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1、陕西中医学院 硕士学位论文 朱砂七大黄素的研究 姓名：邓亚利 申请学位级别：硕士 专业：中药 指导教师：郭惠玲;张恩户 20040401 Y 6 4 0 7 7 3 中文摘要 目的从朱砂七中分离大黄素研究其在抗炎、镇痛、抗病毒方面的作用。 方法通过正交设计优选出分离朱砂七大黄素的最佳工艺参数，并用高效液相色 谱法测定含量。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验，研究朱砂七大黄素的抗炎作用； 采用热板法、扭体法研究其镇痛作用；采用鸡胚培养法进行朱砂七总蒽醌、朱砂 七大黄素体外抗流感病毒作用的研究。 结果分离朱砂七大黄素的最佳工艺为2 H 2 S 0 4 水解6 0 m i n ，加酸量3 0 0 m l
2、，氯 仿提取时间6 0 m i n ，氯仿用量为6 0 0 m l ，朱砂七大黄素含量为9 3 0 8 ：与空白 组比较，朱砂七大黄素大、中、小剂量组对小鼠耳廓肿胀均有显著性抑制作用 ( P R b = R c ，由此可见，A 为主要因素。根据最大k 值选出各因素 中的一个最佳水平即为最优组合条件。最优组合条件为A I B 2C 2 D 2 。 极差法只能观察各因素诸水平之间的差别，但不能估计实验误差，不能 回答各因素水平变化对实验结果的影响是实质性的还是偶然性的。解决这些 问题必须进行方差分析。 方差分析结果表明，因素A ( 酸水解时间) 为影响实验结果的主要因素 ( P 0 0 5 O 0
3、 5 0 0 5 O 0 5 O 0 5 0 0 5 O 0 5 0 0 5 0 0 5 与病毒对照组比较 表5 - - 5 结果显示：试验A 组中，流感病毒P R 8 株与受试药物等量混合作 用2 h 后再感染鸡胚，朱砂七大黄素在药液浓度为2 4 m g m l 时，其对流感病毒 P R 8 株有直接灭活作用( P 0 0 5 ) 。 ( 4 ) 朱砂七总蒽醌对流感病毒鸡胚增殖的抑制作用 朱砂七总恩醌药液对甲型流感病毒P R 8 株的抑制实验结果显示：接种朱砂七 总恩醌药液7 2 h 后，取胚观察，病毒对照组胚体发育偏小、有片状出血。阳性药 物对照组与正常对照组的鸡胚大小基本一致，无明显充血
4、。收获鸡胚尿囊液，测 定血凝滴度，计算其几何平均滴度( G M T ) ，结果见表5 - - 6 ： - 2 2 - 第五章朱砂七大站豢药理学实验 表5 6 朱砂七总葸醌对流感P R 8 株的抑制作用 $ 与病毒对照组比较 表5 6 结果显示：试验A 组中，流感病毒P R 8 株与受试药物等量混合作 用2 h 后再感染鸡胚，朱砂七总蒽醌在药液浓度为2 4 m g 提取物m l 时，其对流 感病毒P R 8 株有直接灭活作用( P O 0 5 ) 。先接种病毒后加药物组，朱砂七总 蒽醌在药物浓度为2 4 m g 提取物m l 时对流感P R 8 株在鸡胚内的增殖有抑制作 用( P O 0 5 )
5、 。 5 3 6 小结 对朱砂七大黄素、朱砂七总蒽醌体外抗流感病毒作用进行了实验研究，结果 表明： ( 1 ) 朱砂七大黄素、朱砂七总葸醌在药液浓度为2 4 m g 提取物m l 时，在 体外对流感病毒P R 8 株均有直接灭活作用( P O 0 5 ) 。 ( 2 ) 朱砂七大黄索药液的各个浓度对流感病毒P R 8 株在鸡胚内的增殖未见 有抑制作用。而朱砂七总蒽醌药液浓度在2 4 m g 提取物m l 时，对流感P R 8 株 陕谣中医学院硕士学位论文 在鸡胚内的增殖有抑制作用。 2 4 第六荦结论与讨论 6 1 讨论 第六章结论与讨论 ( 1 ) 心川省朱砂七药材标准中f 4 5 】仅打【
6、f f ：状】【羚刖】，分别为横切m 、粉术 显微黔别、耻化撩别，本文增j J 了( 4 ) ( 5 ) 州项薄层签别，亚”0 1 4 “ l k 。朱砂七药 材I ，总懋眦以纳合，艘存在，游离型龠j I 较少，一牧米进 J ：J | 0 效液J 1 I n 晰沾测 定药材I f I 朱砂t 2 火茹素含量f i 勺研究。 ( 2 ) 参考文献【8 l 刈分离纯化I , j f l J 朱砂进f l 。I 索( 大黄素) 进行了元素分析、 ；_ I 壕 分析、紫外光谱、2 l ：外光i 将们豁定，元累分析实验值C6 2 3 9 H4 1 0 ；紫外 比i 1 fj r i m ：2 1 8 ，
7、2 5 5 ，2 9 2 ，3 0 2 ( 行仙辇) ，4 5 6 ；I 外j 匕晰，c m ：3 3 9 0 ( 缔 。m ” ，m a n 台强越) ，1 7 6 0 ( 羰占) ，1 6 2 2 ( 缔合羰每) ，1 5 6 0 ，1 4 7 5 ( 艿土1 ：) ，9 0 6 ，8 8 0 ，8 5 4 ( 苯环I ：孤一铽) 。另确文献【7 1 对米砂- 匕大黄索制桥乙酞化物、苯I I I 酰化物、甲 占化物进 J ：掩定。本文采_ I ；| J tJ 门效液十色潴法以米砂L 人越采峰的俅衙I l C f J j 刈J ! ( 铺的侏科| 时M 。敛而进 J ：豁定，术见文I 敞报道
8、。I I r ：实验条仆所限，结构嘲证仃 待j ：进步研究。 ( 3 ) 葸眦类成分的蜮大吸收波长在2 1 7 、2 5 4 、2 8 8 、4 3 8 n m 附近，文献【33 J 多 采川4 3 8 n m 作为检测波长，测定人故索水解盯旧人她岽年人故酚，以 i l j 除水解 J 6 ：物的- r 扰，馊驰线S l j ：y - t l ，但捡测的灵敏发较2 5 4 n m 处低。_ ! ：【：献1 3 2 】J | j 反J 1 J l ： 设 液扪也晰i “ ：N 定虎杖捉墩物- I ，大黄豢的龠沌采J2 5 4 n m 为检测波长。朱砂七 大黄素在2 5 4 n m 处的色谱峰对称
9、，1 J I l ；线i H 【，必域度l _ ，敝选样榆测波K 为 2 5 4 n m 。 ( 4 ) 文献刈。朱砂t 总总雕抗炎作川进 n 州究，结粜农叫祚小时乇f _ | | | i f l l 竹 通透性试龄、人鼠址斟胀试验和火鼠椰球肉芽帅试验t l t ，以中剂量( 1 5 0 m 驰g ) 的抗炎效粜破好，人剂 待玉i 然钉较好的抗炎效果， ：H 砗；鲡t fz 刺：I 嘲l ，抗炎作用并 ，1 i 随约物剂I l = n 1 增加l | 增强。H 川文献( 3 4 】j 技逆，人前索次涨! 服3 0 殷6 0 m g k g 能娃并抑制f J 义浆胶敛小砒足N l l , I ,
10、 I t l i ，6 0 及1 0 0 m k g 能耻并抑制f 】义荣胶敏人 鼠址N l I l l t t - ：，儿随剖f 唐 f = c 【| ，搁制f 1 ：川增强；一次濑服9 0 及1 5 0 m g k g 能 i i l I 并抑 制m 艟t J I i g f l J 小瞄毛! _ l | | m 僻迎透I ! l ! f l q 增加， 纠J I _ i2 0 硬4 0 m g k g 能括搁m 4 们义 陕西中医学院硕士学位论义 菜胶引起的大鼠急性胸膜炎的渗出与白细胞游走。本文朱砂七大黄素对二甲苯所 致小鼠耳壳肿胀试验，灌服3 0 、6 0 、1 2 0 m g k g
11、 朱砂七大黄素有显著的抗炎作用 且有随剂量增加而作用增强的趋势。提示朱砂七中抗炎有效成分为游离型总蒽 醌。 ( 5 ) 文献1 1 2 1 报道，毛脉蓼( 朱砂七) 水煎液大剂量( 1 6 9 k g ) 、中剂量( 8 舭g ) 、 小剂量( 4 9 k g ) 组均可减少小鼠扭体次数，具有一定的镇痛作用：本文镇痛实 验( 扭体法、热板法) 结果表明：朱砂七大黄素各个剂量组均未见明显镇痛作用； 查阅文献，亦未见大黄素镇痛作用的报道。提示朱砂七的镇痛有效成分非游离型 蒽醌，而是水溶性成分，有待进一步研究而定。 ( 6 ) 朱砂七大黄素不易溶于水，在抗病毒试验中，为保证剂量的准确性，先 加入适量
12、的0 1 N 的氢氧化钠溶液溶解提取物，为加速溶解可用超声波处理，再 用无菌生理盐水稀释，配置成所需浓度即可。 ( 7 ) 文献峙艮道朱砂七水溶液对多种呼吸道及肠道病毒有广谱抗病毒作用。 本文朱砂七总蒽醌、朱砂七大黄素体外抗甲型流感病毒作用的实验结果表明朱砂 七大黄素、朱砂七总葸醌在药液浓度为2 4 m g 提取物I m l 时，在体外对流感病 毒P R 8 株均有直接灭活作用( P O 0 5 ) 。朱砂七大黄素药液的各个浓度对流感P R 8 株在鸡胚内的增殖未见有抑制作用。而朱砂七总葸醌药液浓度在2 4 m g 提取物 m l 时，对流感P R 8 株在鸡胚内的增殖有抑制作用。提示抗流感病
13、毒的有效成分 可能为结合型蒽醌，而非游离型葸醌，或其它水溶性成分，具体有效成分尚待进 一步研究确定。 6 2 结论 正交实验结果表明，分离朱砂七大黄素的最佳工艺参数为：1 0 9 朱砂七总蒽 醌加入2 硫酸3 0 0 m l ，酸水解6 0 m i n ，氯仿提取时间6 0 r a i n ，氯仿用量为6 0 0 m 1 。 采用高效液相色谱法测定提取所得的朱砂七大黄素含量为9 3 0 8 ，经方法 学验证表明：该方法具有简单、迅速、重现性好的优点。 抗炎实验结果表明：与空白组比较，朱砂七大黄素大、中、小剂量组对小鼠 耳廓肿胀均有显著性抑制作用( P 0 0 5 ) ，本工艺提取所得的朱砂七大
14、黄素具有显 著的抗炎作用。 第六章结论与讨论 镇痛实验结果表明：与空白组比较，三个剂量组均未显著减少小鼠扭体次数， 未显著提高小鼠热板痛闽，说明朱砂七大黄素在该剂量范围内无明显的镇痛作 用。 抗流感病毒实验结果表明：朱砂七大黄素、朱砂七总葸醌在药液浓度为2 4 m g 提取物m l 时，在体外对流感病毒P R 8 株均有直接灭活作用( P O 0 5 ) ；对流 感P R 8 株在鸡胚内的增殖，朱砂七大黄素各个浓度未见有抑制作用，而朱砂七总 蒽醌药液浓度在2 4 m g 提取物m l 时有抑制作用。 参考文献 参考文献 1 王北婴，李仪奎主编中药新药研制开发技术与方法上海：上海科学技术出版社
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