代尔夫特菌mtq3拮抗相关基因tetr的克隆及功能验证

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1、关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体, 均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文,同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文 收录到中国学位论文全文数据库,并向社会公众提供信息服务。 保

2、密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名: 导师签名: 日 符号说明 A D p r i m e r :A r b i t r a r yd e g e n e r a t ep r i m e r , 随机兼并引物 A m p :A m p i c i l l i n ,氨苄青霉素 A T P :A d e n o s i n e5 - t r i p h o s p h a t a s e ,5 腺苷三磷酸 B p :B a s ep a i r , 碱基 D N A :D e o x y r i b o u n c l e i ca c i d ,脱氧核糖核苷酸 d N T P :D

3、e o x y r i b o u n c l e o t i d et r i p h o s p h a t e ,A T P 、G T P 、C T P 、T T P 混合物 E B :E t h i d i u mb r o m i d e ,溴化乙锭 E D T A :E t h y l e n e d i a m i n e t e t r a a c e t i ca c i d ,乙二胺四乙酸 I P T G :I s o p r o p y l p - D - t h i o g a l a c t o p y r a n o s i d e ,异丙基1 3D 半乳糖苷 I

4、S R :I n d u c e ds y s t e m i cr e s i s t a n c e ,诱导系统抗性 K a l l :K a n a m y c i n 卡那霉素 K b :K i l o b a s e s ( p a i r ) ,千碱基 K d a :K i l o d a l t o n ,千道尔顿 L B :L u r i a - B e r t a n i ,一种基础培养基 N R P S :N o n r i b o s o m a lp e p t i d es y n t h e t a s e s ,非核糖体肽合成酶 O R F :O p e nr e

5、 a d i n gf r a m e s ,开放阅读框 P C P :P e p t i d y lc a r r i e rp r o t e i n , 肽酰载体蛋白 P C R :P o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n , 聚合酶链式反应 P G P R :P l a n tg r o w t h - p r o m o t i n gr h i z o b a c t e f i a , 植物根际促生细菌 P p a n t :P h o s p h o p a n t e t h e i n e ,磷酸泛酰巯基乙胺 P p t a s

6、 e s :P h o s p h o p a n t e t h e i n y lt r a n s f e r a s e , 磷酸泛酰巯基乙胺转移酶 鼬f R i f a m p i c i n ,利福平 S D S :S o d i u md o d e e y ls u l f a t e ,十二烷基硫酸钠 T A I L P C R :T h e r m a lA s y m m e t r i cI n t e r l a c e dP C R , 热不对称交错P C R T B E :T r i s b o r i c a c i d E D T Ab u f f e r ,

7、 T r i s 硼酸E D T A 缓冲液 X g a l :5 - b r o m o 一4 一c h l o r o 一3 一i n d o l y - 1 3 一D g a l a c t o s e ,5 一溴一4 - 氯一3 - 吲哚叶D 半乳糖苷 l x L :M i c r o l i t e r , 微升 中文摘要“ A b s t r a c t 。1 3 1 前言5 1 1 代尔夫特菌研究进展5 1 1 1 分类学5 1 1 2 生物学特性5 1 1 3 耐药性7 1 。2 烟草青枯病。7 1 2 1 病原菌特性7 1 2 2 侵染途径。:8 1 2 3 发病原因8 1

8、2 4 病害症状8 1 3 烟草青枯病的防治9 1 3 1 抗病品种的选育9 1 3 2 农艺防治。1 0 1 3 3 化学防治1 1 1 3 4 生物防治1 1 1 4 拮抗菌生防机理1 4 1 4 1 抗生作用1 4 1 4 1 1 肽类抗生素15 1 4 1 2 其它抗生素1 6 1 4 1 3 细菌素1 7 1 4 1 4 抗菌蛋白j 18 1 4 2 重寄生作用1 9 1 4 3 空间和营养竞争2 0 1 4 4 诱导植物系统抗性2 0 1 5P G P R 的应用2 1 1 6T e t R 家族研究进展2 3 1 6 1T e t R 家族调控蛋白结构域。2 3 1 6 1 2T

9、 e t R 家族调控因子参与的调控网络2 4 1 7 转座子诱变法基因克隆策略研究进展2 6 1 7 1 细菌转座子的插入机制和随机诱变作用2 7 1 7 2 转座子标签技术2 8 1 8 本研究的立项依据、研究内容与技术路线3 1 1 8 1 立项依据3l 1 8 2 研究内容31 1 8 - 3 技术路线3 2 2 材料与方法3 3 2 1 菌株与质粒3 3 2 2 培养基与培养液3 3 2 3 实验试剂及仪器3 4 2 3 1D N A 提取试剂3 4 2 3 2C a C l 2 法制备新鲜的D H 5 a 感受态细胞试剂3 4 2 3 3P C R 试剂3 4 2 3 4 琼脂糖凝

10、胶电泳试剂。3 4 2 3 5 连接转化试剂。3 5 2 3 6 实验仪器3 5 2 4 实验方法3 5 2 4 1 烟草根际青枯病拮抗菌的筛选及鉴定3 5 2 4 2 抗生素固体培养基的制备3 6 2 4 3 基因组D N A 的提取3 6 2 4 4P C R 引物- 3 7 2 4 5 琼脂糖凝胶电泳3 7 2 4 6P C R 产物的纯化3 8 2 4 7D N A 凝胶回收3 8 2 4 8 菌落的快速裂解及质粒大小的检查3 9 2 4 9C a C l 2 法制备新鲜的D H 5 a 感受态细胞。3 9 2 4 1 0 突变株的筛选4 0 2 4 1 0 1 抗药性实验4 0 2 4 1 0 2 转座子诱变4 0 2 4 1 0 3 拮抗缺失突变株的筛选4 1 2 4 1O 4l u x AP C R 验证4 1 2 4 1 lP C R 产物与载体连接4 2 2 4

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