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1、细胞生物学（II）实验指导学号 学院 专业 班级 姓名 二一三年八月目 录实验一 普通光学显微镜及其使用.3实验二 细胞减数分裂 8实验三 细胞骨架的显微镜观察11实验四 RNA的细胞化学Brachet反应 13实验五 果蝇唾液腺细胞巨大染色体的观察.15实验六 小鼠巨噬细胞吞噬的观察.20实验七 动物骨髓细胞染色体标本的制备.22实验八 动物细胞融合.25实验九 人体外周血淋巴细胞培养与核型分析.29 实验十 常规组织切片制作法.3135实验一 普通光学显微镜及其使用实验目的1.理解普通光学显微镜的机械系统和光学系统的结构组成及其工作原理。2. 熟练掌握普通光学显微镜的使用方法并进行实际操作
2、。一、显微镜的主要构造 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。 1. 机械部分 （1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。 （2）镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。 （3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。 （4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。 （5）物镜转换器(旋转器)：接于镜筒的下方，可自由转动，盘上有46个圆孔，是安装物镜部位。转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心。光路接通，即可进行观察；（6）镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用
3、以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器)，推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左右、前后方向的移动。（7）调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。 粗调节器(粗螺旋)：移动时可使镜台作快速和较大辐度的升降，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。 细调节器(细螺旋)：多在运用高倍镜时使用。图1普通正置显微镜结构图图2倒置光学显微镜结构图 2照明部分 装在镜台下方，包括光源，集光器。 （1）光源：灯泡或者发光LED管。 （2）集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组
4、成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。 聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野中光亮度的强弱。 光圈：在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节光的亮度和标本的反差。 3.光学部分 （1）目镜：装在镜筒的上端，通常备有23个，上面刻有5、10或15符号以表示其放大倍数，一般装的是10的目镜。 （2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有46个物镜，其中最短的刻有“10”符号的为低倍镜，较长的刻有“20”、“40”符号的为高倍镜，最长的刻有“100”符号的
5、为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。 在物镜上，还有数值孔径(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的数值孔径如下表： 物镜数值孔径(N.A.)工作距离(mm)100.255.40400.650.391001.250.11 表中的工作距离是指显微镜处于工作状态(物象调节清楚)时物镜的下表面与盖玻片(盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之间的距离，物镜的放大倍数愈大，它的工作距离愈小。 显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为10，目镜为10，其放大倍数就为1010=100。 二、显微镜的使用方法1.
6、 光路调整（1）首先选用“10”物镜和“10”目镜。（2）把聚光镜升到顶端的位置，孔径光阑调至适中的位置。（3）载物台上放置玻片标本，打开光源，调焦清晰。（4）视野中出现一个局部照明的区域或亮斑。（5）把聚光镜缓慢地上下调节，使视野中的亮斑逐渐变成一个清晰的多边形图像。（6）如果光路没有调中，则多边形图像就不在视野中央，需要调整聚光镜旁的一对调中螺丝，把视场光阑多边形的像调至中央位置。（7）逐渐开大视场光阑，使多边形象成为视域的内接多边形，进一步核对调中的状况，如对中不够理想，继续微微调对中螺丝；（8）将视场光阑稍为再微微开大一些，使它的多边形象恰好消失在视域的边缘上，至此，照明系统调整完毕。
7、2低倍镜的使用方法 （1）将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边12寸为宜，便于坐着操作； （2）对光：用拇指和中指移动旋转器(切忌手持物镜移动)，使低倍镜对准镜台的通光孔(当转动听到碰叩声时，说明物镜光轴已对准镜筒中心)。打开光圈，上升集光器，打开电源，适度调节光亮度，直到视野内的光线均匀明亮为止； （3）放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位调到通光孔的正中； （4）调节焦距：以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注意在上升镜台时，切勿在目镜上观察
8、。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。然后，两眼同时睁开，用左眼在目镜上观察，左手顺时针方向缓慢转动粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止； 3高倍镜的使用方法 （1）选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高倍镜的观察。 （2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片)，如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。 （3）调节焦距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动
9、约0.51圈，即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!) 如果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时，必须顺时针(切勿转错方向)转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。4油镜的使用方法 （1）在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 （2）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。 （3）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。 （4）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 如果不出现物象或
10、者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍高倍油镜程序。在加油区内重找应按：低倍油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。 （5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯或者（乙醚:乙醇=7:3）将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。 三、显微镜使用的注意事项 1持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。 2轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。 3保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。 4水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。 5放置玻片标本时要
11、对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。 6要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图。 7不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。 8使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下降镜台，亮度调至最暗然后关电源。下降集光器、关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后填写使用登记表。实验二 细胞减数分裂实验目的1了解动、植物生殖细胞的形成过程。 2了解生殖细胞减数分裂发生过程及各个时期的染色体和细胞变化特点，加深对减数分裂意义的认识。 3掌握减数分裂标本的制备方法。 实验原理减
12、数分裂是一种特殊方式的细胞分裂，仅在配子形成过程中发生。这一过程的特点是：细胞连续进行两次核分裂，而染色体只复制一次，减数分裂结束形成四个子细胞（配子），每个子细胞染色体数目减少一半（n）。经过受精作用，雌雄配子融合为合子，染色体数目又恢复母细胞的水平（2n）。这样在物种延续的过程中确保了染色体数目的恒定，从而使物种在遗传上具有相对的稳定性。另外，在减数分裂过程中包含的同源染色体配对、交换、分离和非同源染色体的自由组合，充分体现了遗传的三大规律，在丰富基因的多样性中起着重要的作用。 实验仪器、材料和试剂（一） 仪器与用具 显微镜、钟表镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸 （二） 材料 蝗虫精巢
13、、玉米雄穗（三） 试剂 乙醇、冰醋酸、改良苯酚品红染色液。方法与步骤（一）玉米花粉母细胞减数分裂的观察 1取材在雌穗未抽出前710天，而雄花序即将抽出（手摸植株上部喇叭口处有松软感觉），以上午911时取样为好，此时减数分裂较盛。剥去雄穗外部叶片，露出幼穗，新鲜幼穗可直接压片观察，也可用Carnoy固定液固定1224小时，再经95%和85%乙醇各30min，最后放在70%乙醇中4保存，可随时取用。2染色、制片取适当大小颖花各一朵，置载玻片上，用解剖针剥开内外颖，将花药剔出，加一滴改良苯酚品红染色液染色10min，边染色边用镊子轻轻捣碎花药，最后用镊子除去残渣，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周多余的染
14、液。 3镜检在显微镜下检查花粉母细胞、二分体、四分体以及各个时期的细胞。花粉母细胞与一般体细胞的区别是细胞外有一层较厚的透明胼胝质壁，同时，细胞体积较近似等径的多角形，核也较大。 （二）蝗虫精母细胞减数分裂的观察 蝗虫精巢取材方便，标本制备方法简单，染色体数目较少，分裂过程清楚。蝗虫初级精母细胞染色体数2n=22+X，经过减数分裂形成四个精细胞，每个精细胞染色体数为n=11+X或n=11（注：蝗虫的性别决定与人类不同，雌性有两条XX染色体，雄性为XO，即只有一条X染色体，没有Y染色体）。 1取样以夏、秋两季采集为宜，因此时蝗虫精母细胞正处于减数分裂旺期。蝗虫雌雄个体易于区别，一般雄虫个体较小，其腹部末端为交配器，形似船尾，而雌体较大，腹部末端分叉。 2固定捕捉后将雄虫腹部剥开，取出精巢，放入Carno
