《人血红素加氧酶2中的碱性氨基酸对其接受cpr提供电子能力影响的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《人血红素加氧酶2中的碱性氨基酸对其接受cpr提供电子能力影响的研究（101页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、a而 C O作用于血管平滑肌起舒张血管作用 ， 在脑 内 起神经递质的作用;F e e 是转铁蛋白、铁蛋白和 N O合酶的调节 剂 ，细菌 中的 H O还 可通过加速宿主血红素降解释放 F e ，从而 加速 自身繁殖 。 因此近年来关于 H O系统的研究一直是国际研 究 的 热 点 。 在本研究中，为鉴定人血红素加氧酶- 2 ( H H O - 2 )结构与 功 能的关系 ，我们探 讨 了 HHO - 2 中的碱性 氨 基酸残基对 接 受 C P R提供 电子 的能力 的影响，以及 HH O- 2的 N端 和 C端 部分 氨基酸残基对其催化 功 能的影 响 。我们制备 了 s种血 红素加氧 酶
2、- 2 的突变型，其 中部分保守的碱性氨基酸 ，精 氨酸 ( R)和 赖氨酸 ( K)位 点被置换成 中性氨基酸 丙氨酸或甘氨酸 )或 酸性氨基酸 ( 谷氨酸 ) 。同时，制备两个 N端和 C端缺失的突 变型。研究发现 ， HH O - 2的 N端和 C端的部分氨基酸对其催化 活性没有影响， 而该酶的部分碱性氨基酸在接受 C P R提供 的电 子的电子传递过程 中起着重要作用 。 关键词:血红素加 氧酶- 2 ,碱性氨基酸 ，电子传递 ，N 端 ，C 端 ，催化活性 哈 hix 医 科 大 学 俘 士 学 位 论 文 Abs t r ac t H o me o x y g e n a s e
3、( HO ) i s a k e y e n z y me t h a t c a t a l y z e s t h e c o n v e r s i o n o f h e m e t o b i l i v e r d i n , C O , a n d F e 2 . A t l e a s t 5 mo l e c u l e s o f e l e c t r o n s a r e i n v o l v e d i n c o mp l e t e l y d e g r a d a t i o n o f o n e mo l e c u l e o f h e me .
4、I n t h e r e a c t i o n s i n v i v o , t h e e l e c t r o n s a r e d o n a t e d b y NADP H一 c y t o c h r o me P 一 4 5 0 r e d u c t a s e . F o l l o wi n g t h a t , b i l i v e r d i n i s r e d a c t e d t o b i l i r u b i n b y b i l i v e r d i n r e d u c t a s e . H O p r o d u c t s
5、h a v e mu l t i p l e p h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n s , b i l i v e r d i n / b i l i r u b i n a r e b o t h e f f e c t i v e a n t i o x i d a n t s i n t h e b o d i e s ; CO c a n a c t a s n e u r o t r a n s mi t t e r i n b r a i n a n d h a ve r o l e s i n r e l a x i n g s m
6、o o t h m u s c l e o f b l o o d v e s s e l ; F e 2 , i s t h e m o d u l a t o r o f t r a n s f e r r i n , f e r r i t i n , a n d NO s y t h a s e , t h e HO i n b a c t e r i a c a n a l s o a c c e l e r a t e t h e p r o p a g a t i o n o f t h e h o s t b y p r o mo t i n g r e l e a s e o
7、 f F e 2 + f r o m h e m e , T h u s , H O s y s t e m h a s l o n g b e e n t h e r e s e a r c h f o c u s i n t h e wo r l d r e c e n t l y . I n t h i s r e s e a r c h , t o i d e n t i f y t h e r e l a t i o n o f s t u c t u r e a n d f u n c t i o n o f h u ma n h o me o x y g e n a s e 一
8、2 ( H H O - 2 ) , w e t r y t o f i n d t h e E f f e c t o n A b i l i t y o f B a s i c Ami n o Ac i d R e s i d u e s o f H HO 一 2 Ac c e p t i n g E l e c t r o n s F r o m C P R, a n d t h e E f f e c t o n C a t a l y s i s F u n c t i o n o f N一 t e r mi n a l a n d C 一 t e r mi n a l a mi n
9、o a c i d s e q u e n c e s o f H H O一 2 . We h a v e p r e p a r e d 8 mu t a n t s i n w h i c h p a r t c o n s e r v a t i v e b a s i c a mi n o a c i d r e s i d u e s A r g o r L y s wa s c h a n g e d t o n e u t r a l a mi n o a c i d ( A l a o r G l y ) o r a c i d i t y a mi n o a c i d (
10、 G l u ) . Me a n w h i l e , We p r e p a r e d 2 d e l e t i o n m u t a n t s o f H H O 一 2 i n w h i c h p a r t i a l N- t e r mi n a l a n d C一 t e r mi n a l a mi n o a c i d s a r e d e l e t e d . We f o u n d i n o u r r e s e a r c h , p a r t i a l N- t e r mi n a l a n d C 一 t e r mi n
11、a l a mi n o a c i d s e q u e n c e s d o n o t c o n t r i b u t e t o t h e c a t a l y s i s f u n c t i o n i n H H O - 2 , a n d p a r t b a s i c a mi n o r e s i d u e s o f H H O 一 2 p a r t i c i p a t e i n e l e c t r o n t r a n s f e r p r o c e s s b e t we e n C P R a n d h u ma n h
12、e me o x y g e n a s e 一 2 . - 2- 哈 尔 澳 医手 斗 大 学 博 -J - -I t - 位 论 文 KE Y WOR DS :He me o x y g e n a s e 一 2 , B a s i camin o a c i d , E l e c t r o n t r a n s f e r , N 一 t e r mi n a l , C 一 t e r mi n a l ，c a t a l y s i s a c t i v i t y . 3 哈 尔 澳 医才 斗 大 学 博 士 学 t 之 t 仑 文 第一部分 血红素加氧酶- 2中的碱性
13、氨基酸对其接受 C P R提供电子能力的影响 实验材料 一 、质粒及 菌株 : l , p M W C 2 8 H H O - 2质粒( 日本山形大学医学部生化学第一 讲座吉田 匡教授馈赠) 2 , p M W C P R质粒 ( 本实验室构建) 3 、质粒高表达菌株:. . c o l i : J M1 0 9 ( 本实验室保存) 4 =,蛋白高表达菌株:E . c o l i : B L - 2 城本实验室保存) 二、主要试剂 1 、X L I 一 B l u e s u p e r c o m p e t e n t c e l l s ( S t r a t a g e n e ) 2
14、 , D p n I 限制性内切酶 ( S t r a t a g e n e ) 3 、P f u T u r b o D N A聚合酶 ( S t r a t a g e n e ) 4 、d N T P mi x ( S t r a t a g e n e ) 5 ,聚 丙 烯 酞 胺 凝 胶 电 泳 用 的 蛋 白 质 分 子 量 标 准 品 ( P h a r ma c i a ) 6 , A D N A / H i n d I I I琼脂糖凝胶 电泳用 D N A 分子量标准 品 (TOYOBO) 7 , d e s f e r a l Vi a l s ( No v a r t
15、i s P h a r ma K. K ) 8 、B S A ( S I G MA) 9 、NADP H( Or i e n t a l E a s t ) 1 0 、 抗坏 血酸 ( S I GMA) I 1 、 G一 1 5 0( P h a r ma c i a ) 1 2、 1 3、 1 4、 G e l E x t r a c t i o n Ki t ( Q i a g e n ) X一 g a l( P r o me g a ) I P T G ( P r o m e g a ) 主要仪 器 P E A p p l i e d B i o s y s t e ms( P C R
16、S y s t e m 9 7 0 0 ，新加坡) _2 Z. 哈 尔 澳 医 矛 牛 大 学 博 士 学 位 论 文 紫外一 可见分光光度计 ( P E R K E N- E L ME R L a mb d a 1 7西 德 产 ) 上海 7 2 1型分光光度计 电热恒温 水浴 箱 L K B层析系统 T N - I O O B 型托盘扭力天平 上海 医用分 析仪器厂 T GI - 1 6型 ，变速 台式离心机 日本 H I T A C H I 2 0 P R - 5 2 0行低温 高速离心机 超 声破碎 仪 稳压稳流 电泳 仪 ( pYY - I I I 8 B 北京六一仪器厂 ) 、 伟、41以加078 9. I 0、 - 2 3. 哈 尔 At 医科 口 吮 学 博 碑 七学 位 i t - 1 : 第二部分血红素加氧酶- 2的 N端和 C端部分氨基酸对 其催化功能的影响 实验 材 料 一、质粒及菌株: I , p MW L 2 8 H H O - 2质粒( 日本山形大学医学部生化学第一 讲座吉田 匡教授馈赠) 2
