乙型肝炎病毒hbx蛋白的表达纯化及全基因组蛋白与宿主蛋白之间相互作用组模型的建立

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1、I l U l I I I I I I Il l l l l l l l l U l l l l l l U l l l l l l l l l l l l l l l R I Y 18 0 2 3 6 1 分类号密级 UDC 学号 2 0 0 5 0 1 6 博士学位论文 乙型肝炎病毒H B x 蛋白的表达纯化及全基因组 蛋白与宿主蛋白之间相互作用组模型的建立 刘东 指导教师吴玉章教授 第三军医大学全军免疫学研究所,4 0 0 0 3 8 申请学位级别博士科学学位专业名称免疫学 论文提交日期2 0 0 8 年1 1 月论文答辩日期2 0 0 8 年1 2 月 学位授予单位和日期第三军医大学2

2、 0 0 8 年月 答辩委员会主席 吐宣:豳 评 阅 人盔a 缝整:垄鱼蕉:至醚乞苎薹丝:叠:5 釜 二OO 八年十一月 第三军医大学研究生学位论文独创性声明 秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在 导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别 加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究 成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料, 与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。 论文作者签名:丝虽:日期:丝塑:2 第三军

3、医大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离 校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查 阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ,可 以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名: 型函: 指导教师签名:亟墨名 日期:2 砷寥他 目录 英文缩写一览表l 英文摘要3 中文摘要6 论文正文乙型肝炎病毒H B x 蛋白的表达纯化及全基因组蛋白与宿主蛋白之间相互作

4、用组模型的建立 第一部分乙型肝炎病毒H B x 蛋白的表达与纯化9 前言9日U舌 材料与方法1 0 结果1 8 讨论2 4 第二部分H B V 全基因组蛋白与宿主蛋白之间相互作用组模型的建立2 6 前言2 6日U舌Z 0 材料与方法2 6 结果3 4 讨论3 9 全文结论4 l 致谢4 2 文献综述一H B x 蛋白的功能与生物学作用及其表达纯化的研究4 3 参考文献5 2 文献综述二H B V 与宿主的相互作用组及其研究技术5 9 参考文献6 8 博士期间拟发表的文章7 3 英文论著7 4 第二军医入学博七学位论文 简写 H B V H C C H B x M B P T A P B T I

5、 R E S T P A N E S R P B 5 N E R X P B F A K P y k 2 W H V N L S O I S E B N A l D I G E I C A T S I L A C 英文缩写一览表 英文全称中文全称 H e p a t i t i sB v i r u s乙型肝炎病毒 H e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a 肝细胞癌 H e p a t i t i sB v i r u sX p r o t e i n乙型肝炎病毒x 蛋白 M a l t o s eb i n d i n gp r o t e i

6、 n麦芽糖结合蛋白 T a n d e ma f f i n i t yp u r i f i c a t i o n串联亲和纯化 B i o t i n y l a t i o nt a g生物素化标签 I n t e r n a lr i b o s o m ee n t r ys i t e 内部核糖体进入位点 1 2 O - t e t r a d e c a n o y l p h o r b o l 一1 3 一a c e t a t e 1 2 O 一十四烷酰佛波醋酸酯1 3 N u c l e a re x p o r ts i g n a l核输出信号 R N A p o l

7、 y m e r a s es u b u n i t5R N A 多聚酶亚基5 N u c l e o t i d ee x c i s i o nr e p a i r核苷酸剪切修复 X e r o d e r m ap i g m e n t o s aB 着色性干皮病B F o c a la d h e s i o nk i n a s e黏着斑激酶 P r o l i n er i c ht y r o s i n ek i n a s e 富含脯氨酸的酪氨酸激酶 W o o d c h u c kh e p a t i t i sv i r u s土拨鼠肝炎病毒 N u c l e

8、 a rl o c a l i z i n gs i g n a l核定位信号 O n c o g e n ei n d u c e ds e n e s c e n c e癌基因诱导的衰老 E p s t e i n B a r rn u c l e a ra n t i g e n lE B 病毒核抗原l D i f f e r e n c eG e lE l e c t r o p h o r e s i s差异凝胶电泳 I s o t o p e - c o d e d a f f i n i t y t a g同位素亲和标签 S t a b l e I s o t o p eL a

9、b e l i n g w i t hA m i n o 细胞培养基中氨基酸的同位 A c i d si nC e l lC u l t u r e s素标记 E G T A E t h y l e n eg l y c o lt e t r a a c e t i ca c i d 乙二醇二乙醚二胺四乙酸 E R K E x r a C e l l u l a r s i g n a l r e g u l a e d p r 。e i n 胞外信号调节激酶 k i n a s e 第二军医人学博十学位论文 T B P T A T A - b i n d i n gp r o t e i n

10、 S T 气T s P B S H R P T N F Q F C S G A P D H T A T A 结合蛋白 s i g n a l r a n s d u c e r s a n d a c i V a 。r 叭信号传导和转录激活因子 t r a n s c r i p t i o n P h o s p h a t e b u f f e r e ds a l i n es o l u t i o n 磷酸缓冲液 H o r s e r a d i s hp e r o x i d a s e T u m o rn e c r o s i sf a c t o r Q F e t

11、a lc a l fs e r u m G l y c e r a l d e h y d e 一3 一p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e 辣根过氧化物酶 肿瘤坏死因子 胎牛血清 甘油醛3 磷酸激酶 m a t r i xa s s i s t e dl a s e rd e s o r p t i o n M A L D I T O F 基体辅助激光解吸电离飞行 M S i o n i z a t i o nt i m e - o f - f l i g h tm a s s s p e c t r o m e t r y 2 时间质谱 第

12、三军医人学博士学位论文 E x p r e s s i o na n d w i f i c a t i o no fh e p a t i t i sBv i r u sprotc“tl p u r lh e p a t i t i s VXp r o t e i n a n de s t a b l i s h m e n to fm o d e l so fH B Vh o s ti n t e r a c t o m e e s t a b l i s hn te l sV - 1 1 0 s ti n t e r a c t o0 t A b s t r a c t C h r o

13、n i ci n f e c t i o no fh e p a t i t i sBv i r u s ( H B V ) i so n eo ft h em a jo rc a u s e so f h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a ( H C C ) w h i l eH B V - r e l a t e dH C Ci sa m o n gt h et o p 10m o s t c o m m o nc a n c e r si nt h ew o r l d A tp r e s e n t ,a p p r o x i m

14、 a t e l y2 0 0m i l l i o np e o p l ea r ec h r o n i c a l l y i n f e c t e d ,S Ot h a tH B Vi ss t i l lam a j o rp r o b l e mt oh u m a nh e a l t h A l t h o u g ht h ep a t h o g e n e s i s o fH B V - r e l a t e dH C Ch a sn o tb e e nf u l l yd e s c r i b e d ,e v i d e n c es u g g e s t st h a tH B xp l a y sa c r u c i a lr o l ei nt h ep a t h o g e n e s i s

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