《当归补血汤血清抑制人肝癌细胞smmc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《当归补血汤血清抑制人肝癌细胞smmc（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、当归补血汤血清抑制人肝癌细胞SMMC 作者：李军昌，赵建斌，刘颖格，成晓娟，马世平，王文，郑谨，夏天 【关键词】 肝肿瘤 【Abstract】 AIM: To observe the effects of the serum of DangGuiBuXue Decoction (DGBXD) on the proliferation of SMMC7721. METHODS: 25 rabbits were divided into 5 groups at random and the rabbits sera of different time points were collected a
2、fter ig 50 mL of Naltrii chlorcid (9 g・L-1) or DGBXD with the dosage of 32 g, 16, 8, 4 g・kg-1. The culture medium of human heptocarinoma cell lines of SMMC7721 was treated by the rabbits sera. Effects of the sera on inhabiting proliferation of SMMC7721 were detected by MTT assay. RESUL
3、TS: The sera of DGBXD ig inhibited the proliferation of SMMC7721 dose and timedependent manner. Tmax was 45min after ig and the maximum effects of BGBXD was 0.460.05 (32 g・kg-1, P<0.01), 0.530.06 (16 g・kg-1, P<0.01), 0.550.04 (8 g・kg-1, P<0.05), 0.610.03 (4 g・kg-
4、1, P>0.05) vs control. ED50 was 122 g・kg-1 and T1/2 was 2.2 h. CONCLUSION: The sera of DangGuiBuXue Decoction can inhibit the proliferation of human liver cancer SMMC7721 in a dose and timedependent manner. 【Keywords】 Liver neoplasms; Danggui BuXue decoction; MTT 【摘要】 目的： 观察当归补血汤血清对SMMC772
5、1增殖影响的量效和时效关系. 方法： 采用纯种新西兰雄兔25只，随机分5组，分别给予50 mL的32, 16, 8和4 g・kg-1当归补血汤和生理盐水灌胃，于不同时间点收集血清，以MTT法测定上述血清对人肝癌细胞系SMMC7721增殖抑制作用. 结果： 当归补血汤血清对人肝癌细胞SMMC7721增殖有抑制作用，且具有时间和剂量依赖性，灌胃后45 min抑制作用最强，各组抑制强度分别为0.460.05 (32 g・kg-1, P<0.01), 0.530.06 (16 g・kg-1, P<0.01)， 0.550.04 (8 gӥ
6、9;kg-1, P<0.05)， 0.610.03 (4 g・kg-1, P>0.05). ED50为122 g・kg-1;效应半衰期为2.20 h. 结论： 当归补血汤经肠道进入体内具有一定的抑制肝癌细胞增殖的作用，该药效与时间和剂量相关. 【关键词】 肝肿瘤；当归补血汤；MTT法 0引言 当归补血汤为气血双补之剂，其抗肿瘤活性的药理研究多集中于免疫调节剂. 未见其体内成分抗肿瘤作用的研究. 我们采用血清药理学方法观察当归补血汤的抗肿瘤效应. 1材料和方法 1.1材料人肝癌细胞株SMMC7721由第四军医大学西京医院消化科引进. 细胞常规培养于含10
7、mL・L-1牛血清，青霉素10 kU・L-1的PRMI 1640培养液中，在37，50 mL・L-1 CO2充分温度条件下的细胞培养箱培养，34 d后以2.5 g・L-1胰蛋白酶消化后，吹打后以4107・L-1传代1次. 取对数生长期的细胞用于实验. 当归补血汤由51的黄芪、当归，放入不锈钢锅内，加6倍水，文火煮沸25 min，以三层纱布过滤，第2次沸水覆盖药渣，文火煮25 min过滤后，两次溶液合并，3000 r・min-1离心20 min，取上清浓缩至含生药1.5 kg・L-1，置4冰箱备用.
8、 雄性新西兰大白兔25只，（第四军医大学实验动物中心提供），体质量（2.00.1） kg，随机分五组，灌胃前禁食12 h，禁饮4 h，以200 g・L-1乌拉坦1.0 g・kg-1行静脉麻醉，分离并留置颈动脉导管，分别给予32， 16， 8和4 g・kg-1当归补血汤以生理盐水稀释至50 mL的液体及生理盐水50 mL灌胃，于灌胃即刻及灌胃后5, 10, 30, 45, 60, 90, 120, 180和 240 min由颈动脉导管无菌采血,分离血清，经56 30 min灭活处理，以0.45 m的微孔滤膜过滤除菌，置-20保存备用. 12方法将以4 1
9、07 ・L-1传代处于对数生长期的SMMC7721的细胞进行消化,以无血清PRMI 1640冲洗3次，以2107 ・L-1接种于96孔细胞培养板中，分别加入小牛血清及不同时间点的兔血清各150 L，各组设6个平行孔，按文献1培养68 h后加入MTT(5 g・L-1) 10 L,继续孵养4 h，吸弃培养上清，加入DM SO 100 L，振荡15 min，以酶联免疫检测仪在570 nm下测定吸光度A. 细胞生长抑制率=(对照组A平均值-实验组A平均值)/对照组A平均值100%. 统计学处理：应用SPSS10.0软件进行Probit回归分析以及方差分析与Du
10、nnett t检验. 2结果 当归补血汤可一定程度地抑制人肝癌细胞SMMC7721增殖，且有时间依赖性，与对照组比较，32 g・kg-1灌胃后,30, 45, 60和90 min均有明显抑制肿瘤细胞增长作用，所测值分别为0.490.01 (P<0.01)；0.460.05 (P<0.01)； 0.480.07 (P<0.01)； 0.500.06 （P<0.01）；达峰时间位于服药后45 min附近，分别服32, 16和8 g・kg-1均有显著抑制生长作用（P<0.05, Tab1），其抑制强度分别为28.1%，18.4%和11.4%.
11、 呈剂量依赖性（P<0.01），参考文献2方法计算最大抑制率单位对剂量直线回归方程： Ye=2.85+1.03log D, P<0.01. 抑制机率单位对消除相时间直线回归方程：Ye=4.40-0.141t, P<0.01 故：ED50=122 g・kg-1, t1/2=2.20 h. 表1当归补血汤血清抑制人肝癌细胞SMMC7721的增殖作用（略） Tab 1DGBXD seruminhibited the proliferation on SMMC7721( 略) 3讨论 本实验显示，当归补血汤抑制肝肿瘤细胞增殖的作用具有时间效应依赖性,一次给药后药物最大效
12、应在给药后45 min附近，效应半衰期在2.2 h；同时又呈量效依赖关系，随着给药量的增加，抑制效应更加明显，半效剂量为122 g・kg-1. 根据以上结果，显示该抑制肿瘤作用的药效物质起效快，维持时间较短，由复方来源的活性物质存在血清中，但活性物质浓度需进一步提高. 黄芪水提物具有抑癌活性物质3，而由黄芪等9种中药组成的复方在体外实验中亦有抑制前列腺癌细胞系增殖的作用4，该物质是否与本实验的活性物质具有相关性，需进一步研究. 灌胃后在4 h内采取不同点血清，经灭活处理后，与肝肿瘤细胞培养，在一定程度上抑制肿瘤细胞增殖，抑制强度最高可达28.1%，其作用机制正在研究. 【参考文献
13、】 1 Xu H, Shi DJ, Cheng KJ, Wang JH, Ma XC. Effect of Xiaongshao Capsule (XSC) on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells in Rabbits observed by serum pharmacological method J. Zhongguo Zhongxiyi Jiehe Zazhi (Chin J Intergr Tradt Western Med), 2000;(20)10:757-760. 2 Gao QF, Feng
14、KY, Zhang XY. Xian Dai Lin Chang Li Yao Xue (The Mordern Clinical Pharmacy) M. Beijing: Renmin Junyi Chubanshe (Peoples Military Surgeon Publishing House), 1997:431. 3 Xiao ZM, Song JG, Xu ZH, Jiang SM. The effect of the extracts from AMB on proliferation and mitochondria metabolism of human hepatom
15、a SMMC7721 cells J. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi (World Chin J Digestol), 2000;8(1):46-48. 4 Hsieh TC, Lu X, Guo J, Xiong W, Kunicki J, Darzynkiewicz, Wu JM . Effects of herbal preparation Equigard on hormoneresponsive and hormonerefractory prostate carcinoma cells: Mechanistic studies J. Int J Oncol, 2002;20(4):681-689.
