《腰段连续硬膜外阻滞对大鼠妊高征的防治作用及机理的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《腰段连续硬膜外阻滞对大鼠妊高征的防治作用及机理的实验研究（86页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国医科大学 博士学位论文 腰段连续硬膜外阻滞对大鼠妊高征的防治作用及机理的实验研 究 姓名：董有静 申请学位级别：博士 专业：麻醉学 指导教师：崔健君 20040401 腰段连续硬膜外阻滞对大鼠妊高征的 防治作用及机理的实验研究 中文摘要 前言 妊高征( P I H ) 是一种多发生于妊娠2 0 周以后的以高血压、蛋白尿、水 肿为特征的多脏器功能受损的综合征，在妊娠妇女中的发病率约为7 1 0 。关于其发病原因及病理变化学说颇多，但至今尚无定论。因而有关 它的预防和治疗至今尚未找到满意的方法。妊高征是种交感神经激活状 态，妊高征的交感神经过度兴奋状态已被许多实验所证实，而这种状态可以 降低机
2、体的免疫力。在妊高征的病理生理过程中，交感神经系统放电加强， 血管张力增高，分娩后趋于正常。现在的研究认为：妊娠是一种成功的半同 种移植现象，其成功有赖于母一胎免疫平衡。妊高征的免疫发病机理在于 母一胎免疫平衡失调。随着生殖免疫学的进展，它的免疫学发病机制的研 究越来越得到重视。 目前，在妊高征的治疗上，产科临床以M g s o 。解痉为主，辅以降压、镇 静、利尿和适时终止妊娠的综合方法，在临床症状和并发症的控制和治疗中 效果并不十分满意。国外已有应用连续硬膜外阻滞治疗妊高征的报道并取 得了较满意的临床效果，但缺乏详细的研究及治疗机制的阐明，以致于影响 了该方法的广泛应用。在我科以往的研究中，
3、张丽红已发现颈交感神经干 离断对妊高征大鼠具有防治作用，说明从交感神经阻滞人手研究妊高征的 治疗方法是完全有可能的。本实验首次通过对妊高征大鼠应用腰段连续硬 膜外阻滞，探讨该方法对妊高征大鼠的防治作用及作用机制，为连续硬膜外 阻滞应用于临床治疗妊高征提供基础实验和理论依据，使之成为临床防治 妊高征的一种新的方法。 本研究分为三部分：一腰段连续硬膜外阻滞对妊高征大鼠的防治作用。 二腰段连续硬膜外阻滞对P I H 大鼠F a s F a s L 系统及C D 4 、c D 8 淋巴细胞免 疫功能的影响。三腰段连续硬膜外阻滞对妊高征大鼠I L 1 0 、T N F 一仪的 影响。 实验材料与方法 一
4、、实验材料 1 实验动物 选用健康雌性W i s t e r 大9 4 0 只，体重2 3 0 3 0 0 9 ( 由中国医科大学附 属第二医院动物实验室提供) ，在室温1 8 2 8 度，相对湿度4 0 - 7 0 的屏 障系统内饲养。 2 主要仪器 R B p 一1 型鼠尾动脉测压仪，电子天平A A - 2 5 0 ，杜邦T 2 1 低温高速离 心机，U P 2 0 0 H 超声波粉碎机，H E I D O L P HD I A 9 0 0 匀浆机，$ 5 0 0 一P 紫外 线、可见光连续分光光谱仪，K o d a kI D 型凝胶成像分析系统，B i o m e t r aP C R
5、扩增仪，O L Y M P U SB 6 0 显微照像系统，M e t a m o r p h 显微图像分析系统， S U N R I S E 酶标仪。 3 主要试剂 甲基左旋精氨酸甲酯( L N A M E ) ，C D 。、C D 。免疫组化染色试剂盒， C D 。、C D 。R T P C R 试剂盒( T a K a R a ) ，大鼠I L l O 定量E I A 试剂盒，T N F 一 0 【定量E I A 试剂盒。 二、实验方法 1 动物模型 参照O l s o n 等介绍的方法，根据实际情况作一定的改进，复制妊高征大 鼠模型。孕鼠硬膜外腔置管并长期留置。麻醉：采用1 0 水合氯
6、醛( 4 m k g ) 对大鼠进行腹腔注射，一般4 6 分钟即昏睡倒下。手术过程：动物取俯 卧位，腰部垫一直径2 5 c m 的圆筒，四肢及头部固定于手术台上，将背部备 皮消毒后铺洞巾，摸清两侧髂棘，其连线为L 6 ，在L 。：间隙处皮肤作一长约 2 c m 纵行切口，切开该处背脊肌的筋膜，切断L 问的韧带，分离L 2 脊突两 侧肌肉，大鼠脊柱尽量往前屈曲，用巾钳子夹住k 脊突往上提，用制备好的 无菌导管经黄韧带破口插入，方向向尾侧与脊柱纵轴平行，导管送入2 c m ， 如无清亮的脑脊液外溢即为位于硬膜外间隙。导管固定皮下，造隧道至大 鼠颈背部皮肤穿出，接无菌封闭接头，固定，避免感染及大鼠咬
7、噬。注药： 1 利多卡因2 0 一缓慢注入，大鼠马上出现双后肢及尾部麻痹，双前肢肌 2 力正常，为手术成功。其后按实验设计绘药。 2 试验动物分组：实验随机分四组，每组1 0 只。 A 对照组：孕鼠从妊娠的第1 4 天起每日皮下注射0 5 m l 生理盐水。 B 实验组：孕鼠从妊娠的第1 4 天起每日皮下注射L N A M E S 0 m g ( 8 a m 、5 p r o 各一次，每次2 5 m g ) 。 c 假手术组：孕鼠从妊娠的第1 4 天行硬膜外腔置管术，但不给药，余 同B 组。 D 治疗组：孕鼠从妊娠的第1 4 天行硬膜外腔置管术，每日注入0 1 2 5 B u p i v i
8、c a i n e2 5 出，8 a m 5 p m 各一次，余同B 组。 3 观察指标及方法 孕鼠 1 ) 体重、食量、尿量、入水量：于孕第1 3 、2 0 天将孕鼠置于代谢笼内，收 集尿液并测量体重、食量、尿量、入水量。 2 ) 血压：从妊娠的第1 3 天起，应用鼠尾动脉仪每日监测血压。 3 ) 尿蛋白：以磺柳酸法测孕鼠第1 3 、2 0 天尿蛋白含量，将收集的2 4 小 时尿液，以3 0 0 0 r m i n 离心1 5 m i n 取上清液送本院检验科即时检测，如隔日 检测，将样本放入O 一8 度冰箱待测。 4 ) 硝酸还原酶法检测子宫、胎盘组织的一氧化氮( N O ) 含量。 胎盘
9、及子宫 1 ) R T P C R ( 逆转录一聚合酶链式反应) 检测子宫、胎盘组织C D 。m R N A 、C D 。m R N A 的表达。 2 ) 免疫组化方法检测C D 。、C D 。蛋白的表达。 3 ) 原位杂交方法检测F a sm R N A 、F a s Lm R N A 的表达。 4 ) 采用双抗体夹心A B C E L I S A 法定量检测大鼠I L 1 0 含量。 5 ) 采用双抗体夹心A B C E L I S A 法定量检测大鼠T N F d 含量。 结果 1 腰段连续硬膜外阻滞对妊高征大鼠的作用： 1 ) 孕1 3 天各组间体重、食量、尿量、入水量无明显差别P O
10、 0 5 。 2 ) 孕2 0 天D 组较A 组体重、食量、尿量、入水量无明显差别P O 0 5 。 B 、c 组较A 、D 组体重增加P 0 0 5 ) 。D 组与B 、c 组相比C D 8 的灰度值明显降低( P 0 0 5 。各组子宫、胎盘R T P C R 后C D 。m R N A 的表 达B 、C 组较A 、D 组明显降低P 0 0 5 。 3 ) 各组子宫、胎盘原位杂交后F a sm R N A 、F a s Lm R N A 的表达 D 组与B 、C 组相比F a sm R N A 的A G V 明显增高( P 0 0 5 ) i nt h ea m o u n to fw e
11、 i g h t ，a p p e t i t e ，u f i n ea n di n c o m eo fw a t e ro nt h e1 3 “d a yo ft h e g e s t a t i o ni ne a c hg r o u p 2 C o m p a r et og r o u pA ，g r o u pDh a sn os i g n i f i c a n c e ( P 0 0 5 ) i nt h ea m o u n to fw e i g h t ，a p p e t i t e ，u r i n ea n di n c o m eo fw a t e
12、ro nt h e2 0 ”d a yo ft h eg e s t a t i o n C o m p a r et og r o u pA a n dg r o u pD ，g r o u pBa n dg r o u pCh a v ei n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l yi n t h ea m o u n to fw e i g h t ，d e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l yi nt h ea m o u n to f a p p e t i t ea n du r i n e ( P 0
13、 0 5 ) i nt h ea m o u n to f i n c o m eo f w a t e r ( P 0 0 5 ) 3T h e r ei sn os i g n i f i c a n c e ( P 0 0 s ) i nt h ea m o u n to f s y s t o l i cb l o o dp r e s s l n ea n dh e a r tr a t eo nt h e1 3 “d a yo ft h eg e s t a t i o ni ne a c hg r o u p ( P 0 0 5 ) C o m p a r et og r o u
14、 pA a n dg r o u pD ，g r o u pBa n dg r o u pCh a v ei n c r e a s e ds i g n i f i c a n d yi nt h ea m o u n to fs y s t o l i cb l o o dp r e s s u r ea n dh e a r tr a t eo nt h e2 0 出d a yo f t h eg e s t a t i o n ( P 0 0 5 ) C o m p a r et o g r o u pBa n dg r o u pC ，g r o u pDd e c r e a s
15、e ds i g n i f i c a n t l yi nA G Vo fC D 8 ( P 0 0 5 ) C o m p a r et og r o u p Ba n dg r o u pC ，g r o u pAa n dg r o u pDh a v ei n c r e a s e ds i g n i f i 。 c a n d yi nt h ee x p r e s s i o no fC D 8 m R N A o np l a c e n t aa n du t e r u s ( P 0 0 5 ) 3T h e e x p r e s s i o no fF a s
16、 m R N A a n dF a s L m R N Ad e t e c t e db yt h eo r i g i n a lb i t m a t em e a n so np l a c e n t aa n du t e r u si ne a c h g r o u p C o m p a r et og r o u pBa n d g r o u pC ，g r o u pD d e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l yi nA G Vo fF a s m R N Aa n dF a s L m R N A ( P 0 0 5 。B 、 c 组较A 、D 组体重增加P 0 0 5 ，食量下降P 0 0 5 ，尿量下降P 0 0 5 。 2 、各组孕鼠收缩压、心率的变化 表3 各组孕鼠孕1 3 天、2 0 天收缩压、心率的变化( X S ) 组别
