雌酮(1932)、雌二醇(1932)、睾酮(1935年)及皮质酮(1939)等的纯品结晶。3.随后，发明用薯蓣皂甙(Diosgenin)为原料进行半合成生产甾体药物，使生产规模扩大，成本降低4.发现肾上腺皮质激素治疗风湿性关节炎及其在免疫调节上的重要价值，使甾体药物成为医院中不可缺少的药物5.甾体口服避孕药的研究成功，使人类生育控制达到
2、了新水平甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分类ContentsContents结构与分类结构与分类1鉴鉴别别2检检查查3含量测定含量测定4第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质母体结构（环戊烷并多氢菲）第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质母体衍生结构第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质一、肾上腺皮质激素311172021氢化可的松(hydrocortisone)醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate)16-甲基21-酯化17-羟基9-氟3-酮12-双键11-羟基20-酮本类药物结构特征A环4-3-酮基为共轭体系在波长240nm附近有紫外吸收
3、部分药物在C1-C2之间有双键也有紫外吸收本类药物结构特征C17位上为-醇酮基具有还原性.多数药物有C17-羟基部分药物-醇羟基与酸成酯.本类药物结构特征部分药物的C6或C9位由卤素取代呈相应的卤化物反应本类药物结构特征部分药物C11位上有羟基或酮基取代二、雄性激素及蛋白同化激素第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质甲睾酮(methyltestosterone)丙酸睾酮(testosteronepropionate)苯丙酸诺龙(nandrolonephenylpropionate)17-羟基甲睾酮(methyltestosterone)A环4-3-酮基C17位上为羟基部分药物的羟基被酯化雄性
4、激素上的母核为19个碳原子蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基母核只有18个碳原子第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质三、孕激素黄体酮(progesterone)醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)米非司酮(mifepristone)第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质四、孕激素炔诺酮(norethisterone)左炔诺孕酮第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质三、孕激素黄体酮(progesterone)A环4-3-酮基C17位上有甲酮基或乙炔基.多数在C17位上羟基部分药物的羟基被酯化第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质四、雌性激素第一节第一节基本结构与性质基本结
5、构与性质四、雌性激素有些药物在C17位上有乙炔基构成19-去甲孕甾烷母核A环为苯环C3位上有酚羟基有的药物C3位上的酚羟基成酯C17位上有羟基有些药物C17位羟基成酯.第一节第一节基本结构与性质基本结构与性质总结如下第二节第二节IdentificationIdentificationu物理常数的测定u化学鉴别法u制备衍生物测定熔点uUVuIRuTLCuHPLC理化性质与鉴别试验第二节第二节IdentificationIdentification一、物理常数的测定1.熔点炔雌醇m.p.201黄体酮双肟m.p.238苯丙酸诺龙缩氨基脲m.p.178185分解丙酸睾丸素m.p.150156第二节第二
6、节IdentificationIdentification第二节第二节IdentificationIdentification二、化学鉴别法2.比旋度3.吸收系数与强酸的呈色反应官能团的反应1.与强酸的呈色反应甾体激素类药物硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸呈色第二节第二节IdentificationIdentification2.官能团的反应C17-醇酮基还原性A.呈色反应C17-醇酮基四氮唑盐OH-呈色B.沉淀反应C17-醇酮基氨制硝酸银银镜反应C17-醇酮基碱性酒石酸铜Cu2O第二节第二节IdentificationIdentificationC3酮基和C20酮基甾酮类24-二硝基苯肼呈色异烟肼、
7、硫酸苯肼异烟腙（黄色）睾酮异烟双腙（黄色）黄体酮甲酮基或活泼亚甲基第二节第二节IdentificationIdentification亚硝基铁氰化钠间二硝基酚芳香醛呈色蓝紫色黄体酮卤素酚羟基雌激素类重氮苯磺酸红色偶氮染料乙炔基第二节第二节IdentificationIdentification炔雌醇白酯基黄体酮三、UV四、IR第二节第二节IdentificationIdentification酚羟基醇羟基炔键羰基苯环骨架振动第二节第二节IdentificationIdentification五、TLC制剂分析对照品法炔诺酮六、HPLC第三节第三节PurityTestPurityTest一、TL
8、C地塞米松磷酸钠中杂质检查第三节第三节PurityTestPurityTest氢化可的松中其他甾体检查对照品60gml供试品3.0mgmlvCHCl3-MeOH(9:1)溶剂v硅胶GF254v二氯甲烷-乙醚-甲醇-水v385:60:15:2v展开后晾干v105干燥10minv碱性四氮唑蓝显色对照溶液0.02mgml供试液1mgml二、HPLC第三节第三节PurityTestPurityTest黄体酮中有关物质检查供试品溶液的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于对照液的主峰面积的34第三节第三节PurityTestPurityTest三、硒的检查来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢四、溶剂残留甲
9、醇和丙酮(GCGC)0.3%0.5%第三节第三节PurityTestPurityTest五、游离磷酸盐检查钼酸铵磷钼酸740nm，UV第四节第四节AssayAssayuHPLCuUVu比色法u非水溶液滴定法四氮唑比色法异烟肼比色法柯柏反应比色法第四节第四节AssayAssay一、HPLC对照液供试液己烯雌酚黄体酮第四节第四节AssayAssay二、UV醋酸地塞米松第四节第四节AssayAssay三、比色法肾上腺皮质激素类OH-还原235-TriphenyltatrazoliumchlorideTTC(RedtatrazolineRT)甲潜(azan)深红色max480490nm第四节第四节As
10、sayAssayBluetetrazolineBTBT-单甲潜BT-双甲潜蓝色max525nm氢化可的松软膏的含量测定第四节第四节AssayAssay精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25的暗处放置40min45min，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得影响因素基团溶剂与水分碱空气中氧与光线温度与时间第四节第四节AssayAssay（1）基团对反应速度的影响C11=OC11OHC21OHC21-酯C16无论何种取代基（2）溶剂、水分的影响含水量5%含水10
11、%A10%含水30%几无反应无水乙醇(无醛)第四节第四节AssayAssay（3）O2与光线的影响（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳（5）温度与时间t甲瓒分解%(二)异烟肼法(Isonicotinicacidhydrazide)第四节第四节AssayAssayINH4-3-酮IsonicotinicacidHydrazide第四节第四节AssayAssay影响因素（1）反应速度C3=OC17=O、C20=OC11=O不反应专属性强（2）溶剂的选择异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇无水（3）水分、O2与光线的影响含水量腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分
12、时O2与光线无影响第四节第四节AssayAssay(4)酸、异烟肼的量盐酸:异烟肼=2:1酸度异烟肼盐酸度A样品:异烟肼=1:8(5)温度t第四节第四节AssayAssay(三)Kober反应比色法第二步反应515465450500550nmAKober反应吸收光谱第一步反应第四节第四节AssayAssay采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量第四节第四节AssayAssay四、非水滴定米非司酮五、生物样品中的甾体激素的分析Dopingcontrol滥用药物检测刺激剂麻醉剂-阻断剂利尿剂遮蔽剂合成类固醇及2激动剂肽类激素外源性内源性兴奋剂检测特点
13、兴奋剂检测特点色谱方法是理想的检测手段。1976年使用气相色谱-质谱联用手段检测甾体，1980年开始用毛细管气相色谱法检测，至1984年大体基本定型。v药物及其代谢物的种类多，变化大，禁用的百余种药物以原体或一个或多个代谢产物的形式存在与人体体液中，因此，需要检测和确证的化合物多达几百种。除此以外，用药后的不同时间，这些化合物的浓度不断的发生变化，直到排出体外。v药物在人体体液中的浓度很低，药物在人体体液中的浓度常常是ng级或更低的水平，因此对检测的灵敏度要求很高。v要求准确的定性和定量，不能有丝毫的疏漏和差错。检测者要对每一种药的药物代谢动力学及光谱分析有全面娴熟的了解及足够的分析参考资料检
14、测基质检测基质1.尿液尿样检测是兴奋剂检测的理想样本。其优点在于：取样方便；对人无损害；尿液中的药物浓度高于血液中的药物浓度；尿液中的其他干扰少。2.血样补充尿样分析方法的不足，目前尚处于研究探索阶段，目前仅用于血液回输，红细胞生成素，生长激素，绒毛膜促性腺激素，睾酮等的测量。3.头发在法医，毒性分析中已有较长历史，但在兴奋剂研究中是才兴起研究方向。有采样容易，无损伤，不易作弊的特点，备受关注。皮质类固醇在体内消除很快，如果赛前停药，尿液分析就检测不到，而发样分析仍可检出。4.体液检测步骤检测步骤一、筛选方法（1）挥发性含氮化合物组：主要检测刺激剂。这类药物多以游离形式排出。（2）难挥发含氮化
15、合物组：主要检测麻醉阵痛剂和-阻断剂。这两类药物多以结合形式排出，因此需先水解，使之游离，再进行衍生化后检测。（3）利尿剂组：药物经提取后用高效液相色谱法分析检测，此组同时检测2种兴奋剂、咖啡因和匹莫林。（4）甾体同化激素组：此类药物有的以游离形式，有的以结合形式排出，我们所用的方法为同时检测。二、确证方法经筛选判为阳性的尿样，需进一步加以确证，根据规定，确证结果须给出药物或其代谢物的质谱图，因此在确证方法中均使用气相色谱法-质谱联用仪，确证时的分组同筛选方法中所述。（1）挥发性含氮化合物组方法同筛选，最后之提取物浓缩后进样于GCMSD。（2）难挥发含氮化合物组方法同筛选，最后之衍生化产物取小
16、量进样于GCMSD。（3）利尿剂组此组药物需衍生化，然后进样于GCMS（4）甾体同化激素组方法同筛选，唯最后得出全质谱图作为确证。检测步骤检测步骤中国兴奋剂检测中心座落在北京国际奥林匹克体育中心内自1989年得到国际反兴奋剂机构(WADA)的承认后，连续15年通过资格考试。该中心掌握了目前最先进的检测技术，包括高分辩率质谱、同位素质谱、EPO血检、尿检等方法，同时承担WADA赛外检测任务和周边国家的抽样检测任务，检测数量达到每年8000份.LOGO合成类固醇及合成类固醇及22激动剂激动剂共27种。合成类固醇又称为甾体同化激素，是雄性激素衍生物。这类药物有增长肌肉的作用，为很多运动员口服或注射使用，但副作用也很严重，会干扰人体的自然激素平衡，男人服用后会发生抑制雄性激素分泌，睾丸缩小，胸部扩大，早秃等现象；女人服用后，会发生男性化，肌肉增生，月经失调，毛发增多等现象。有些作
