性激素对小鼠免疫反应的影响

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1、浙江大学硕士学位论文 I 分类号： 单位代码： 10335 密 级： 公开 学 号： 20817069 硕硕 士士 学学 位位 论论 文文 中文论文题目：中文论文题目： 性激素对小鼠免疫的影响性激素对小鼠免疫的影响 英文论文题目：英文论文题目： Influence of immunity in mice by sexual hormone 申请人姓名：吴丽华申请人姓名：吴丽华 指导教师：胡松华指导教师：胡松华 教授教授 专业名称：临床兽医学专业名称：临床兽医学 研究方向：天然药物与动物疾病防治研究方向：天然药物与动物疾病防治 所在学院：动物科学学院所在学院：动物科学学院 论文提交日期二零壹零年

2、四月论文提交日期二零壹零年四月 浙江大学硕士学位论文 II 性激素对小鼠免疫的影响性激素对小鼠免疫的影响 论文作者签名论文作者签名: 论文评阅人 1： 评阅人 2： 评阅人 3： 评阅人 4： 评阅人 5： 答辩委员会主席： 委员 1： 委员 2： 委员 3： 委员 4： 委员 5： 答辩日期： TCVMLAB 浙江大学硕士学位论文 III 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果， 也不包含为获得 浙江大学浙江大学 或其他教育机构的学位或 证

3、书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 浙江大学浙江大学 有权保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权 浙江大学浙江大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播， 可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 浙江大学硕士学位论文 IV 目 录 摘摘

4、 要要 .1 Abstract.4 第一部分第一部分 文献综述文献综述 .7 第一章第一章 性激素对免疫功能的影响性激素对免疫功能的影响.7 1 性激素对免疫的影响.7 1.1 雌激素对免疫的影响.7 1.2 雄激素对免疫的影响.8 1.3 孕激素对免疫的影响.9 2 抗性激素药物10 2.1 抗雌激素药物.10 2.2 抗雄激素药物.11 3、人参皂甙的雌激素样作用.12 4、本研究的目的意义和研究内容.15 第二部分第二部分 实验研究实验研究 .18 第二章第二章 外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响.18 1. 材料18 1.1 试验动物.18 1.2

5、 抗原与佐剂.18 1.3 试剂和仪器.19 2. 方法19 2.1 疫苗、佐剂配制.19 2.2 分组和免疫程序.20 2.3 淋巴细胞增殖的检测20 2.4 血清特异性抗体的测定.21 2.5 细胞因子的 RT-PCR 法测定.22 2.6 数据分析.25 3、结果.26 3.1 外源雌激素对血清特异性抗体的影响.26 3.2 外源雌激素对淋巴细胞体外增殖的影响.27 3.3 外源雌激素对淋巴细胞产生细胞因子 mRNA 水平的影响.28 3.4 外源雌激素对淋巴细胞产生转录因子 mRNA 水平的影响.29 4、本章小节.29 第三章第三章 外源性雄激素对雄性小鼠免疫应答的影响外源性雄激素对

6、雄性小鼠免疫应答的影响.30 1、材料.30 1.1 试验动物.30 1.2 抗原与佐剂.30 1.3 试剂和仪器.30 2. 方法31 2.1 疫苗、佐剂配制.31 2.2 分组和免疫程序.31 2.3 淋巴细胞增殖的检测32 2.4 血清特异性抗体及其亚类的测定32 浙江大学硕士学位论文 V 2.5 细胞因子的 RT-PCR 法测定32 2.6 数据分析.32 3、结果.32 3.1 外源雄激素对血清特异性抗体的影响.32 3.2 外源雄激素对淋巴细胞体外增殖的影响.34 3.3 外源雄激素对淋巴细胞产生细胞因子基因 mRNA 水平的影响.35 3.4 外源雄激素对淋巴细胞产生转录因子基因

7、 mRNA 水平的影响.36 4、本章小节.36 第四章第四章 同种异性对免疫反应的影响同种异性对免疫反应的影响.37 1、材料.37 1.1 试验动物.37 1.2 抗原.37 1.3 试剂和仪器.37 2. 方法38 2.1 伴侣雄鼠的输精管结扎.38 2.2 分组和免疫程序.39 2.3 血清特异性抗体的测定40 2.4 双抗体夹心 ABC-ELISA 法定量测定小鼠血清中的性激素激素含量 40 2.5 细胞因子的 RT-PCR 法测定.42 3、结果与分析.42 3.1 同种异性小鼠混合饲养对血清中性激素水平的影响.42 3.2 同种异性小鼠混合饲养对血清特异性抗体水平的影响.43 3

8、.3 同种异性对淋巴细胞产生细胞因子 mRNA 水平的影响.44 3.4 同种异性对淋巴细胞产生转录因子 mRNA 水平的影响.45 4、本章小节.46 第五章第五章 综合讨论综合讨论 .47 1、 外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响.47 2、外源性雄激素对雄性小鼠免疫应答的影响.48 3、 同种异性对免疫应答的影响.49 结论结论 .51 创新点创新点 .52 后续研究展望后续研究展望 .53 参考文献参考文献 .54 附录附录 常用试剂配方常用试剂配方 .59 致致 谢谢 .61 攻读硕士学位期间主要的研究成果攻读硕士学位期间主要的研究成果.62 浙江大学硕士学位论文 性激素对小鼠免疫

9、的影响 1 摘摘 要要 传染性疾病的防控一直是规模养殖场的工作重点， 疫苗接种是预防传染病的 有效方法之一， 但免疫失败的情况仍时有发生， 给畜牧业造成了巨大的经济损失。 畜禽机体产生免疫应答是一个复杂的，受多种因素影响的过程，在影响机体免疫 应答能力的诸多因子中，性激素的作用不可忽视。本论文研究了外源性雌激素、 外源性雄激素以及异性对小鼠免疫应答的影响， 为在实践中如何增强机体的免疫 应答作用提供参考。 1、外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响外源性雌激素对雌性小鼠免疫应答的影响 目的目的 观察雌二醇和具有雌激素样作用的人参皂甙 Rb1 和 Rgl 对雌鼠的免疫 应答的影响。方法方法 将 7

10、2 只 ICR 小鼠随机分为 9 组，每组 8 只。给抑制剂对照 组连续一周经腹股沟皮下注射 ICI182,780 (氟维斯群) (200 g/d)后，各组分别按 如下方案进行免疫：组 1：生理盐水；组 2：OVA(10 g)；组 3：200 g ICI (注 射含 10 g OVA 和 200 g ICI 的混合疫苗，下同)；组 4：30 g 雌二醇(E2)；组 5：30 g E2 + 200 g ICI；组 6：50 g Rb1；组 7：50 g Rb1 + 200 g ICI；组 8： 50 g Rg1；组 9：50 g Rg1 + 200 g ICI。3 周后加强免疫一次，方法同前。在

11、 免疫后 2 周采血测血清抗 OVA 特异性抗体 IgG 及其亚类水平；无菌分离脾淋巴 细胞后，采用 MTT 法检测淋巴细胞增殖；RT-PCR 法测定脾淋巴细胞表达细胞 因子 mRNA 的水平。结果结果 外源雌激素(E2)可以提高小鼠的抗 OVA 特异性抗体 水平以及抗体亚类 IgG1 水平，细胞因子(IFN-、IL-12、IL-4 和 IL-10)和转录因 子(T-bet 和 GATA-3)的 mRNA 表达水平， 且均显著高于其抑制剂对照组。 具有雌 激素样作用的人参皂甙 Rg1、Rb1 可以提高小鼠抗 OVA 特异性抗体 IgG 和抗体 亚类水平，显著促进脾脏淋巴细胞增殖能力和 4 种细

12、胞因子和 2 种转录因子的 mRNA 表达水平，且均显著高于或稍高于各自的抑制剂对照组。结论结论 雌激素和 人参皂甙 Rg1、Rb1 都具有免疫调节作用，雌激素主要促进 Th2 型免疫应答，人 参皂甙可促进 Th1 和 Th2 型免疫应答。 雌激素和人参皂甙 Rg1、 Rb1 的免疫调节 作用与雌激素受体存在一定关联。 浙江大学硕士学位论文 性激素对小鼠免疫的影响 2 2、外源性雄激素对雄性小鼠免疫应答的影响、外源性雄激素对雄性小鼠免疫应答的影响 目的目的 观察睾酮(Te)对小鼠的免疫应答的影响，同时运用雄激素受体拮抗剂 氟他胺， 研究人参皂甙的免疫调节作用是否与雄激素受体有关。 方法方法 将

13、72只ICR 小鼠随机分为 9 组，每组 8 只。对抑制剂对照组连续一周经腹股沟皮下注射氟他 胺 (300 g /d)后， 各组分别按如下方案进行免疫： 组 1： 生理盐水； 组 2： OVA (10 g)； 组 3： 300 g Flu (注射含 10 g OVA 和 300 g Flu 的混合疫苗， 下同)； 组 4： 50 g Te； 组 5： 50 g Te+ 300 g Flu； 组 6： 50 g Rb1； 组 7： 50 g Rb1 + 300 g Flu；组 8：50 g Rg1；组 9：50 g Rg1 + 300 g Flu。3 周后加强免疫一次，方 法同前。在免疫后 2

14、周采血测血清抗 OVA 特异性抗体 IgG 及其亚类水平；无菌 分离脾淋巴细胞后，采用 MTT 法检测淋巴细胞增殖；RT-PCR 法测定脾淋巴细 胞表达细胞因子 mRNA 的水平。结果结果 外源雄激素不能提高小鼠抗 OVA 特异性 抗体和各抗体亚类水平以及淋巴细胞转化能力， 且与雄激素抑制剂对照组未形成 显著差异；人参皂甙 Rg1、Rb1 可以提高小鼠抗 OVA 特异性免疫应答水平，但 较其雄激素抑制剂对照组无显著差异。结论结论 雄激素不能上调机体对抗原注射的 免疫应答反应，且与雄激素受体之间的关联性不明显。人参皂甙的免疫调节作用 与雄激素受体无关。 3、同种异性小鼠对免疫反应的影响、同种异性小鼠对免疫反应的影响 目的目的 观察同种异性对小鼠激素水平及其对免疫反应的影响。方法方法 实验一： 将 30 只 ICR 雌鼠随机分成 3 组，每组 10 只，第 3 组中添加一只雄鼠(为防止雌 鼠怀孕，在试验前对此雄鼠实行了输精管结扎术)。实验二：将 30 只 ICR 雄鼠 随机分成3组， 每组10只， 第3组多一只雌鼠。 分别注射生理盐水(组1)或OVA(组 2，组 3)，3 周后加强免疫一次，方法同前。2 免后 2 周眼眶采血，双抗体夹心 AB