《内质网蛋白质折叠及其相关通路在耐药绒癌中的作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《内质网蛋白质折叠及其相关通路在耐药绒癌中的作用（141页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、博士学位论文 学校代码：1 0 0 2 3 学号：B 2 0 0 7 0 6 7 内质网蛋白质折叠 及其相关通路在耐药绒癌中的作用 所院 ： 姓名 ： 指导教师： 学科专业： 研究方向： 完成日期： 北京协和医院 韩冰 向阳教授 妇产科 妇科肿瘤 2 0 1 0 年5 月 本论文由国家自然基金( 基金编号：3 0 9 7 3 1 7 8 ) 和国 家教委博士点专项基金( 基金编号：2 0 0 8 0 0 2 3 0 0 0 1 ) 资助 完成，在此表示诚挚的谢意! T h i st h e s i sw a ss u p p o r t e db yt h eN a t u r eS c i
2、e n c eF o u n d a t i o n o fC h i n a ( N C F IN o 3 0 9 7 31 7 8 ) a n dS p e c i a l i z e dR e s e a r c hF u n d f o r t h eD o c t o r a lP r o g r a mo fH i g h e rE d u c a t i o n ( S R F D PN o 2 0 0 8 0 0 2 3 0 0 01 ) W ea r eg r a t e f u U ya p p r e c i a t e df o r t h es u p p o r t
3、 北京协和医学院博士研究生学位论文目录 目录 缩略词表l 中文摘要6 英文摘要9 前言1 2再雷1 2 实验材料1 4 共用实验方法2 0 第一部分对临床常用五种化疗药物耐药的绒癌细胞株的建立和常见耐药基因和 或标志物在各个绒癌耐药株诱导过程中的动态表达2 1 方法2 2 结果2 5 讨论4 1 J 、结5 0 第二部分内质网蛋白质折叠及其相关通路在耐药绒癌中的作用5 1 方法5 2 结果5 6 讨论8 2 d 、结9 9 全文总结1 0 0 参考文献1 0 6 图表索引1 2 2 综述1 2 6 致谢1 3 5 个人简历1 3 6 北京协和医学院博士研究生学位论文缩略词表 缩略词表 1 北京
4、协和医学院博士研究生学位论文 缩略词表 缩略词表续1 缩写词英文全称 中文全称 D M E M D M F D M S O D N A d N T P D T T d T M P d U M P E B E C L E D E M E D T A e I F 2 0 【 E P E R E R A D E R d j 3 E R P 5 7 E I 沁6 0 E R S E R S E F B S F C M F U D R F d U M P G A D D l 5 3 G A P D H G E R A D D u l b e c c o sM o d i f i c a t i o no
5、 f E a 9 1 e sm e d i u m N ，N d i m e t l l y l f o m 锄i d e D i m e t l l y ls u l f o x i d e D e o x 州b o n u c l e i ca c i d D e o s 舛b o n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t e D i t h i o t h r e i t o l D e o x y t h y m i d i n em o n o p h o s p h a t e D e o x y u r i d i n em o n o p
6、 h o s p h a t e E t l l i d i u mb r o m i d e E n h a n c e dc h e m i l u m i n e s c e n c e D M E M 培养基 N ，N 二甲基甲酰胺 二甲基亚砜 脱氧核糖核酸 脱氧核糖核苷三磷酸 二硫苏糖醇 单磷酸脱氧胸苷 单磷酸脱氧尿苷 溴乙锭 免疫印迹化学发光 E Rd e g r a d a t i o ne n h a I l c e rm 猢o s i d a s ea l p h a _ 内质网甘露糖甙酶I 样蛋白 1 i k ep r o t e i n E t l l y l e n e
7、 d i 锄i n et e t r aa c e t i ca c i d乙二胺四乙酸 E u k a r y o t i ci n i t i a t i o nf a c t o r2 c 真核细胞转录起始因子2 仅 E p p e n d o r l FE p p e n d o r f 管 E n d o p l a s m i cr e t i c u l u m内质网 E R - a s s o c i a t e dd e g r a d a t i o n 内质网相关降解 E R - a s s o c i a t e dD n a Jp r o t e i n3 内质网相关
8、D n a J 蛋白3 E n d o p l a s m i cr e t i c u l 啪r e s i d e n tp r o t e i n5 7内质网固有蛋白5 7 E n d 叩1 a S m i cr e t i c u l u mr e s i d e n tp r o t e i n6 0内质网固有蛋白6 0 E n d o p l a s m i cr e t i c u l u ms t r e s s内质网应激 E Rs t r e s sr e s p o n s ee l e m e n t 内质网应激反应元件 F e t a lb o v i n es e m
9、 m 胎牛血清 F 1 0 wc y t o m e t 拶 流式细胞术 F 1 u o r o d e o x y u r i d i n e氟尿嘧啶脱氧核苷 F l u o r o d e o x y u r i d i n em o n o p h o s p h a t e氟苷酸单磷酸盐 G r o w t ha r r e s ta 1 1 dD N A d 锄a g e - i n d u c i b l e生长抑制和D N A 损伤诱导 g e n e l 5 3 蛋白 G l y c e r a l d e h y d e3 - p h o s p h a t ed e h y
10、 d r o g e n a S e葡萄糖三磷酸脱氢酶 G l y c o p r o t e i nE R - a s s o c i a t e dp r o t e i n内质网相关糖蛋白降解 d e g r a d a t i o n 2 北京协和医学院博士研究生学位论文缩略词表 缩略词表续2 3 北京协和医学院博士研究生学位论文缩略词表 缩略词表续3 4 北京协和医学院博士研究生学位论文 缩略词表 缩略词表续4 5 北京协和医学院博士研究生学位论文中文摘要 中文摘要 研究目的： 包括绒癌( C C ) 在内的滋养细胞肿瘤( G T N ) 是人类最早可以治愈的对化疗高度敏 感的实体瘤
11、，9 0 以上的患者可以通过规范化的化疗而治愈。但是化疗耐药仍是患 者治疗失败的主要原因。迄今为止，有关C C 耐药发生的确切机制尚不明确，因此， 建立耐药C C 的体外模型对于其耐药机制的研究尤其重要。 上个世纪九十年代兴起的蛋白质组学如今正方兴未艾，它以细胞内全部蛋白质 的存在以及活动方式做为研究对象，从整体的水平研究细胞、组织以及器官的蛋白 质表达的变化。众所周知，肿瘤是多因素共同作用的结果，因此有必要利用蛋白质 组学对耐药和敏感绒癌细胞株之间蛋白表达差异进行高通量的检测以筛查出耐药 候选蛋白，从而为滋养细胞肿瘤耐药的逆转提供依据。 为此，本研究采用临床滋养细胞肿瘤五种常用化疗药物 (
12、F U D R 5 F U M T X 依S M P 1 6 ) ，使用间断和连续两种方法诱导人绒毛膜上皮癌 J e G 3 细胞，分别建立耐药细胞株。通过比较蛋白质组学的方法，寻找耐药株和敏 感株之间蛋白表达的差异，探讨绒癌的耐药机制，为指导临床化疗方案的制定，改 善G T N 患者，尤其是耐药G T N 患者的预后提供依据。 研究方法： 1 采用五种临床滋养细胞肿瘤化疗常用药物( F U D 刚5 F U M T X 依S M P 1 6 ) ，使用 间断和连续两种方法诱导人绒毛膜上皮癌J e G 3 细胞，分别建立相应的耐药细胞 株； 2 用细胞计数法检测上述各个耐药细胞株的耐药性，并比
13、较各个细胞株的细胞形 态、生长曲线、群体倍增时间和染色体倍性的差异；用化学发光法检测亲本和 耐药细胞株诱导过程中D H C G 和P 分泌水平的动态变化；并同时用荧光定量 P C R 法检测相关化疗药物作用靶基因以及常用耐药相关基因在各个耐药细胞株 诱导过程中的表达变化趋势： 3 利用差异凝胶电泳识别亲本和J e G 3 F U D R A l 耐药细胞株差异表达的蛋白质，用 M A L D I T O F M S 对差异蛋白质进行鉴定，利用生物信息学和系统生物学方法对 鉴定出来的蛋白质进行筛选，确定耐药相关候选蛋白； 4 用W e s t e mb l o t 法分别验证耐药相关候选蛋白在亲
14、本细胞株与各耐药细胞株中的 表达差异，同时检测其在各个耐药细胞株诱导过程中的动态变化趋势；R N A i 候 选蛋白质的表达，检测转染前后细胞生物学特性和耐药性的改变； 5 用细胞免疫荧光的方法，利用共聚焦显微镜检测亲本和耐药细胞以及诱导过程 中候选蛋白质表达量和细胞内定位的改变； 6 北京协和医学院博士研究生学位论文中文摘要 6 用荧光定量P C R 的方法检测候选蛋白质基因m R N A 的表达以及与候选蛋白质 作用相关网络基因m I 矾A 在亲本和耐药细胞中的表达差异。 研究结果： 1 历时1 0 1 4 月分别建立五株间断耐药细胞株J e G 3 F u D R A l 、J e G 3 F U B l 、 J e G 3 M T x A l 、J e G 3 瓜S M B l 和J e G 3 厂V P c
