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1、 分类号 TS252.42 U D C 604 学校代码 10129 学 号 08209004 乳铁蛋白特性评价与研究 Evaluation and Research on the Characteristics of Lactoferrin 申 请 人：倪 丹 学科门类：工 学 学科专业：食品科学 研究方向：食品生物技术 指导教师：云战友 副教授 论文提交日期：二一一年五月 摘 要 乳铁蛋白是一种具有多种生理功能的天然活性糖蛋白，最先在乳汁中发现，后 来研究表明，它广泛存在于动物体的泪液、唾液、汗液、胰液、胆汁、精液等各种 分泌液中。乳铁蛋白及其水解产物乳铁蛋白活性多肽具有明显的抗菌、调节免
2、疫、 促进铁的吸收等多种生理功能。乳铁蛋白可与多种抗生素及抗真菌制剂协同作用， 可以更有效地治疗疾病；乳铁蛋白能调节体内铁的平衡，调节骨髓细胞生成，促进 细胞的生长；能抑制人体肿瘤细胞的生长，预防及治疗肿瘤。目前，将乳铁蛋白作 为一种全新营养素的研发已成为热点。 本课题研究了乳铁蛋白性能参数与其生物活性之间的关系。以目前针对乳铁蛋 白研究中较为成熟的铁饱和度，未变性乳铁蛋白含量为参数，还额外增加了脂多糖 含量作为评价参数。虽然还没有标准将脂多糖作为食品原料品质好坏的鉴定指标， 但脂多糖含量可以反映食品生产环境及生产过程中的洁净程度，也可以反映产品的 品质。通过乳铁蛋白对大肠杆菌的抑菌试验及对有
3、益菌的促菌试验，分析各类指标 与乳铁蛋白生物活性之间的关系，确定高品质乳铁蛋白的评价指标。 本试验在乳铁蛋白抑菌性试验方法的筛选过程中，比较了牛津杯法，平板菌落 计数法及测定菌液 OD 值法的抑菌效果，并认为牛津杯法不适用于乳铁蛋白抑菌效 果的测定。 通过单因素试验和多因素对照试验， 寻找影响乳铁蛋白生物活性的因素。 乳铁蛋白的含量，越高越好；脂多糖含量，越低越好；乳铁蛋白铁饱和度虽然是乳 铁蛋白一项重要的理化指标，但乳铁蛋白的铁饱和度与其抑菌和促菌活性间不存在 规律性。 关键字：乳铁蛋白；铁饱和度；脂多糖；性能评价 Evaluation and Research on the Charact
4、eristics of Lactoferrin Abstract lactoferrin(LF) is an iron-binding glycoprotein ,and it has various biological function. LF mainly exists in numerous exocrine secretions of mammals. Such as, tears, saliva, sweat, and pancreatic juice, bile, semen and so on, it was first found in milk. LF and its hy
5、drolysis product, Lactoferricin, not only have broad spectrum of antimicrobial properties, but also have the ability to improve antiviral activity, and anticancer activity, and immuno-regulatory anctivity of the body to prevent and cure infectious disease. LF has synergic effect in treatment for dis
6、ease when used together with several antibiotics and antifungal agents.LF can adjust the balance of iron in the body, adjust the marrow cells in differentiation, promote normal cells to grow, while inhibit the growth of tumor cells. At present, the study on LF as a brand-new nutrient has become a ho
7、tspot . In this paper,the relationship between biological activity of lactoferrin and its composition, suchi as iron saturation, lipopolysaccharide content was studied , through the E.coli bacteriostatic experiment and the probiotic bacteria promotion test, to get clear about the parameters that enf
8、luence lactoferrin quality. In the antibacterial test, different methods such as Cup 满足 0.5Es Et 2Es 则该样品在其测试浓度下凝胶试验的正式干扰试验有效，且对该灵敏度的鲎试 剂试验无影响。其他几种样品进行正式干扰试验的的稀释倍数结果如表 10： 表 10 所有样品的测定结果 Table10 The result of all samples 样品 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 干扰试验浓度 16 5 8 8 3.3.3 凝胶半定量试验 只有通过正式的干扰试验后，才可对样品进行凝胶半定量试
9、验。采用的鲎试剂 灵敏度为 0.06 Eu/ml，对样品进行凝胶半定量试验，测定结果如表 11： 20 乳铁蛋白特性评价与研究 表 11 = 0.06 Eu/ml 时的试验结果 Table11 The result of = 0.06 Eu/ml B-1 S1600 S3200 S6400 S12800 A-1 S1600E0.125 + + B-2 S16 S32 S64 S128 A-2 S16E0.125 + + B-3 S5 S10 S20 S40 A-3 S5E0.125 + + B-4 S8 S16 S32 S64 A-4 S8E0.125 + + B-5 S8 S16 S32 S
10、64 A-5 S8E0.125 + + C 2 /2 /4 D W + + + + 根据药典：若阴性对照溶液 D 的平行管均为阴性，供试品阳性对照 B 的 平行管均为阳性， 系列溶液 C 的反应终点浓度的几何平均值在 0.52 之间， 试验有效。 CE=1g-1(X/2)=1g-1lg(0.06) 2/2=0.06， 在 0.52 之间， 则试验有效。 因为试验中样品溶液的所有平行管均为阴性，根据药典应记为脂多糖浓 度小于 (如果检验的是稀释过的供试品，则记为小于 乘以供试品进行半定 量试验的初始稀释倍数)。即： 1g 1 号样品中含脂多糖的量应小于： (0.06 1600)/0.251000
11、=3.84 105 Eu 1g 2 号样品中含脂多糖的量应小于： (0.06 16)/0.25 1000=3.84 103 Eu 1g 3 号样品中含脂多糖的量应小于： (0.06 5)/0.251000=1.2 103 Eu 1g 4 号样品中含脂多糖的量应小于： (0.06 8)/0.251000=1.92103 Eu 1g 5 号样品中含脂多糖的量应小于： (0.06 8)/0.251000=1.92103 Eu 需要采用更高灵敏度的鲎试剂对所有样品进行测定，第二次采用的鲎试剂灵敏 度为 0.03 Eu/ml，对所有样品进行测定。其测定结果如表 12： 内蒙古农业大学硕士学位论文 21
12、表 12 = 0.03Eu/ml 时的试验结果 Table12 The result of = 0.03Eu/ml B-1 S1600 S3200 S6400 S12800 终点倍数 终点浓度 A-1 S1600E0.06 + + 3200 32000.03 + + + + 6400 64000.03 + B-2 S16 S32 S64 S128 终点倍数 终点浓度 A-2 S16E0.06 + 16 16 0.03 + + 16 16 0.03 + B-3 S5 S10 S20 S40 终点倍数 终点浓度 A-3 S5E0.06 + + + 20 20 0.03 + + + + 20 20
13、0.03 + B-4 S8 S16 S32 S64 终点倍数 终点浓度 A-4 S8E0.06 + + + 32 320.03 + + + 16 160.03 + B-4 S8 S16 S32 S64 终点倍数 终点浓度 A-4 S8E0.06 + + 16 160.03 + + + 16 160.03 + C 组 2 /2 /4 D 组 W + + + + 根据药典：若阴性对照溶液 D 的平行管均为阴性，供试品阳性对照 B 的 平行管均为阳性， 系列溶液 C 的反应终点浓度的几何平均值在 0.52 之间， 试验有效。 CE=1g-1(X/2)=1g-1lg(0.03) 2/2=0.03， 在
14、 0.52 之间， 则试验有效。 则所有样品的反应终点浓度的几何平均值分别为： CE1=1g-1(X/2)=1g-1lg(3200 0.03)+lg(6400 0.03)/2=135.7EU/ml CE2=1g-1(X/2)=1g-1lg(16 0.03) 2/2=0.48EU/ml CE3=1g-1(X/2)=1g-1lg(20 0.03) 2/2=0.6EU/ml CE4=1g-1(X/2)=1g-1lg(32 0.03)+lg(16 0.03)/2=0.678EU/ml CE5=1g-1(X/2)=1g-1lg(16 0.03) 2/2=0.48EU/ml 则样品中的脂多糖含量为： 1g
15、 1 号样品中含脂多糖的量= 135.7/0.25 1000 = 5.42105 Eu 1g 2 号样品中含脂多糖的量= 0.48/0.25 1000 = 1.92103 Eu 1g 3 号样品中含脂多糖的量= 0.6/0.25 1000 = 2.4103 Eu 1g 4 号样品中含脂多糖的量= 0.678/0.25 1000 = 2.712 103 Eu 22 乳铁蛋白特性评价与研究 1g 5 号样品中含脂多糖的量= 0.48/0.251000 =1.92 103 Eu 根据两次试验的结果可知，两次试验中部分样品的试验结果存在差异。因为， 在我国凝胶鲎试剂的灵敏度是人为统一规定的，即在 0.52 之间的鲎试剂都可 以认定其灵
