《中药苦参指纹图谱和苦参生物碱在动物体内药代动力学及代谢的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《中药苦参指纹图谱和苦参生物碱在动物体内药代动力学及代谢的研究（127页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国药科大学博 r 学位论文 中药苦参指纹图谱和苦参生物碱在动物体内 药代动力学及代谢的研究 研究生:马仁玲指导教师;9z登魁教授盛龙生研究员 摘 要 本沦文分三个部分; 第一部分 L C / MS 在中药苦参指纹图谱研究中的应用以 及苦参注射液指纹图谱的建立;第二部分 天然药物成分分析2 D - L C / MS 技术平 台的初步建立;第三部分 苦参生物碱成分药代动力学及代谢的研究。 一、在第一部分中，我们应用H P L C / MS以及H P L C技术对中药苦参指纹图谱的 建立与含量测定进行了 研究 苦参 ( S o p h o r a fl a v e s c e n s A i t
2、. ) 为豆科槐属植物苦 参的干燥根，从苦参中分离鉴定的化学成分主要有生物碱和黄酮两大类化合物， 其有效成分为生物碱类化合物。 近年来国内外大量研究表明， 苦参生物碱类化合 物具有 一 多方面的药理活性和临床功能。 以往对于中药苦参的质量控制基本上是测 定其中一、 两种生物碱的含量， 为了更全面地反映中药苦参的内 在质量， 建立在 中药成分系统研究基础上的指纹图谱是一种有效的手段。 将L C , / MS 技术应用于中药指纹图谱的 研究中， 是对常规色谱强有力的支持， 通过对各流出成分的质谱检测， 可增加指纹图谱的“ 可知性” 。 L C / MS 技术对于 中药指纹图谱研究中药材提取方法的研
3、究， 实验条件的选择与优化， 中药成分的 归属等均起着重要的作用。本论文对苦参指纹图谱建立中的分析方法进行了研 究包括色谱柱、流动相、波长等的选择。 确立了在碱性流动相条件下，采用 E x t e n d - C l : 柱进行花参生物碱成分液相分离的色谱条件。运用H P L C / MS 技术对 苦参药材的提取万法进行了研究，为中药苦参指纹图谱的建立提供了试验依据。 本论文利用H P L C 技术对苦参注射液用苦参药材、中间体以 及苦参注射液的 指纹图谱进行了研究。比较了三者之间的相关性，利用L C / M S 技术对 一 苦参药材、 中间体以及苦参注射液指纹图谱中的主要色谱峰进行了初步归属
4、。 利用夹角余弦 法评价了各批样品指纹图谱间的相似程度试验结果表明，以H P L C 法建立的苦 参药材、 中问体以及注射液的指纹图谱较全面地反映了苦参药材及其制剂的内在 质量，方法稳定、可靠，可作为苦参药材及其制剂质量控制的依据之一。 中国药科大学博士学位论文 在指纹图谱研究的基础上， 本论文还对苦参注射液中的主要生物碱成分氧化 苦参碱的含量进行了测定，此也I Il 以作为苦参注射液质量控制的方法之一 二、在第二部分中，对建立二维液相色谱/ 质谱法分析天然药物的技术平台进行 了初步的研究。以苦参生物碱为例， 采用强酸性阳离子交换柱作预分离柱， 柱后 流动相修饰， 使生物碱在富集柱上浓集， 然
5、后切换至分析柱系统，以反相柱， 碱 性流动相分离生物碱， 用光二极管阵列检测器和质谱检测。 结果从苦参生物碱中 检出了氧化苦参碱等生物碱; 从猪脑中提取的神经节普脂， 以氨基柱作预分离柱， 反相色谱系统进行分离分析， 结果从神经节普脂中检测出了单唾液酸神经节昔脂 等5 个成分。 试验结果表明，已建立的分离分析系统高效、 快速、自 动化，可用 于天然药物复杂体系的分离分析。 三、 在第三部分中， 建立了苦参总生物碱中主要成分 ( 氧化苦参碱、 氧化槐果碱、 苦参碱和槐果碱) 在B e a g l e 犬血浆样品中H P L C / MS 测定法。 B e a g l e 犬血 一浆中 加 入内标
6、非那雄胺，以液一 液萃取法提取后， 采用H P L C / E S I / MS 联用技术，采用选 择性离子检测 ( S I M )( 氧化苦参 碱S i m的离子是 M + H + , m / z 2 6 5 . 1 ; 氧化槐果 碱S i m的离 子是 M + H , m / z 2 6 3 . 1 ; 苦参 碱S i m的 离子是 M + H 十 ， m / z 2 4 9 .2 ; 槐果碱S i m的离子是 M 十 H + , m / z 2 4 7 . 3 ;内 标非那雄胺S i m的离子是 M + H , i n / z 3 7 3 .3 ) 同时测定B e a g l e 犬血浆
7、中 苦参总 碱中 各主要成分的 浓度。 优化的 色谱 条 件: L i c h r o s p h e r C 1 8 柱为 色 谱柱，甲 醇- O .O 1 m o 1 -L - 乙 酸铰水溶 液( 7 5 : 2 5 ) 为 流动相，内源性物质不干扰样品的测定。氧化苦参碱和苦参碱浓度 25 0 0 0 n g m L 一 1 、 槐果 碱 浓 度1 1 0 0 0 n g m L - 线 性 关 系良 好( r = 0 .9 9 9 0. 0 .9 9 7 5 , 0 .9 9 9 7 ) . 提 取回 收 率 均 高 于9 0 %定 量 限 氧 化 苦 参 碱 为2 .0 n g ,m
8、L “1 、 苦 参 碱 为。 5 n g -m L “ , 槐果碱为1 . 0 n , -m L L 。 日 内 和日 间 精密 度的R S D 均小于5 % 。 该 测定方 法具有灵 敏、专 一 、快速的优点，符合生物样品分析要求。 选用6 只B e a g l e 犬灌胃( i g ) 和静注 ( i v ) 苦参总碱， 灌胃 给药剂量为7 0 m g K g 1 , 静 注 给 药 剂 量为1 4 m g K g - I ， 交 叉 给 药。 从苦 参总 碱B e a g l e 犬 灌胃 的 血药浓度一 时间曲线可以看出，氧化苦参碱、氧化槐果碱均为一单峰，其药时曲 线经模拟拟合符合二
9、房室一级吸收模型，其吸收相、分布相、消除相半衰期、 T 、分别为氧化苦参碱:T 1 ,2 K a O .7 8 8 4 士 0 . 1 0 5 0 h , T I /2 a 1 . 2 0 9 士 0 . 1 5 8 h , T 1 ,2 A 2 . 3 1 6 士 0 . 1 1 2 h , T, a x 1 . 4 9 8 1 0 . 1 4 1 h :氧化槐果碱:T 1 i 2 K a O . 8 0 6 6 土 0 2 4 8 3 h , T I ,_ a 中国药科大学博士学位论文 1 .5 2 0 1 0 .2 4 9 h , T ,2 0 2 . 6 1 0 士 0 . 1 7 1
10、 h , T _ , 1 .6 6 4 1 0 .3 0 9 h ， 而苦参碱和槐果碱的药时 曲线则均为一双峰， 无法用房室模型拟合， 这是因为灌胃给药时氧化苦参碱和氧 化槐果碱均有部分在胃肠道转化成了苦参碱和槐果碱。 氧化苦参碱、 氧化槐果碱、 苦参碱和槐果碱按统训矩法计算的A U C分别为2 2 6 2 7 . 7 , 7 2 2 0 . 9 , 6 5 7 0 . 9 , 5 7 0 . 7 n g m L - h o 从苦参总碱B e a g l e 犬静注的 血药浓度一 时间曲 线可以 看出， 氧化苦参碱、 氧 化槐果碱、 苦参碱和槐果碱均为一单峰， 其药时曲线经模拟拟合符合 一 房
11、室一级 吸收模型。 其消除相半衰期为 氧化苦参碱: T 2 0 1 .4 5 5 1 0 .0 9 1 h ; 氧化槐果碱: T I /2 P 1 .7 6 4 士 0 . 0 4 0 h ;苦参碱:T , : P 1 .9 7 8 士 0 . 0 9 7 h ;槐果碱: T2 P 2 .3 5 5 士 0 .0 9 4 h . 氧化苦参碱、 氧化槐果碱、 苦参碱和槐果碱的A U C分别为1 6 3 0 6 .2 , 3 6 8 8 .0 , 8 5 0 . 1 , 9 5 .4 n g “ m 1 , “ h o 绝 对 一生 物 利 用 度氧 化 苦参 碱、 氧 化槐 果 碱、 氧 化 苦
12、 参 碱 + 苦 参 碱、 氧化槐果碱+ 槐果碱、 苦参碱和槐果碱分别为2 8 .2 0 %1 3 . 6 2 %, 3 9 . 2 1 % 士 3 . 0 3 %, 3 4 .4 8 %士 5 . 3 0 %, 4 1 .2 7 %士 3 . 0 7 %, 1 6 1 . 3 %士 5 9 . 6 3 %, 1 2 2 . 7 % 士 4 2 . 7 2 %。苦参碱和槐 果碱的绝对生物利用度均大于 1 0 0 %，进一步说明灌胃给药时氧化苦参碱和氧化 槐果碱均有部分在胃肠道转化成了苦参碱和槐果碱。 本论文还建立了B e a g l e 犬血浆中槐果碱单体的H P L C / E S I /
13、MS 的测定方法。 槐果 碱浓 度1 - - 5 0 0 0 n g m L - L 线 性 关系良 好 ( r = 0 .9 9 9 0 ) ， 提取回 收率高 于9 0 % , 定量限 达到1 n g “ m L _ , ， 日 内 和日 间 精密 度的R S D均小于6 % ， 符合生物样品 分 析要求 研究了 槐果碱单体在B e a g l e 犬体内的药代动力学。 选用6 只B e a g l e 犬 灌胃 槐 果 碱3 0 m g “ k g I 和 静 注 槐 果 碱6 m g “ k g 1 ， 其 药 一 时 曲 线 均 呈 一 级 吸 收 的 一室模型。 B e a g l
14、 e 犬i g 槐果碱其吸收相、分布相、 消除 相半 衰期、 T m a x 分别为: T 1 1 2 K a 0 . 0 9 8 5 士 0 . 0 3 8 8 h ，T I / 2 a 0 . 7 5 0 士 0 . 2 3 3 h ，T , : p为 2 . 7 4 7 士 0 . 1 7 0 h ，T m a 、为 0 .2 8 6 士 0 . 1 1 3 ( h ) , A U C 为3 1 5 5 .2 士 7 2 1 . 1 n g m L - h ; B e a g le 犬iv 槐果 碱的 药 代 其消 除 相半 衰期 为: T U 2 日 2 .2 7 9 1 0 .0 9
15、 9 h , A U C 为1 3 9 0 .0 士 2 4 5 .0 n g “L _ 1 -h o B e a g l e 犬i g 槐果碱的绝对生物利用度为4 5 .2 8 % 1 5 .4 3 %a 本论文对S D大鼠i g 槐果碱后尿液、 胆汁、 粪便中以 及B e a g l e 犬i g 槐果碱 后血浆中 的 代谢产物进行了 初步 研究。 S D大鼠i g 槐果 碱后收 集尿液、 胆汁与 粪 便， B e a g l e 犬i g 槐果碱后前肢隐 静脉取血， 用H P I , C / M S 联用技术对其代谢产物 进行研究。 从S D犬鼠尿液中初步鉴定出2 个羚基化的工 相代谢产
16、物和2 个1 1 相 中国药科 人学博士学位论文 代谢产物，即轻基化代谢产物和葡萄糖醛酸以及硫酸的结合物; 从S D大鼠 胆汁 中初步鉴定出1 个轻基化的工 相代谢产物， 未检测出I I 相代谢产物;从S D大鼠 粪便中未鉴定出 代谢产物;从B e a g l e 犬血浆样品中 初步鉴定出2 个径基化的I 相代谢产物，并且在进行槐果碱单体药代动力学研究的同时，选择性离子检测 ( S I M ) 了2 个I 相代谢产物，初步得出了 其药 代动力学的变化趋势。 论文关键词: 苦参 液酸神经节普脂 指纹图谱液质联用三维液相色谱/ 质谱 天然药物 单唾 苦参生物碱药代动力学代谢 中国药科大学博士学位论文 S t u d y o n t h e F i n g e r p r i n t s o f S o p h o r a f l a v e s c e n s A i t . a n d t h e P h a r ma c o k i n e t i c s a n d Me t a b o l i t e
