《色素上皮衍生因子在慢性高糖诱导的胰岛β细胞氧化应激损伤中的作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《色素上皮衍生因子在慢性高糖诱导的胰岛β细胞氧化应激损伤中的作用（54页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
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3、慢性高糖诱导的胰岛B 细胞氧化应激损伤中的作用 摘要 色素上皮衍生因子在慢性高糖诱导的 胰岛B 细胞氧化应激损伤中的作用 摘要 目的 慢性高糖会对机体的组织和器官造成损害，包括胰岛1 3 细胞。近年来“糖毒性 学说”收到广泛关注，认为：长期暴露在高浓度的葡萄糖条件下胰岛1 3 细胞的胰岛素 分泌功能下降，胰岛B 细胞减少，且呈不可逆性改变。研究表明其机制是高糖诱导胰 岛细胞胞内氧化应激而造成胰岛t 3 细胞氧化损伤。P E D F 是一种内源性抗氧化应激分 子。近年来国内外多项研究显其与氧化应激相关的疾病如：代谢综合症，腹型肥胖， 糖尿病肾病等关系密切，一些基础研究也表明P E D F 可在多
4、种细胞中通过不同途径发 挥其抗氧化应激性能，对细胞产生保护作用。然而在胰岛细胞中的研究未见报道，本 研究旨在明确、探讨：1 ) 不同糖浓度孵育，对I N S 一1 E 细胞内R O S 的产生、细胞活性、 细胞凋亡率及糖刺激的胰岛素分泌功能的影响；2 ) P E D F 是否能够改善高糖诱导的 I N S 一1 E 细胞氧化损伤。 材料与方法 1 ) I N S 一1 E 细胞种盘次日，以无糖P R M l l 6 4 0 培养基饥饿细胞2 h ，按葡萄糖浓度分为 5 6 m m o l 1 组( 对照组) ，1 6 7 m m o l l 组，3 0 m m o l 1 组，并以甘露醇( m
5、 a n n i t 0 1 ) 调节渗透压，即5 6 m m o l 1g l u c o s e + 2 4 4 m m o l 1m a n n i t o l 、 1 6 7 m m o l 1 g l u c o s e + 1 3 3 m m o l 1m a n n i t o l 、3 0 m m o l 1g l u c o s e ，分别用5 6 G 、1 6 7 G 、3 0 G 表示。 三个梯度糖浓度培养基处理细胞4 8 h 后，D C F H - D A 探针检测细胞内R O S 含量；M T T 法检测细胞活性；P I H o e c h s t 法检测细胞凋亡率；
6、G S I S ( 去培养基一清洗细胞一 2 5 m m o l 1g l u c o s eI 拘K R B H 平衡3 0 m i n 清洗一1 6 7 m m o l 1g l u c o s e 的K R B H 束I J 激 3 0 m i n ) 处理、收集上清，E L I S A 检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌。比较不同浓度高 糖处理对以上指标的影响。 2 ) R T - - P C R 检测大鼠肾、胰岛、腺泡及I N S 一1 E 细胞内P E D Fm R N A 水平。 3 ) 构建P E D F 质粒，在I N S - 1 E 细胞内脂质体转染P E D F 质粒并检测其蛋白
7、表达，确定 摘要 色素上皮衍生因子在慢性高糖诱导的胰岛B 细胞氧化应激损伤中的作用 转染是否成功。 4 ) 细胞种盘次日转染，分组为：5 6 G 、1 6 7 G 、3 0 G 三组，同一糖浓度根据转染质 粒的不同分为G S ( g l u c o s e + s c r a m b l e ) ，G P ( g l u c o s e + P E D F ) 两组，即5 6 G S ，5 6 G P ， 1 6 7 G S ，1 6 7 G P ，3 0 G S ，3 0 G P 六组。转染后2 4 h ( P E D F 蛋白表达高峰) 对细胞 进行2 h 饥饿处理，其后分别用三种糖浓度培
8、养液孵育细胞4 8 h ，同上方法检测，比 较同一糖浓度组内，G P 与G S 组细胞t 为R O S 含量、细胞活性、凋亡率及G S I S 差异。 ( s c r a m b l e 以空质粒载体替代) 结果 1 ) 高糖( 1 6 7 G 、3 0 G ) 培养基处理4 8 h 后I N S 一1 E 细胞胞I 为R O S 含量、细胞凋亡率显 著增加，细胞活性、胰岛素分泌功能显著降低，并呈浓度依赖性。 2 ) 在大鼠肾、胰岛、腺泡及I N S 一1 E 细胞内，P E D F 的m R N A 水平差异显著，其中I N S 一1 E 细胞内其m R N A 微乎其微。 一 3 ) 以2
9、 u gP E D F 质粒转染I N S 一1 E 细胞，其2 4 、4 8 、7 2 h 蛋白过表达均较显著，过表达 有效。 4 ) 较之1 6 7 G S 、3 0 G S 组，对应的1 6 7 G P 、3 0 G P 组细胞内R O S 含量、细胞凋亡率显著 降低，细胞活性、G S I S 显著改善，均具统计学意义。5 6 m M 糖浓度组，P E D F 转染对上述指标无显著影响。 结论 本研究初步揭示了高糖可致I N S 一1 E 细胞内R O S 含量增加，并伴随着细胞凋亡增 加、细胞活性及胰岛素分泌功能逐渐降低，并具有浓度依赖性特征；高糖状态下 ( 1 6 7 G 、3 0
10、G ) ，过表达P E D F 可显著降低I N S 一1 E 细胞内R O S 的生成及细胞凋亡率， 增加细胞活性及其胰岛素分泌功能，P E D F 可改善高糖状态下细胞的氧化应激损伤。 作者：李瑞霞 指导老师：陈海冰 色素上皮衍生因子在慢性高糖诱导的胰岛1 3 细胞氧化应激损伤中的作用 摘要 T h er o l eo fP E D Fi nt h ec h r o n i ch i g hg l u c o s - - o x i d a t i v es t r e s sl n 一1u r ，Yt o p a n c r e a U c A b s t r a c t O b j e
11、 c t i v e ： C h r o M eh i g hg l u c o s ec a nd a m a g et i s s u e sa n do r g a n so ft h eb o d y , i n c l u d i n gt h e p a n c r e a t i cpc e l l s R e c e n ty e a r s ，t h et h e o r yo fg l u c o s et o x i c i t yr e c e i v e de x t e n s i v ea t t e n t i o n ， i n d i c a t i n g
12、t h a tl o n g - t e r me x p o s u r et oh i g hc o n c e n t r a t i o n so fg l u c o s eC a nd e c r e a s et h e i n s u l i ns e c r e t i o no fp a n c r e a t i c1 3 - c e l l s ，a n di tw a si r r e v e r s i b l ed a m a g e d S t u d i e sh a v es h o w n t h a tt h em e c h a n i s mo fi
13、 tw a sh i g hg l u c o s e - i n d u c e di n t r a c e l l u l a ro x i d a t i v es t r e s sw h i c h c a u s e dp a n c r e a t i cb e t a - c e l li n j u r y P E D Fi sa ne n d o g e n o u sa n t i - o x i d a t i v es t r e s sf a c t o r A n u m b e ro fs t u d i e si nr e c e n ty e a r sa
14、 th o m ea n da b r o a dh a v es h o w nt h a ti th a dac l o s e r e l a t i o n s h i p w i t ho x i d a t i v es t r e s s - r e l a t e d d i s e a s e s ，s u c h a sM e t a b o l i c S y n d r o m e ， A b d o m i n a lo b e s i t y , D i a b e t i cn e p h r o p a t h y , e t c B a s i cs t u
15、d i e sh a v es h o w nt h a tP E D Fm a y p l a yp r o t e c t i v ee f f e c ta g a i n s to x i d a t i v es t r e s sp e r f o r m a n c ei nav a r i e t yo fc e l l st h r o u g h d i f f e r e n tw a y s H o w e v e r , r e p o r t sa b o u tt h ei s l e tc e l l sw e r er a r e T h ea i mo ft
16、 h i ss t u d yw a s t oi d e n t i f ya n de x p l o r et w ot h i n g s ：f i r s t ，t h ee f f e c to fd i f f e r e n tg l u c o s ec o n c e n t r a t i o no n I N N 一1 Ec e l li n t r a c e l l u l a rR O S g e n e r a t i o n 、c e l la c t i v i t y 、a p o p t o s i s r a t i oa n d g l u c o s e - s t i m u l a t e di n s u l i ns e c r e t i o n ；s e c o n d , w h e t h e rt h eP E D Fc o u l di m p
