糖化血红蛋白的标准化

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1、目录,HbA1c的常规测定 4,1978年-第一台商品化仪器问世 1988年-美国糖尿病协会（ADA）建议： HbA1c 常规检测项目 目前检测方法,原理 不同方法测定糖化血红蛋白不同的组分 HbA1c 、HbA1（A1a + A1b + A1c）或总糖化血红蛋白 目前皆以HbA1c或等同于HbA1c来报告结果,HbA1c测定方法,从室间质评回报统计的在不同时间使用不同的GHB测定方法的实验室比例,目录,标准化,目的:实现检验结果的可比性是保证检验质量手段 意义（益处） 可以建立起普遍接受（可用）的参考区间 可以合并分析、比较不同医学中心的研究资料,促进医学研究和研究成果的转化 能够有效地应用

2、询证医学和检验医学实践指南,HbA1c标准化,九十年代中晚期，美国糖尿病控制与并发症研究(DCCT)和英国大规模的前瞻性糖尿病研究(UKPDS)的研究结果显示：强化的血糖控制能显著降低糖尿病并发症的危险和进展，强调了HbA1c在糖尿病患者中血糖控制监测的作用。 从那时起，大多数临床糖尿病组织都将 HbA1c作为糖尿病治疗目标，糖化血红蛋白检测在世界范围内被广泛应用.,1993 CAP SURVEY(mean 2SD) 10,50%实验室报告 HbA1c 21%实验室报告HbA1 29%实验室报告GHB 多数实验室结果与靶值偏倚很大，不具有可比性,NGSP （National Glycohemo

3、globin Standardisation Program：美国国家糖化血红蛋白标准化计划） 11,美国临床化学协会（AACC）在1993年成立分委会进行GHB测定的标准化工作，使不同实验室（方法）的结果可溯源至DCCT的参考结果。标准化工作由美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）指导委员会于1996年完成。 目的：标准化糖化血红蛋白检测，使临床实验室的测定结果与DCCT具有可比性 该体系在校准和规范商 业化HbA1c检测领域发挥了极其重要的作用。,NGSP对厂家方法的认证 12,NGSP要求：生产厂家有责任确保其生产的试剂、校准品、质控品、（色谱柱）所测结果与认证结果保持一致 认证标准

4、：逐步提高 认证有效期：1年 http:/www.ngsp.org/docs/methods.pdf,NGSP对实验室的认证,由NGSP的二级参考实验室来对实验室进行认证工作 得到认证的实验室所测结果是可靠的 认证标准：逐步提高 认证有效期：1年 http:/www.ngsp.org/docs/labs.pdf 我国目前有近20家实验室得到认证,CAP SURVEY (mean 2SD) 14,2003年，90%实验室以HbA1c报告结果，室间CV 5%， 测定值与靶值的偏倚 0.8%HbA1c,IFCC国际标准化 15,1995年IFCC成立HbA1c标准化工作组，旨在建立具有高计量学水准的

5、参考系统，用于HbA1c检测的标准化和校准， 实现HbA1c测定的全球可比性 明确定义HbA1c 葡萄糖与血红蛋白链N末端缬氨酸残基稳定结合的化合物. 建立一个特异测定HbA1c的参考方法 高效液相色谱串联质谱或高效液相色谱串联毛 细管电泳 制备纯化的HbA1c和 HbA0标准物质 建立国际参考实验室网络 完成了与指定比对方法的比较工作,参考方法原理,HbA0六肽,HbA1c六肽,谷氨酸内切酶,参考方法流程 17,溶血液制备,酶解,HPLC串联毛细管电泳,HPLC串联质谱,IFCC结果与指定比对方法结果之间的关系,HbA1c-NGSP = 0.915 HbA1c-IFCC + 2.15 (r2

6、= 0.998),Clin Chem. 2004, 50: 166-174,回归方程能够将IFCC的结果与DCCT所得出的有着重要临床意义的结果联系起来。,IFCC 结果与比对方法结果的关系 19,小结,临床试验确立了HbA1c和糖尿病并发症之间的相关性，将这些试验结果统一后，NGSP非常成功地降低由于不同实验方法和不同实验室所造成HbA1c的差异。IFCC的参考方法有利于将剂量溯源升级到更高等级的参考系统。 已建立起这两种单位相互转换的等式。报告何种单位由各国自行决定。,小结,HbA1c是糖尿病血糖控制的金标准，是国际专家委员会、WHO和许多国家的糖尿病诊断标准，其测定结果应该标准化 HbA

7、1c的测定方法有多种，测定原理、组分各不相同，由于IFCC及NGSP的标准化工作，目前都以HbA1c或等同于HbA1c来报告结果 国际上存在不同的标准化组织，不同组织的结果数值是不同的,目录,HbA1c标准化目标,精密度：室间变异系数（CV）5% 只有控制室内（总）CV3%，才可能实现室间CV5% 准确度：国际糖尿病专家委员会、ADA推荐：0.5% HbA1c 准确度建立在精密度基础上,2009年美国99%溯源到DCCT/UKPDS 英国97%、加拿大100%,室间CV 5%，测定值与靶值的Bias0.3%,CAP SURVEY(mean 2SD) 25,2010年，99%实验室以HbA1c报

8、告结果，室间CV 5%， 测定值与靶值的偏倚 0.8%HbA1c,国内、外变异度对比 26,靶值：5.4 最大值：6.3 最小值：4.6 变异系数：3.5,靶值：5.5 最大值：7.2 最小值：3.9 变异系数：8.4,1 所有仪器组 2 Abbott Architect System/Aeroset组 3 Bio-Rad HPLC组 4 TOSOH G7组 5 Drew DS5/Bio-Rad Diastat组 6 其它仪器组 7 Primus HPLC组 8 NycoCard Reader II组 9 ARKRAY HA-8160组 10 Beckman Synchron Systems组

9、 11 Olypus AU Systems组 12 Roche COBAS,Roche/Hitachi组 13 惠中MQ-2000,我国室间质评,CAP能力验证,我国201111样本结果 (mean 2SD）,2010-2011国内外变异度对比,我国,CAP,56家三甲医院实验室，采用国际普遍使用的方法（HPLC法、免疫法）,2010年EQA,我国不同级别实验室变异度对比,2010年我国参加国际比对,NGSP靶值,16家三甲医院实验室，采用国际普遍使用的方法（HPLC法、免疫法）,影响检测质量的因素,方法选择 使用方法种类多，有的方法没有进行标准化认证 方法使用 人员：能力参差不齐 室内质控：

10、少做、不做 校准：不能定期、定时校准，不使用配套校准品 试剂：色谱柱（适用时）：超限使用 仪器：不能定期维护、保养,HbA1c检测质量保证 31,宗旨：建立HbA1c检测的技术规范，提高HbA1c测定结果的可比性程度 指南从 方法的选择 方法的规范使用 测定结果质量的监测 三个质量环节制定了系统的技术规范原则，以保证糖化血红蛋白测定结果质量,方法的选择 32,应选用测定结果可溯源至IFCC参考系统的分析系统，例如：获得NGSP认证。 NGSP认证的有效期为1年，查询网址：www.ngsp.org/docs/methods.pdf 实验室应知晓所选分析系统可能存在的干扰因素 不同分析系统干扰因素

11、是不同的 POCT（point-of-care testing）方法的精准性不能满足临床需求，目前不应用于糖尿病的诊断,方法性能 33,实验室准备采用一个新的分析系统（新仪器、新试剂）测定临床样品前，应对系统性能进行验证 精密度：室内CV3% 目前许多测定方法的室内CV小于2% 只有控制室内CV小于3%，才能实现室间CV小于5%，应控制室内CV小于3%,精密度实验方法,分别采用不少于2个水平的质控物或样品（高、低值），每天测定2次（2次时间间隔不少于2小时），每次重复测2个结果，测定20个工作日，以20个工作日的80个结果计算平均值、标准差及变异系数 时间长度很重要，因为只有在相对较长的时间内

12、， 一些因素（不同批号试剂/校准物/色谱柱（适用时）、校准频率、不同操作人员、不同分析仪状况、不同环境条件等）对测定结果的影响才能体现，可以客观反映实际情况,方法的规范化使用,实验室应制定标准操作程序 项目名称 方法学原理 样本（采血管/抗凝剂、储存） 校准程序（校准日期间隔、校准方、校准方法） 室内质控程序 样品的测定程序 试剂 色谱柱（适用时） 干扰因素 参考区间（范围） 维护程序,内部质量控制,室内质控 每个测定日的开始和结束均应做质控分析 应同时测定至少2个不同水平（高、低值）的质控品 冻干粉质控品在更换试剂或色谱柱时可能会有基质效应，程度取决于所用方法 更换试剂、校准物、仪器设备的关

13、键配件或质控值超出质控限，应再做质控,样品采集、处理和储存,检测样品不受饮食和采血时间的影响 不同测定方法的样品稳定性是不同的 一般情况下，全血样品在4储存，可以稳定1周 在-70或更低温度可以长期储存，至少稳定1年以上，但不宜在-20长期储存 任何对样品的不当处理，如置于高温环境，可引入大量未知干扰，干扰程度取决于所用方法,HbA1c的影响因素 38,红细胞寿命的改变 溶血性贫血，大量失血、脾肿大、再生障碍性贫血 变异血红蛋白 衍生血红蛋白 严重的肾病、嗜酒 药物 大剂量水杨酸、VitC、VitE 严重的黄疸、高脂血症 Schiff 碱的干扰,测定质量的监测室间质评 39,室间质量评价（能力

14、验证，PT）计划是目前验证实验室测定结果是否具有可比性的有效手段 室间质评样品应与临床样品同样对待 是实验室质量改进的积极组成部分,保证HbA1c检测质量,三个质量环节保证HbA1c测定结果质量 选用一个可靠的分析系统 规范化使用分析系统 室内质控 参加室间质量评价 （能力验证）计划 生产厂家- 提高出厂方法质量 加强对用户的培训,小结,教育计划目的：提高对HbA1c 的认知程度 很多检测方法的性能已能满足临床的需要（可靠地区分0.5%的差异），但仍有些是达不到要求，因此选择稳定可靠的、可溯源的HbA1c检测系统尤其重要. 通过对HbA1c检测的规范化、标准化，提高质量：为临床提供有意义的糖尿病诊治依据。,Better A1c test means Better diabetes care,谢 谢,