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1、细胞分析技术概述 (Cell Analysis Technology),姓名：XXX 学号：XXX,细胞分析意义 细胞分析流程,汇报内容,细胞是生命活动的基本单位,是独立生存的生命实体,是展现活的生命状态全部特点的最小单位,是组成生物体的结构和功能的基本单元，也是无数鉴定和了解生命的基本生化生理过程研究的起点。 分析检测细胞的各种变化,从细胞中提取生命的信息,搞清单细胞中各种化学物质的定性、定位、定形、定量以及结构的变化等都具有十分重要的学术意义和应用价值。,细胞分析意义,细胞分析意义 细胞分析流程,汇报内容,细胞分析流程( Cell Analysis Workflow),1 细胞培养( Ce
2、ll Culture)： (1)细胞系培养( Cell Line Culture) (2)原代细胞培养( Primary Cell Culture) (3)干细胞培养(Stem Cell Culture) (4)诱导多能干细胞培养( iPSC Culture) 2 细胞分离 (Cell Isolation) 3 细胞计数 (Cell Counting) 4 细胞转染 (Cell Transfection) 5 细胞成像 (Cellular Imaging) 6 流式细胞分析技术 (Flow Cytometry),细胞分析解决方案 ( Cell Analysis Workflow),1 细胞培养
3、细胞的原代培养,将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。,2 细胞分离,细胞分离：将组织材料分散制成细胞悬液后,从中获取目的细胞的过程。 细胞分离技术包括：离心技术、流式细胞术和细胞电泳。 离心：是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段； 流式细胞术：是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术； 细胞电泳：是指在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动。,2 细胞分离离心技术,3 细胞计数细胞计
4、数板,实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4104 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）1.0mm（宽）0.1mm（高）=0.1mm3
5、 而 1ml=1000mm3,细胞计数板,3 细胞计数细胞自动计数仪,4 细胞转染,定义： 细胞转染技术是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。 方法： 1.脂质体转染法 阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。 2.电穿孔转染法
6、 电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。 3.病毒感染 对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染，此法可以快速100%感染，检测成功率高。,4 细胞转染脂质体转染法,活体动物体内成像技术是指应用影像学方法，对活体状态下的生物过程进行组织、细胞和分子水平的定性和定量研究的技术。 活体动物体内成像技术主要分为可见光成像 (optical imaging)、核素成像（radio-nuclear imaging）、核磁共振（magnetic resonance imaging ，MRI）成像和超声（ultrasound）成像
7、、计算机断层摄影（computed tomography ，CT）成像五大类，活体动物体内功能成像技术可用于观察和追踪靶细胞、基因的表达，同时检测多种分子事件，优化药物和基因治疗方案，从分子和细胞水平对药物疗效进行观察，从整体动物水平上评估疾病发展过程，对同一个动物进行时间、环境、发展和治疗影响跟踪。,5 细胞成像,5 细胞成像,活细胞成像技术包括： 宽场荧光成像； 共聚焦成像； 多光子成像； 全内反射显微成像系统； 荧光能量共振转移成像； 荧光寿命周期成像； 透射光显微镜； 其他成像技术等。,Nature：活体成像捕捉癌细胞的一举一动,Nature 杂志报道：Mikala Egeblad 小
8、组完成了活鼠体内肿瘤细胞的活动影片，当展示影片时，人们可以看到肿瘤病变如何演化，这是一种认知上的改变。 活体成像技术可以将这样的互作直接展现在人们眼前，帮助人们在活体动物中追踪癌症的发展，深入解析一些特别危险的细胞。,6 流式细胞分析技术,定义： 流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。 特点： 测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞； 可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、 化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义； 是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计 算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领 域的知识和成果； 既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。,组成： （1）流动室和液流系统； （2）激光源和光学系统； （3）光电管和检测系统； （4）计算机和分析系统。,流式细胞仪,流式细胞仪,PPT模板下载：,Thank You！,
