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1、土7罗弓孑羔争学校代码：10023学号：200201051膜型1基质金属蛋白酶(MT卜MMP)在视网膜前膜中的表达TheexpreSsiOnOfMT1MMPinthe。lneeXDreSSlOnOtJ。l。1MMPlntne-eplretlnalmembraneS姓名：陈迪北京协和医学院临床医学专业2002级导师：董方田教授北京协和医学院临床学院眼科完成日期：2010年6月1：；!；引言7正：虫：9第一部分：视网膜前膜中MTlMMP的免疫组化染色9一、实验材料9二、实验方法11三、实验结果13四、讨论21第二部分：视网膜前膜中MTlMMP与cD34的免疫荧光双重标记染色26一、实验材料26二、
2、实验方法27三、实验结果28四、讨论33结论35参考文献36综i苤44致谢58缩略词表Abbreviations12在不同视网膜前膜(ERM)组织中皮细胞中的表达及分布情况。1收集增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)，增殖性玻璃体视网膜病变(PvR)及特发性黄斑前膜(IERMM)患者的ERM标本及临床资料。2通过免疫组织化学染色，观察MTlMMP在不同ERM中的表达强弱，并通过图像分析软件(ImageProPIus60)分析其累计光密度(IOD)值。3通过免疫荧光双重标记染色，以cD34标记ERM中新生血管内皮细胞，观察MTlMMP在内皮细胞中的表达及分布。研究结果：1共收集33例ERM标本，其中
3、PDR患者22例，非PDR患者11例(PvR患者7例，IERMM4例)。2在PDR和非PDR患者的ERM标本中，MTlMMP表达阳性率分别为773(1722)和182(211)(p=0002)；在PDR和非PDR患者的ERM标本中，MTlMMP表达的平均loD值分别为576736250503和17287371732(p=0000)。3在PDR患者的ERM标本中，MTlMMP与cD34免疫荧光染色阳性，分布较一致，均位于细胞膜上。在非PDR患者的ERM标本中，MTlMMP与cD34免疫荧光染色阴性。研究结论：1与对照组相比，糖尿病视网膜病变视网膜前膜显著高表达MTlMMP，MTl一MMP可能在糖
4、尿病视网膜病变增殖膜形成中发挥一定作用。2糖尿病视网膜病变的视网膜前膜中含有较多新生血管成分，MTlMMP表达在糖尿病视网膜病变视网膜前膜新生血管内皮细胞的细胞膜上，MTlMMP可能在糖尿病视网膜病变视网膜前膜的新生血管形成中发挥一定作用。关键词：视网膜前膜，增殖性糖尿病视网膜病变，膜型1基质金属蛋白酶，新生血管4MateraIsands：type一1matrixmetaoproteinase)ofdi仟erentdiseasesMTl-MMPintheendotheIaIceI|s1ERMsandreIatiVecIinicaIdatawerecoectedfrompatientswithp
5、roIiferativediabeticretinopathy(PDR)，pr01f套ratlVeVitreoretinopathy(PVR)andidiopathicepiretinaImacuIarmembrane(1ERMM)2TheERMspecimenswereanalyzedbyimmunohistochemistrytodetermineMTlMMPepressionandtheintegratedocuIardensity(IOD)ofeachspecimenwascaIcuIatedbyImageProPIus603ThedistributjonOfMTl一MMPintheE
6、RMwasObserVedthroughimmunofIuoresencedoubIe-StainingtechniquewithCD34markingendotheIaIceIlsResults：1Weobtalned33ERMspecimens，ofwhich22werefromPDRpatientsand11fromnon-PDRpatients(PVR7andlERMM4)2Insum，MTl-MMPwasexpressedln773(1722)ERMspecimensfromPDRpatientsand182(211)fromnonPDRones(p=0002)TheaverageI
7、ODsofMTl-MMPexpressjoninPDRgroupandnonPDRgroupwere576736250503and17287371732respectiveIy(p=0000)3MTl一MMPandCD34werecoIocaIzedonthemembraneofendotheIiaIceIlsintheERMfromPDRpatientswhIetheybothwerenegativeinthenonPDRones5COnclusiOn：1MTl一MMPissignificantIyhighIyepressedintheERMsofPDRpatientsandmaycontr
8、butetOtheERMf6rmatiOn0fPDR2TheERMsfromPDRpatientscontainmoreVascularcomponentscomparedwithnonPDROnesMTlMMPisepressedonthemembranesOfendOthe|aIcesintheERMsfromPDRpatientsandmaypIayacertainroIeintheangiogenesisofPDRKeywOrds：epiretinaImembrane，pro|feratiVediabeticretinopathy，membranetypelmatrixmetaoprO
9、teinase，angiogenesis6引言视网膜前膜(EpiretinaImembrane，ERM)是多种视网膜疾病的严重并发症，如增殖性糖尿病视网膜病变(proIferativediabeticretinopathy，PDR)1，增殖性玻璃体视网膜病变(proIferativevitreoretinopathy，PVR)3一，特发性黄斑前膜(idiopathicepjretinaImacuIarmembrane，IERMM)5及慢性葡萄膜炎3等。ERM的形成是PDR致盲的主要病理过程之一，约有20的1型糖尿病患者和5的2型糖尿病患者在病程的不同阶段发生ERMw。糖尿病患者体内糖代谢紊乱，
10、视网膜局部缺血缺氧，刺激病理性新生血管形成，新生血管进而由视网膜表面长入内界膜和玻璃体后界面间，形成纤维血管膜，可进一步造成玻璃体出血和牵拉性视网膜脱离等致盲的严重并发症8。组织病理学研究发现ERM主要由复杂的纤维细胞性成分组成，具体包括视网膜色素上皮、巨噬细胞、神经胶质细胞、成纤维细胞、血管成分及细胞外基质(EcM)等9。10。目前己鉴定出视网膜前膜细胞外基质中的多种成分，如胶原蛋白和纤维粘连蛋白等11。根据有无血管成分，ERM可分为血管性和无血管性，血管性ERM常与缺血性视网膜疾病有关，典型代表为PDR；无血管性ERM的典型代表为PvR3。两种类型的ERM均可以通过细胞介导的牵引收缩引起牵
11、拉性视网膜脱离，并都随着病程增加，纤维化程度不断增高12。但是ERM形成的具体机制至今尚不明确。目前已经发现多种生长因子，如vEGFl314、bFGFl516、IGFl7、HGFl7瑚、PDGFl920、EP02卜23以及趋化因子24等参与PDR新生血管形成。视网膜缺血缺氧可诱发vEGF表达上调，是目前认为主要的促血管形成因子，抗vEGF治疗在PDR和糖尿病性黄斑水肿方面取得了一定效果，目前vEGF抑制剂己成为眼科新生血管性疾病治疗的热点2s之6。近来，在PDR患者ERM中，应用原位杂交技术检测到了vEGFmRNA的表达，应用免疫组化染色检测到了vEGF蛋白表达2阳8。除了促新生血管形成外，细
12、胞外基质的降解也被认为在EcM的形成中至关重要。基质金属蛋白酶(MatriMetaIIoproteinases，MMPs)是一组内源性锌依赖的蛋白酶系，它们不仅仅降解细胞外基质，更参与新生血管形成，其活性失控与肿瘤浸润29，肝纤维化30，糖尿病肾病31以及ERM形成32等密切相关。迄今为7止，共发现26种不同的MMPs和24个编码基因33。根据其作用底物、编码序列和结构域构架的不同，脊椎动物MMPs可分为六大类，其中锚定于细胞膜上的亚型称为膜型基质金属蛋白酶(MT-MMP)，由于其在细胞上的独特定位，MTMMP在细胞周围基质降解过程中尤为重要。目前共发现6种MTMMP，其中4种(MTl，MT2
13、，MT3及MT5MMP)通过疏水跨膜结构域锚定于细胞膜上，另2种(MT4和MT6MMP)则通过糖基磷脂酰肌醇连接于细胞表面。膜型1基质金属蛋白酶(MTlMMP)是第一个发现的在肿瘤中高度表达并具有活化MMP2活性的非分泌性MMP，在肿瘤浸润和新生血管形成中发挥重要作用。MTlMMP对细胞行为具有多种效应，它能够降解细胞外基质，调控整合素、谷氨酰胺转氨酶和cD44等细胞表面受体的表达和功能状态345。通过对MTlMMPcDNA转染的人类黑色素瘤，乳腺癌及胶质瘤细胞的研究发现，MTlMMP过度表达可以造成肿瘤生长加快，侵袭性增强及新生血管化程度增高38，47，48。并且近来的研究发现，MTlMMP
14、能够通过src依赖机制增加vEGFA转录36，MTlMMP的mRNA水平与vEGF的表达呈显著正相关的关系37。研究已经发现，在PDR患者ERM中显著表达MMP2及MMP9，MTl一MMP作为MMP2的活化因子，并且在细胞外基质降解，vEGF表达和新生血管形成方面均发挥作用，那么它在ERM中的表达与分布又是如何呢本实验通过免疫组化染色研究MTlMMP在PDR患者及非PDR患者(PvR及IERMM)ERM中的表达，通过免疫荧光双重标记染色，以cD44标记新生血管内皮细胞，观察MTlMMP在ERM中的具体分布。8正文中MTlMMP的免疫组化染色月因玻璃体视网膜病变在北京协和医院眼科住院并接受玻璃体切除术的患者。其中PDR组22例22眼，对照组11例11眼。入选标准：1年龄20岁，性别不限2因PDR或者其它玻璃体视网膜病变(PvR、黄斑病变等)而接受玻璃体切除术3首次手术排除标准：1年龄75)；基质染色强度(o：阴性；1：弱；2：中等；3：强)。12将上述两项指标所得分数相加，得到染色指数，分值为06
