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1、专业知识病理解剖的意义：收集病理教学机科研资料的一个重要途径，大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化，找出主要病变，分析判断直接死亡原因的一种重要方法。可以验证临床诊断的正确性及治疗效果，发现临床诊断和治疗上存在的问题，最后通过临床病理讨论会的形式，实现病理和临床的交流与统一。病理解剖室的清洁与消毒 地面及靠近地面的墙壁用水冲洗干净。紫外线灯进行空气消毒，照射剂量不小于9000Uw-s/cm2。室内温度不低于20度，相对适度不超过50%，照射2030分钟。必要时喷雾2%过氧乙酸8ml/m2密闭消毒30分钟。解剖器械的消毒 清水冲洗干净，浸泡在1
2、:1000苯扎溴铵内含0.5%亚硝酸钠溶液中46小时、10%甲醛水溶液中24小时。个人防护 戴橡胶手套，外再戴薄质纱手套，戴上口罩、帽子，穿手术衣，外戴塑料围裙。固定 将组织浸入某些化学试剂，是细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置。 意义是保存组织细胞的抗原性，使抗原物质不发生弥散和抗原性丧失。 作用：保持细胞与生活时的形态相似、保持细胞内特殊的成分与生活状态时相仿、便于区别不同组织成分、有利于切片、固定剂的不良影响（影响常规染色、固定造成物质损失、组织皱缩）。固定剂的选择 细胞内物质与固定剂的关系：组成细胞的主要成分为蛋白质、脂类、糖类，根据研究目的的不同选择不同的固定剂。Mas
3、son染色，甲醛升汞、Zenker液、bouin液。嗜铬细胞，含铬的固定液。细胞内糖原，用Carnoy液。 固定液的量（组织块总体积的45倍） 穿透力（23mm/24h或0.5cm的多孔疏松组织） 时间（固定24小时后保存于70%乙醇。一般324小时） 特殊固定（制备1um厚的半薄切片，先用戊二醛固定再用饿酸进行二次固定） 固定容器（相对大些，防止组织与容器粘连产生固定不良。瓶底垫一棉絮，使固定液均匀渗入组织块。轻轻搅动，利于渗入。）单纯固定剂 甲醛（40%甲醛气体水溶液，又称福尔马林。）渗透力强，固定均匀，组织收缩小。固定保存大体标本。 甲醛色素：甲醛氧化产生的蚁酸在组织中与血红蛋白结合形成
4、棕色的甲醛色素。类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。类：其他，氯化汞，苦味酸等。 重铬酸钾：橘红色结晶，有毒性，1%3%水溶液。固定高尔基体和线粒体。 苦味酸：黄色结晶体，强酸易燃易爆。沉淀一切蛋白质，穿透慢，组织收缩明显，组织无明显硬化。 升汞：针状结晶。5%7%饱和水溶液。固定蛋白质。 醋酸：保存染色体。 铬酸：三氧化铬的水溶液。0.5%1%。线粒体和高尔基体。 饿酸：四氧化饿，淡黄色结晶，1%2%的水溶液，脂类。 丙酮：酶组织化学的各种酶的固定。 三氯醋酸：无色易潮解的结晶体
5、。蛋白质沉淀。 乙醇：80%95%，糖原的固定。（1）B-5固定液淋巴组织（2）Bouin氏固定液外科活检标本、结缔组织染色（三色较佳）（3）Carnoy氏液胞质和胞核，染色体固定佳（4）Miiller氏液媒染和硬化神经组织（5）Orth氏液胚胎组织、神经组织、脂肪组织（6）PFG液肽类抗原的固定，免疫电镜研究（7）PLP液和PLPD液富含糖类组织的固定（8）Rosman液糖原固定好（9）Zenker液固定多种组织，使细胞核和细胞质染色较清楚，常用三色染色（10）4%多聚甲醛-0.1mol /LPB 适用光镜免疫组化（11）4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氯化钠液光镜和电镜免疫组化（12）甲醛-钙液
6、脂肪组织和组织化学染色（13）乙醇-甲醛液皮下组织肥大细胞（14）乙醚-酒精液细胞涂片（15）中性缓冲甲醛液免疫组化（16）中性甲醛液常用（40%甲醛120ml、蒸馏水880ml、磷酸二氢钠4g、磷酸氢二钠13g。）组织的脱水和脱水剂 脱水：借某些溶媒置换组织内水分的过程。 酒精脱水能力强，硬化组织，收缩明显，梯度脱水丙酮快速脱水或固定兼脱水异丙醇乙醇替代品，收缩小，硬化作用弱正丁醇脱水后的组织科直接浸蜡和包埋，电镜中的中间脱水剂透明：组织块中的水分被溶剂取代，其折射指数接近于组织蛋白的折射指数，组织块变得透亮。二甲苯：常规透明剂，折射指数1.50，对组织的收缩性强，易使组织变硬变脆。石蜡切片
7、：组织经石蜡包埋制成蜡块，用切片机制成切片的过程。一般厚度46um。蛋白质的着色原理：蛋白质分子中的氨基酸残基含有酸性基团或碱性基团，可以与染料分子以离子键、氢键、配价键结合。核酸染色原理：核酸包括DNA和RNA。是由单核苷酸连接而成的大分子。在DNA双螺旋结构中，两条核酸链上的磷酸基向外，并电离为负离子，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，易和带正电荷的碱性染料以及媒染染料以离子键或氢键相结合。胞质的主要成分：蛋白质、RNA、脂蛋白等，多为两性化学物。 在PH3.64.7之间，胞核带负电荷为碱性染料染色；胞质带正电荷为酸性染料染色。细胞膜的成分：类脂和蛋白质，形成流动镶嵌脂质双层结构。 在膜表面分
8、布有糖脂、磷脂、蛋白质分子，含有较多的极性基团，负电基团和正点基团。负点基团占优势总结果使细胞膜外表面带负电，易被碱性染料染色。7.HE染色的原理（1）细胞核染色原理：细胞核的染色质主要是DNA，DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，称酸性，易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。（2）细胞质染色的原理：在染料中加入醋酸，使胞质带正电荷，可被负电荷的染料结合。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合而使细胞质染色。二甲苯的作用：脱去切片中的石蜡；透明切片的作用。（3）乙醇的作用：洗脱用于脱蜡的二甲苯，再使水分进入切片；脱去组织中的水分。水洗的作
9、用：使水进入切片中，苏木素染液进入细胞核中；洗去未结合的染料；除去为结合的染料和中止分化。（4）分化的作用：洗去细胞核中结合过多的染料和胞质中吸附的染料。返蓝的作用：分化后的苏木精在酸性下处于红色离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，使苏木精染上的细胞核变成蓝色。8、石蜡切片和HE染色的质量标准（切片完整，厚度46um，厚薄均匀，无褶无刀痕；染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封婊美观。）十、常用的特殊染色技术 1.结缔组织复合染色法（1）应用（鉴别梭形细胞软组织肿瘤的来源属于纤维性、肌肉性、神经性）（2）Mallory三色法结果（胶原和网状纤维呈蓝色，软骨黏液淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤
10、维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色）（3）Masson三色法结果（胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色）（4）显示胶原、网状和弹力纤维三联染色法结果（胶原纤维呈红色，网状纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色）2.胶原纤维染色法（1）应用（鉴别肿瘤来源于纤维细胞、心肌瘢痕灶、早期肝硬化。及其他组织纤维增加或减少等）（2）Van Gieson法的缺点（甲乙两液需分瓶存放，甲液配制后数天即可用，不易配制过多，乙液配制后立即使用。（3）丽春红S染色的结果（胶原纤维呈鲜红色，肌纤维、细胞质、红细胞呈黄色，胞核呈蓝褐色）（4）天狼星红的染色结果（胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其他呈黄色）
11、（5）天狼星红染色在偏光显微镜下的结果型胶原纤维：排列紧密，显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维。型胶原纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布。型胶原纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。3.网状纤维染色法（1）应用（常区别上皮还是非上皮性来源的肿瘤；肝组织的网状支架塌陷破坏或增生的情况）（2）银染色的原理（组织蛋白质与银化合物的结合，再经过甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及表面的物质）（3）Gomori银染色法结果（网状纤维呈黑色，胞核呈红色（核固红复染），胶原纤维呈黄棕色，细胞质呈淡红色（红夜复染）（4）James银染色的原理和结果4.
12、弹力纤维染色法（1）应用（皮肤组织增生和变化，呼吸道支气管扩张，老年性肺气肿的纤维断裂、变性、萎缩；心内膜弹性纤维异常增生症等）（2）维多利亚兰和丽春红S染色的结果（弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色）5.肌肉染色法（1）应用（肿瘤细胞出现横纹肌纤维）（2）Mallory氏PTAH法结果（胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌等均呈蓝色，胶原纤维、网状纤维软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹性纤维有时被染成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。）（3）早期心肌病变组织染色Nagar-Olsen染色法结果（缺氧心肌、红细胞呈红色，正常心肌呈黄色或黄棕色，细胞核呈蓝
13、色。） Poley染色法结果（缺氧心肌呈红色，胞核呈紫色，其他组织呈绿色。）6.糖类染色法（1）分类（多糖、中性黏液物质、酸性黏液物质）（2）糖原染色的应用（鉴别细胞内的空泡状变性；是被水溶性固定液溶解还是脂肪被脂溶剂溶解）（3）PAS染色法的原理（过碘酸把多糖的葡萄糖分子中的两个相邻的羟基的CC键打开，而生成醛基再与染色剂结合。碱性复红经亚硫酸和二氧化硫作用下，醌式结构的双键被破坏而消失，成为无色复红，经过氧化后的醛基与无色复红液进行结合呈紫红色）结果（糖原及其他阳性物呈红色，细胞核呈蓝色）7.粘多糖染色法（1）应用（粘液性疾病）（2）Alcian blue染色和结果（唾液酸及若硫酸化黏液物
14、质以及一般黏液呈蓝色，各种强酸化黏液物质不着色或淡染，胞核红色）（3）中性粘多糖的PAS染色结果（）（4）Mowry染色结果（中性黏多糖物质呈红色，酸性黏多糖物质呈蓝色，混合型黏多糖呈紫红色）8.色素类染色（1）色素的种类（外生性色素及沉淀物、人为色素及沉淀物；甲醛色素、黑色素）（2）黑色素染色的应用（显示异常的黑色素）（3）Masson Fontana法（黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈淡蓝色）（4）Lillie染色法黑色素结果（黑色素呈暗绿色，背景浅绿或不着色。肌纤维和背景呈黄色）（5）含铁血黄素染色的应用（组织内的铁质以含铁血黄素的方式存在）（6）含铁血黄染色有哪几种证
15、明方法和原理（7）脂褐素染色的应用（观察胆道阻塞和血红蛋白的代谢障碍等疾患所以起的胆汁淤积。病理时，出现在肝细胞、毛细血管、小胆管、库普弗细胞等）10.淀粉样物质染色（1）性质（糖蛋白成分）（2）应用（分为原发性和继发性，肿瘤的诊断与鉴别）（3）刚果红染色的结果（淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色）（4）Jurgens甲紫染色结果（淀粉样物质呈红色或紫红色，细胞核呈蓝色）11.真菌染色（5）高碘酸复红染色的原理（真菌的基本结构成分是较多的黏多糖和蛋白质，经适当的氧化剂和氧化时间，促使糖类结构分子的乙二醇或氨羟基的碳键断裂，生成醛类化合物，暴露的游离醛基与Schiff试剂进行结合。结果（真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色）12.细菌染色（1）细菌（一类病原微生物，体积较小，需放大到千倍以上才能看到，根据特殊方法可以把细菌分为一般细菌和抗酸杆菌两大类。）（2）革兰氏染色的原理和结果（碱性原料与细菌的核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结
