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1、哈尔滨医科大学博士学位论文 ANOV A G F A P C D 3 1 F 一 珊 B c l - 2 P G 1 2 P RB CDK CKA NS C Br d U P S A- NC AM Ne u N NGF I L - 6 BF GF T GF - P T NF - a CS F P C NA P C D GAP P DGF / P DGF R P T C Y C C C a s p a s e TUNEL 英文缩写 方差分析 胶质纤维酸性蛋白 血小板内皮细胞鞘附分子 第八因子相关抗原 B 细胞淋巴瘤/ 白血病2 前列环素2 磷酸化的视网膜母细胞瘤蛋白 、 c y c l i n
2、d e p e n d e n t k i n a s e C D K a c t iv a t in g k i n a s e C D K激酶 神经干细胞 5 - 漠脱氧尿喀吮核昔 唾液酸一 神经细胞薪附分子 神经元核抗原 神经生长因子 白细胞介素一 6 碱性成纤维细胞生长因子 转化生长因子(3 月 中 瘤坏死因子a 集落刺激因子 抗细胞核增殖抗原 神经元发生凋亡 生长相关蛋白 血小板衍生生长因子 线粒体的通透性改变 细胞色素 C 半肮天冬酶 末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记 哈尔 滨医 科大 学博士 学 位论 文 DAB 线粒体通透性转变 MP T孔 微管相关蛋白 一 2 二氨基
3、联苯氨 转化剂一 辣根过氧化物酶 大脑中动脉闭塞 磷酸缓冲液 苏木素伊红染色 谷氨酸 侣乙U PB雕Gll 哈尔滨医科大学博士学位论文 中 文 摘 要 人脑梗死后病灶周围及海马病理变化的机制研究 脑梗死是人类常见的脑血管疾病， 目 前研究认为脑梗死后病灶周围组织的病 理变化是一系列复杂的级联反应， 其中包括细胞骨架的降解、 神经元凋亡的发生、 星形胶质细胞的增生及微血管的反应等。 近几年来， 有关脑梗死的上述病理变化 在实验动物身上的研究己得到世界公认，但这些病理变化在人体上研究得很少， 且对这些病变过程中的一些环节进行干预可改变脑梗死的进程和预后， 因此我们 利用人脑梗死后的尸检标本， 对脑
4、梗死周围组织病理变化进行研究， 以期指导临 床治疗，改善脑梗死的预后。 第一部分实验利用人脑梗死后尸检脑标本 1 0 例，采用常规H E染色和免疫 组化染色方法，研究人脑梗死后病灶周围组织的经时病理变化。以B c l - 2 标记神 经细胞、以G F A P 标记星形胶质细胞、以C D 3 1 , F - V IR 标记微血管。结果发现脑 梗死后以 梗死灶为中心， 按照组织损伤程度由内 到外分为4 个区 ( 0 -3 区) ， 其 中2 区为半暗带区， 4 0 %以上的神经元和星形胶质细胞形态基本正常， 随缺血时 间延长，星形胶质细胞增生明显，形态正常神经元的数量减少;3 区神经元形态 及数量
5、正常， 星形胶质细胞反应性增生。 G F A P 在0 区和1 区表达很少，2 区其 随缺血时间延长阳性细胞数增多， 3 区早期即有星形胶质细胞的簇样增生。 B c l - 2 在0 区无表达，1 区表达较少，2 区于缺血后8h 开始出现，2 3 h 达高峰，之后 开始下降。C D 3 1 和 F - 姗在0 区无表达， 1 区可见少量表达，2 区和3 区随缺血 时间 延长表达持续升高。 结论: 人脑梗死后在半暗带区2 3 h 前G F A P 和B c l - 2 表 达呈正相关; 2 3 h 后呈负相关。 2 区是临床需要积极抢救的区域，并可应用干预 因素上调B c l - 2 表达缩小梗
6、死面积; 脑梗死后涉及星形胶质细胞和微血管的反应 性增生， 在缺血后期G F A P , C D 3 1 F - 硼广泛表达， 两者在组织损伤修复重建过程 中起重要作用。 第二部分实验另用人脑梗死后尸检脑标本4 6 例， 采用H E 染色和免疫组化染 色法研究脑梗死后星形胶质细胞增生、 活化的 机制。 采用G F A P 和c y c l i n D l 两个 指标， 观察其在脑梗死后周围组织的动态变化。结果:脑梗死后2 h 病灶周围 组 织G F A P 表达开始增加， 3 - 5 d 表达明 显增强， 7 - 1 5 d 表达增加到高峰，以 后有所 回落，1 9 d时仍高于正常水平; c
7、y c l i n D l 阳性反应在脑梗死 2 h开始增强，3 - 5 d 数量增多， 7 - 1 5 d 达高峰， 随后表达呈下降 趋势，1 9 d 时仍比 对照组高， 二者消 长规律一致。 结论: 星形胶质细胞在脑梗死后1 5 d 内异常活化并与神经元的存活 密 切 相关; 脑梗死使星形 胶质细胞出 现细胞周期的 改变; c y c l i n D 1 参与了 脑梗死 后星形胶质细胞的增生与活化。 第三部分实验选取4 6 例因脑梗死而死亡的尸检脑标本，应用 H E染色来观 察 海马C A I 区 神经元形态变 化， 应用C a s p as e - 3 免 疫组化染色， C as p a
8、s e - 3 m R N A 原位杂交来测定人脑缺血后C a s p a s e - 3 的 表达情况; 用末端脱氧核糖核酸转移酶 介导的 缺口 末端标记( T U N E L ) 法标记D N A断端从而确定凋亡神经元; 用微管相 关 蛋0 - 2 ( M A P - 2 ) 的 脱失 程度来反映 神经 元的受 损 程度。 结果: 海马C A I 区， 缺 血8h 可检测C as p a s e - 3 免疫组化染色的阳 性细胞 ( 8 .0 5 个/ 高倍视野) ， 2 4 h 达 高 峰 ( 2 4 .8 5 个 / 高 倍视野) ;C as p as e - 3 m R N A原 位
9、杂交阳 性表达始于4 h ( 6 .7 5 个/ 高倍视野) ，1 6 h 达高峰 ( 1 7 .6 0 个/ 高倍视野) ;二者均在7 2 h后呈明显下降 趋势。 缺血2 4 h ，可检测到T U N E L阳性细胞， 持续至7 2 h e MA P - 2 免疫活性下 降早在4h即可检测到，之后持续下降，至7 2 h 几无阳性表达细胞。7 2 h 前， C a s p as e - 3 m R N A与T U N E L 呈正相关， 相关系数为0 . 7 2 1 ( P 0 .0 5 ) ; C as p a s e - 3 m R N A与 MA P - 2 呈负相关， 相关系数为0 .
10、8 5 7 ( P 0 .0 5 ) 。结论: 4 - 1 6 h ， 受损 神经元形态基本正常; 2 4 4 8 h 细胞凋亡特征明显; 7 2 h 后， 几乎所有神经元形 态呈现严重病理变化。提示人脑局灶性缺血海马神经元发生一系列形态学变化， 其演变规律与凋亡促进因子C as p as e - 3 有密切相关性。 关键词: 人，脑梗死，梗死周围组织， 海马， 病理研究 哈 尔 滨 医 科 大 学 博 士 学 位 论 文 T h e s t u d y o n t h e s u r r o u n d i n g a r e a s o f i n f r a c t e d t i s
11、s u e a n d h i p p o c a mp u s a f t e r h u m a n c e r e b r a l i s c h e m i a C e r e b r a l i n f a r c t i o n i s o n e o f t h e m o s t p o p u l a r d i s e a s e s o f h u m a n b r a i n . I t h a s b e e n k n o w n t h a t b r a in i n j u ry fr o m c e r e b r a l i s c h e m i a
12、i s c a u s e d b y a c o m p le x a n d in c o m p l e t e l y u n d e r s t o o d c a s c a d e o f e v e n t s t h a t i n c l u d e s c o l l a p s e o f c e l l u l a r s k e l e t o n , n e u r o n a p o p t o s i s , as t r o c y t e p r o l i f e r a t i o n a n d m i c r o v e s s l e s r e
13、 a c t i o n . I n t h e r e c e n t y e a r s ma n y e x p e r i m e n t s w e r e c o n d u c t e d , h o w e v e r , a l l t h e r e s u l t s w e r e fr o m a n i m a l m o d e l s i n r e s e a r c h l a b o r a t o r i e s ; t h i s i m p l i e s t h a t l i tt l e h a s b e e n k n o w n a b
14、o u t t h e e x a c t c h a n g e s o f b r a i n t i s s u e , i n j u ry i n d u c e d b y i s c h e m i a i n h u m a n . I n o r d e r t o c o n d u c t t h e r a p e u t i c t r e a t m e n t t a r g e t e d i n c l i n i c a l s e tt i n g , w e s h o u l d f ir s t l y u n d e r s t a n d t h
15、 e e v o l u t i o n o f d a m a g e d b r a i n t i s s u e . W e , t h e r e f o r e , i n v e s t i g a t e d t h e s p a t i a l a n d t e m p o r a l p r o f i l e s o f i s c h e m i c t i s s u e b y m e t h o d s i l l u s t r a t e d as f o l l o ws . W e u s e d g l i a l fi b r i l l a r
16、y a c i d i c p r o t e i n ( G F A P ) , a n t i - a p o p t o t i c p r o t e i n ( B c l - 2 ) , C D 3 1 , f a c t o r - V IQ as m a r k e r s t o d e f i n e c h a n g e s o f c e l l s a n d m i c r o v e s s e l s i n p o s t - m o r t e m s p e c i m e n s fr o m t e n c a s e s o f a u t o p s y b y H E a n d i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y . T h e re s u l t s w e r e E a c h s e c t i o n o f t h e i n f a r c t e d b r a i n s w a s d i v i d e d i n t o f o u r a r e as
