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1、分类号： w i t hD e n d r i t i cc e l l s 博士研究生：李么明 指导教师：陈焕春院士 专 业：预防兽医学 研究方向：病原分子生物学 获得学位名称： 农学博士 获得学位时间： 华中农业大学动物科技与动物医学院 二零零九年十二月 华中农业大学学位论文独创性声明及使用，J I I l l l l ! l l l 1 1 8 l l l l l l 。l f I 5 l l l l l l 3 l l l l l f l l I I I 磐 学位论文 圣 如需保密，解密时间年月日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究
2、成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名：老么瞻时间：加厶7 年f7 月多。日 学位论文使用授权书 注：保密学位论文( 即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 始勿噜锄始缘结 签名魄叼钊月弓。日 签名c 岬年月弓。日 注：请将本表商接装订在学何论文的扉页和冈录之问 乙型脑炎病毒与树突状细胞的互作研究 目录 摘 要I A B S T
3、 R A C T I I I 第l 章文献综述l 1 1 乙型脑炎及其危害l 1 2 乙型脑炎病毒的病原学特征”1 1 2 1 乙型脑炎病毒的理化性质1 1 2 2 乙脑致病机制”2 1 3J E V 分子生物学研究进展“3 1 3 1 基因组结构和功能”3 1 3 2 病毒合成过程4 1 3 3 病毒毒株间变异4 1 4 乙型脑炎的流行病学特性”4 1 4 1 流行特征5 1 4 2 传播媒介6 1 4 3 宿主6 1 5 乙型脑炎疫苗”6 1 5 1 人用疫苗7 1 5 2 兽用疫苗9 1 5 3 开发中的乙脑疫苗9 1 6 乙型脑炎诊断方法研究进展1 0 1 6 1 病毒分离鉴定1 0
4、1 6 2 病原学鉴定“l l 1 6 3 血清学检测l l 1 7 树突状细胞研究进展1 2 1 7 1D C 分离与培养1 2 1 7 2D C 生物学特征”1 3 1 7 3D C 作为疫苗载体1 4 第2 章乙型脑炎病毒树突状细胞载体疫苗研究1 6 2 1 前言”l6 2 2 材料和方法1 6 2 2 1 材料16 2 2 2 方法l7 ”2 2 “2 2 ”2 2 I F N - tm R N A 水平2 3 T N F U t 和I L 6 ”2 4 2 5 2 3 7 灭活病毒刺激的b m D C s 对致死性J E V 的保护率2 6 2 4 讨论2 7 2 5 小结2 8 第
5、3 章乙型脑炎病毒强毒株与树突状细胞的相互作用2 9 3 1 前言”2 9 3 2 材料和方法3 0 3 2 1 材料3 0 3 2 2 方法3l 3 3 结果与分析”3 6 3 3 1J E VP 3 株对体内与体外树突状细胞的感染性研究3 6 3 3 2 乙脑病毒感染树突状细胞对细胞表型的影响”3 9 3 3 3 乙脑病毒感染树突状细胞对细胞因子分泌的改变4 1 3 3 4 乙脑病毒感染树突状细胞对T 细胞激活的影响4 2 3 3 5 乙脑病毒感染树突状细胞对T 调节细胞分化的影响4 3 3 4 讨论4 5 3 5 小结4 7 第4 章乙型脑炎病毒弱毒株与树突状细胞的相互作用4 8 4 1
6、 前沿“4 8 4 2 材料和方法( 见3 2 ) 4 8 4 3 结果与分析”4 8 4 3 1J E VS A l 4 1 4 2 对树突状细胞的感染性研究4 8 4 3 2J E VS A l 4 1 4 2 感染树突状细胞对细胞表型的影响5 l 4 3 3J E VS A l 4 1 4 2 感染树突状细胞对细胞因子分泌的改变5 1 4 3 4J E VS A l 4 1 4 2 感染树突状细胞对T 细胞激活的影响5 3 4 3 5 乙脑病毒感染树突状细胞对T 调节细胞分化的影响5 4 4 4 讨论5 5 4 5 ，J 、结5 6 第5 章乙型脑炎病毒胶体金检测方法的初步研究5 7 5
7、 1 前言一5 7 乙型脑炎病毒与树突状细胞的互作研究 5 2 材料和方法”5 7 5 2 1 材料5 7 5 2 2 方法6 0 5 3 结果与分析“6 5 5 3 1 重组质粒p K G E 的构建和J E VE 蛋白表达6 6 5 3 2J E VE 单抗活性鉴定6 7 5 3 3J E VE 单抗特性分析6 7 5 3 4 检测病毒抗原的胶体金试纸条的设计6 8 5 3 5 检测病毒胶体金试纸条敏感性试验6 9 5 3 6 检测病毒胶体金试纸条特异性试验7 0 5 3 7 胶体金试纸条与R T - P C R 方法符合率试验7 0 5 4 讨论7 l 5 5 小结7 2 结论7 3 参
8、考文献7 4 附录9 0 致谢9 2 乙型脑炎病毒与树突状细胞的互作研究 摘要 乙型脑炎( J a p a n e s ee n c e p h a l i t i s ，J E ) ( 简称乙脑) 是由乙型脑炎病毒( J a p a n e s e e n c e p h a l i t i sv i r u s ，J E V ) 感染引起的一种危害严重的人兽共患虫媒传染病。该病是 危害我国养猪业的重大繁殖障碍性疫病之一。同时，它还对人类健康造成巨大威胁， 是人类中枢神经系统最常见的虫媒病之一。但长期以来，该病的致病和免疫机理尚 不太清楚，临床中针对该病原的快速检测方法也很缺乏。因此，开展J
9、 E V 与免疫细 胞的互作机制和快速检测方法研究，对于揭示该病毒的致病与免疫机理、新型疫苗 开发和临床快速检测具有重要科学和实践意义。本论文主要围绕J E V 树突状细胞 ( D e n d r i t i cc e l l s ，D C s ) 载体疫苗、J E V 强、弱毒株与小鼠D C s 互作、J E V 胶体金快 速检测方法等三个方面展开研究，具体内容如下： 1 J E V 树突状细胞载体疫苗研究 利用灭活的J E VP 3 株体外刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞( b m D C s ) ，制备D C 疫苗并免疫B A L B c 小鼠，并于二次免疫后3 周使用强毒攻击。结果显示：虽然D C 疫苗免疫后诱导的J E V 中和抗体低于灭活疫苗，但其诱导的I F N 吖和T N F a 水平却 显著高于灭活疫苗，而且显著提升抗原特异性C D S + T 细胞水平。攻毒保护性试验 表明：尽管D C 疫苗的保
