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1、 深圳市沙井人民医院检验科文件编号：SJ/QS-26-OP-XY-059版本版次：A/01临床血液作业指导书生效日期：2005.01.01第 1 页 ，共 2 页活化部分凝血活酶时间测定（APTT）1. 项目名称: 活化部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time,APTT)2.检验目的2.1手术前的检测2.2 DIC的协诊2.3抗凝药物治疗监测2.4凝血因子检查2.5循环血液中抗凝物质和一些疾病协诊等3.检验原理：3.1检测原理:全自动血凝仪测定,散射光凝固法检测确定量的血浆样本（50l）经过一定时间（3min）温育后，加入部分凝血活酶时间反应
2、试剂（50l），加温1min，加入0.025MCaCl250l，加温4min,采用波长660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程(纤维蛋白原转化为纤维蛋白)中的浊度变化,从散射光光强度的测定可得凝集曲线，反应物凝固的时间即活化部分凝血活酶时间。3.2反应方法学溯源:37条件下,以鞣花酸激活因子和,以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板,在Ca2+参与下,观察贫血小板血浆凝固所需时间,即为活化部分凝血活酶时间,是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验.4.性能参数4.1重复性:CV2%4.2分析和计算参数:报告单位 秒(S)4.3样本量:50ul,试剂量:50ul激活剂,50ul
3、 CaCl24.4检验时间:在最长检验时间之内测出结果,标准设置最长检验时间:190秒4.5精密度范围:1.36.0%5原始样品系统:血浆6.容器和添加剂类型容器采用真空负压专用抗凝管,添加剂类型为0.109M枸橼酸钠7.试剂及配套品7.1激活剂:Cephaloplastin试剂(Dade Actin Activated Cephaloplastin Reagent)7.1.1商标:德灵(DADE BEHRING)7.1.2包装规格:10×2ml7.1.3货号:B4218-17.1.4成分:脑磷脂(从干燥兔脑粉中提取)加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的鞣花
4、酸溶液7.1.5使用方法:液体试剂,直接使用7.1.6储存:未开封试剂28贮存到说明书上有效期，开盖后28有效期7天,不能冰冻。未被污染的试剂稳定期是：283年、18251年、372天;7.2氯化钙溶液(Calcium Chloride Solution)7.2.1商标:德灵(DADE BEHRING)7.2.2包装规格:10×15ml7.2.3货号:ORHO377.2.4成分:0.025mol/L的氯化钙溶液7.2.5使用方法:液体试剂,直接使用.7.2.6储存:没开盖试剂放28存放至试剂瓶上有效期.开盖后28有效期7天.7.3清洗液(Clean I):用于测定过程中的吸样针冲洗7
5、.3.1商标:希森美康(Sysmex)7.3.2包装规格:50ml7.3.3货号:GSA500A7.3.4成分:1%次氯酸钠及活性成分7.3.5使用方法;液体试剂,直接使用7.3.6储存:没开盖试剂放28存放至包装有效期,开盖后放于仪器内有效期仅存4小时7.4校准质控血浆(Ci-Trol)7.4.1商标: 德灵(DADE BEHRING)7.4.2货号:Level 1(Normai),291070 10×1ml Level 2(Abnormal),291071 10×1ml Level 3(Abnormal),291072 10×1ml7.4.3使用方法:1ml蒸
6、馏水溶解置室温15分钟后使用7.4.4储存:室温:2h, 28:4h,冷冻分装保存:-20<2周,-70<6个月8.校准程序:仪器的验证和光路系统校正 仪器的验证由生产商、代理商指定工程师和我科共同完成.灯泡大约半年更换一次,光路系统的校正由代理商完成.9.程序步骤:9.1标本采集与要求9.1.1标本采集:抽取静脉血1.8ml,加入到含0.2ml109mmol/L(1:9)的枸橼酸钠溶液抗凝真空试管中,并轻轻颠倒10次使之充分混匀,不得有凝块、不得形成泡沫,总量不得超过2.0±0.2ml,并在试管上做好标识.采血应避免溶血和脂血,故患者应尽量空腹和避免在输入脂肪乳过程中或
7、其后8小时内采血.采血后2小时内送到检验科,需要运输时应在低温条件下运输.采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤,外源性凝血因子进入针管,最好不与其它实验一起采集,否则由于标本的分配、分装而使血液停留在针管的时间延长.9.1.2不合格标本的处理 对凝固、有凝块、严重溶血、重度黄疸、脂血、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件样品核收、登记和保存程序处理9.1.3标本保存检测应在标本采集后2小时内完成,28保存不超过4小时,分离后的血浆-20以下密封可保存2周.需长期保存的标本在-70下不超过6个月,且只能冻融1次，分析前在37
8、迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。分析后的标本不保存.9.2检测前准备 采样后应尽快分离血浆(60分钟内进行),将标本1500×g(3000r/min)离心10分钟,务使血小板去除;.在进行质控物和病人标本分析检测前,进行仪器状态和试剂检查,确保准备完好后才能进行分析.并将检查结果记录在相应的仪器设备使用记录表上.9.3病人标本的检测9.3.1开机:开CA1500仪器左侧电源开机后仪器进行自检、预热,当屏幕上显示Ready时可以进行试验9.3.2每日针冲洗:在主屏幕上选Rinse Probe,然后按下Execute进行针冲洗9.3.3准备试剂:按照仪器试剂位置设定,把上
9、述每项的试剂准备好,放在相应的位置9.3.4准备反应杯:打开仪器顶部反应杯储存槽,查看反应杯是否足够,需及时添加9.3.5准备标本;将离心好的样本放在相应的样本架上(一个架子可放10个样本),准备好放在进样器上9.3.6输入试验项目:按下主菜单上的Work List键,在试验项目键点击APTT,使APTT项目下显示“-”变为“”,按“”或“”将需要测试标本如上操作选择;9.3.7输入样本号:按下ID No.Entry,按顺序输入样本的序号或病人的病历号9.3.8开始检测:待一切准备工作就绪,按下屏幕右上角START键,仪器开始检测9.3.9查看结果:返回主屏幕,检测的项目如果由“”变为“”表明
10、此试验已经完成,然后按下Stored Date(储存结果)键,屏幕会换到结果显示界面,按下边第一个菜单Graph,查看凝集曲线、吸光度、结果等,检查是否有Error错误信息,有错误报警的标本需考虑重测9.3.10关机前冲洗针:关机前需要洗针,按下Rinse Probe,然后按下Execute9.3.11关机:回到主屏幕下,切断仪器电源.10.质量控制程序:.10.1质控物准备用1ml蒸馏水溶解一瓶Dade Control质控血浆,轻轻颠倒混匀约5秒,置于室温30分钟,用前摇匀即可,不要剧烈振摇.将未用完的质控血浆在室温保存2小时、284小时、-20以下冰箱中可保存24小时10.2上机检测将质控
11、标本加入样品杯,上机检测.具体操作详见CA1500血液凝固分析仪作业指导书10.3质控规则10.3.1质控图正常分布规律各点应分布在均值的两侧,95.45%数据落在x±2s内,99.73%数据落在x±3s内.10.3.2质控图失控规则a)一个质控物的测定结果超过x±3s(13s规则)；b) 一个质控物的测定结果连续2次超过x2s或x-2s(22s规则)C) 一个质控物的测定结果连续2次测定其中1次超过x2s另1次超过x-2s(R4s规则)d) 一个质控物的测定结果连续4次超过x+1s或x-1s(41s规则)e)连续10次质控物结果都在均数的同一侧（10x规则）f)
12、连续5次测定结果渐增或渐减（5T规则）10.4室内质控分析与失控处理10.4.1质控结果分析检测人员对质控结果进行分析,在发现质控数据违背质控规则后,通知组长,协助处理.组长分析该失控信号的真伪,并做出是否发出与测定质控品相关的那批病人标本检验报告的决定,必要时由检验科主任处理.检测人员填写失控报告.10.4.2失控原因分析极其处理过程失控信号的出现受多种因素的影响,包括操作上的失误,试剂、校准品或质控品的失效,仪器维护不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数等.解冻的质控血浆一定要先混匀再吸出至样品杯中,操作时间严格按作业指导书进行.所以,室内质控失效时.首先要查明失控原因,
13、然后随机挑选出一定比例的病人标本进行重新测定,对失控做出恰当的判断.失控的处理原则见程序文件内部质量控制管理程序10.5质控标本检测完毕后,及时将质控血浆放回冰箱,-20以下密封保存24小时.11.干扰和交叉反应 多种药物如双香豆素、链激酶、尿酶、口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等可影响PT结果,如出现异常结果,需做进一步实验以确定导致异常的原因,溶血、黄疸、脂血标本或混浊样本影响结果,应重新采血.血标本与抗凝剂比例不当也影响检测结果.当红细胞比积过大(>0.55)或过小(<0.20)可影响测定结果,这时枸橼酸钠的用量为V=0.00185×V1×(1.0
14、0-)×100 (注:V-枸橼酸钠用量, V1-血量ml,-红细胞比积)有下列浓度的物质存在时,对APTT的干扰小于10%标本类型甘油三酯(mg/dL)血色素(mg/dL)结合胆红素（mg/dL）正常不正常780605505208361012.结果计算程序的原理由仪器测定反应物凝固的时间即为活化部分凝血活酶时间13.生物参考区间: 21.1-36.5 S（患者结果超过正常对照10S上有临床意义）14.患者检验结果的可报告区间21124秒15.警告/危急值APTT：20S 或80S16.实验室解释16.1APTT常用于内源性凝血系统（、因子）的筛选及肝素抗凝治疗的监测16.2 APTT
15、延长：见于先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子、缺乏、VWF等）；多种凝血因子缺乏（如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等）；血液中有抗凝物质存在如凝血因子抑制物、狼疮抗凝物、华法林或肝素水平增高，F、F及F、F缺乏，大量输入库血。16.3 APTT缩短：见于DIC高凝期和妊娠高血压综合症等高凝状态以及血栓前状态、血栓性疾病。16.4 是监测肝素治疗的首选指标。要注意APTT测定结果必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系，否则不宜使用。一般在肝素治疗期间，APTT维持在正常对照的1.53.0倍为宜.16.5对内源凝血途径因子(、)缺乏较CT敏感(血小板异常不影响APTT)能检出:C小于25%的轻型血友病.对凝血酶原、纤维蛋白原缺乏则不够敏感,故APTT延长的最常见疾病为血友病.此时可进一步做纠正试验,即于患者血浆中加入1/4量的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆或正常血清(试剂参见凝血酶原消耗试验的纠正试验),再做APTT,如正常血浆和吸附血浆能纠正延长的结果而血清不能纠正,则为因子缺乏;如吸附血浆不能纠正,其余两者都能纠正,则为因子缺
