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1、植物食品通过分散SPE进行乙腈提纯/隔离和移除之后使用GC-MS和/或LC-MS/MS测定杀虫剂残留物QuEChERS方法1 范围 本欧洲标准描述了植物性食物中的农药残留分析方法，如水果（包括干果制品），蔬菜，谷物及其加工品。该方法是在大量的物品/农药组合的基础上研究的。2原理 用乙腈提取质地均匀的样品。在初始提取之前，含水量低的样品（80%）需要另外加约10g水。添加硫酸镁、氯化钠和柠檬酸盐缓冲物，强烈振荡将混合物并用离心机进行相分离。等分试样的有机相是经采用批量吸附剂的分散固相（d-spe）提取掉，以及硫酸镁去除残余的水。随着加入少量的甲酸酸化，清理氨基吸附剂提取物（如二级阿明吸附，PSA
2、），提高碱敏感性农药的储存稳定性。最后的提取物可直接用于GC和LC的定性分析。定量通常是使用内标，即乙腈初次加入后添加到提取物中。这个方法的简单概述是附件C所示的流程图。3 试剂3.1 一般和安全方面 除非另有规定，使用认可的分析纯试剂。采取一切预防措施，以避免可能被水，溶剂，吸附剂，无机盐等污染。 免责声明本标准涉及几个市售的产品和适合该方法流程的仪器。此信息是为了方便本欧洲标准的使用者，和被产品命名的欧洲标准委员会不被构成背书。如果他们可以导致相同的结果，等效的产品可能被使用。3.2 水，HPLC级3.3 乙腈，HPLC级3.4 甲醇，HPLC级3.5 甲酸铵3.6 无水硫酸镁，砂砾，例如
3、Fluka63135号 在马弗炉中加热到550，邻苯二甲酸盐可以被去除（如过夜）。3.7 无水硫酸镁，细粉 在马弗炉中加热到550，邻苯二甲酸盐可以被去除（如过夜）。3.8 氯化钠3.9 柠檬酸二钠盐1.5水合物3.10柠檬酸钠3.11氢氧化钠溶液，物质的量浓度C= 5moll溶解2g氢氧化钠于5ml水中，并稀释至10ml。3.12缓冲盐混合溶液第二次提取和分配： 称取4 g 0.2无水硫酸镁（3.6），1 g0.05g氯化钠，1g0.05 g柠檬酸钠和0,5g0.03g柠檬酸二钠盐1.5水合物于烧杯中（4.11）。这些量是约10毫升的水样品中的。 高酸性样品（pH3），在添加缓冲盐后pH值通
4、常是低于5。为了更好地保护酸不稳定化合物，可以通过添加5 mol/l 氢氧化钠溶液(3.11)升高pH值：对于柠檬、酸橙和醋栗，可直接向盐混合物添加600l氢氧化钠溶液，对于木莓则是200l。注意 最好是提前准备足够数量的缓冲盐混合物，以便提取可以迅速地进行而不中断。盐混合物的制备可以极大地便利分样器的使用（4.12）。上述的盐的量是用于约含10g水的样品部分。3.13乙腈-甲酸混合溶液，体积比例=5ml甲酸100ml用乙腈将0.5ml甲酸（质量分数W95%）稀释至10毫升（3.3）。3.14二级阿明吸附剂 例如，Bondesil-PSA40 m Varian No. 122130231) 其
5、他氨基酸吸附剂可以使用，但需证是等效的，特别是关于被分析物的损失和最终提取物的pH值。3.15石墨化炭黑吸附剂（GCB），例如Supelco Supelclean Envi-Carb1) SPE Bulk Packing, No. 57210U 其他石墨化碳吸附剂可以使用，但需证是等效的，特别是关于分析物的损失。3.16吸附混合物1：GCB（3.15）/硫酸镁无水细粉（3.7）混合，1 + 59质量比 这两种成分混合成均匀的混合物。3.17吸附混合物2：GCB（3.15）/硫酸镁无水细粉（3.7）混合，1 + 19质量比 这两种成分混合成均匀的混合物。注意 强烈建议提前准备吸附混合物1(3.1
6、6)和2(3.17)，并将它们存储在可密封的容器内。为净化提取物，根据5.4.3将预混吸附混合物1或2加入到离心管(4.4)。3.18 碳十八吸附剂（十八烷基甲硅烷改性硅胶），50m散装材料。3.19乙腈内部标准和质量控制标准溶液，= 10 gml至50 gml表1列出可能用于这种方法的内部标准（istds）和质量控制（QC）的标准。列出的建议浓度值 ()是指 ISTD溶液应在第一提取步骤（5.2）中加入。这溶液（）适当稀释应准备用于标准溶液的制备。更多详情见3.22。3.20 农药原液 制备个别浓度分析标准储备溶液，足以制备用于标准溶液制备的复合农药工作溶液（3.21）。 通常，原液要储存在
7、低于18 的环境下。定期检查原液的稳定性 2。在某些情况下，酸或碱的加入可以提高稳定性和延长贮存期。在撤退之前，任何部分从该溶液再溶解，会有沉淀发生。3.21农药的工作溶液 由于这种方法的广泛适用性和由于部分农药不同的pH稳定性，不止一个工作溶液中含有一种或多种农药可以覆盖整个感兴趣的杀虫谱。这些都是按规定所需农药原液的体积（3.20）混合在一起的和用适当的乙腈稀释的。这些混合农药浓度应足以允许制备所需基质匹配的标准（见3.22.2），用适当的空白样品提取液稀释（例如小于20%）。 通常，工作农药溶液要储存在低于18 的环境下。定期检查这些混合农药的稳定性。某些情况下，酸或碱的加入可以提高稳定
8、性和延长贮存期。3.22标准溶液（校准混合物）3.22.1溶剂型标准 溶剂型标准的制备是将已知体积的农药工作溶液（见3.21）和ISTD溶液（见3.19)混合，用乙腈定容。 需用内标溶液的体积（）将取决于将制备的标准溶液的体积（），以确保内标浓度以类似于样品测试溶液。例： 如果制备1ml溶剂型标准，加入ISTD溶液的体积应包含ISTD质量(=)，是在5.2.3用10ml乙腈提取的检测部分中加入ISTD质量的10倍。因此，表明要适当稀释内标溶液浓度（这里=0.1。然后同样的吸管量ISTDS加入到穗试验样品和作为标准溶液的制备。表2示出了应添加到测试部分（5.2.3）和标准溶液（3.22）中的内标
9、质量的比率。 多标准的溶液的制备包含广泛的浓度范围，可制备校准曲线（见6.2）。注意 浓度为1 g / mL的农药相当于一个10g样品的1mg/kg的残留量（如样品的水含量30%）或5 g样品的2mg/kg残留量（如谷类）。3.22.2基质匹配标准制备基质匹配标准与制备溶剂型标准一样，然而，而不是使用纯乙腈提取空白样品(准备如5.1至5.4所述,但是没有加入ISTD)。以尽量减少在色谱过程中因基质效应引起的误差，最好选择类似农产品（如苹果样品，胡萝卜样品等）。当加入农药工作溶液超过20%时，应稀释空白样品提取液，体积调整可能必要的，以避免因在样品提取物和基质匹配标准之间的基质诱导的增强效果的差
10、异的误差。 基质匹配标准农药的稳定性会低于纯乙腈标准，必须检查得更彻底。 表2 应添加到测试部分（5.2.3）和标准溶液（3.22）中的内标质量的比率（校准混合物）3.23冷水（4C）3.24 干冰3.25流动相A1：甲酸铵水溶液，C=5 mmolL3.26流动相B1：甲醇-甲酸铵溶液，C=5 mmolL3.27流动相A2：醋酸水溶液，= 0,1ml冰醋酸L3.28流动相乙腈B2：乙腈-乙酸溶液，= 0,1mL冰醋酸L3.29流动相A3：甲醇/水A32+8（VV）与5mmol/L甲酸铵3.30流动相B3：甲醇/水B39 +1（VV）与5mmol/L甲酸铵4设备实验室常用仪器，特别是以下：4.1
11、试样加工设备，如Stephan UM 5 universal4.2高速分散装置分散元件的直径应适合所用的离心管（4.4）的开口。4.3自动移液枪，适用于处理10 L至100L，200 L 至1 000L和1mL至10mL。注意 10毫升的玻璃移液管可以替代（1ml至10ml)使用。4.4带螺旋盖离心管，50ml例 a) 50ml离心管由聚四氟乙烯制成，或是 b)一次性带螺旋帽50ml聚丙烯离心管4.5 单用带螺旋帽聚丙烯离心管，10ml或12ml4.6 10ml的乙腈溶剂分配器，用于5.2.34.7 离心机，适用于离心管用于步骤（4.4和4.5）和可实现达到3 000克。4.8 粉末漏斗，要适
12、合离心管的开口4.9 注射瓶，1.5ml，适用于气相色谱和液相色谱自动进样器，如果必要时用微量注射4.10螺旋盖玻璃瓶，如20ml，如必要，用于过量的最终提取存储4.11塑料杯（堆叠），25毫升，用于存储缓冲盐混合物部分（3.12）。4.12分样器，自动分盐和吸附剂例如从Retsch/Haan, PT 100 or Fritsch/Idar-Oberstein, Laborette 27 or Brkle/Lrrach, Repro high-precision sample divider2）。它们的使用是可选的但强烈建议处理大量样品。注意 前两个是分配缓冲盐混合物较好的（3.12），而 B
13、rkle Repro 是为少量固体设计的和更加适合分离PSA (3.14)/硫酸镁（3.6）的混合物需要分离SPE（5.4.2）。从加拿大进口的10毫升聚丙烯管，17mm84mm，货号T550-10AT2）（4.5）完全符合Brkle Repro。4.13振动装置，例如涡旋（用于回收试验）4.14 LC-MS/MS系统 配有电喷雾电离（ESI）接口（见附件一）4.15气相色谱-质谱联用系统，配备适当的探测器，如MS，MS / MS，TOF和PTV喷射器溶剂的发射方式（见附录A给出的气相色谱-质谱联用设备）5 步骤5.1样本的制备和存储5.1.1一般 在测试样品（有时也被称为“样品”）中，样品处
14、理和存储程序对残留量无显著影响。处理也应使试样均匀，足以使子采样的变化是可以接受的。如果一个单一的分析部分不能代表测试样本，应分析较大的或重复的部分，提供一个更好的估计真实值。粉碎的程度应支持定量排渣。5.1.2实验室样品 完全或大部分损坏或退化的实验室样品是不应被分析夫人。如果可能的话，在发生任何重大的物理或化学变化前，在任何情况下，样品到达后应立即准备实验室样品。如果一个实验室样品不能及时做好准备，应该是储存在适宜的条件下，以保持新鲜和避免变质。一般来说，在准备前，实验室样品不应超过3天。干的或类似加工样品应在其保质期内分析。5.1.3半成测试样品 半成测试样品的准备，用部分的实验室样品测
15、试最大残留限量。其余部分可能被清除。 选出的实验室样品部分应该具有代表性（如通过细分为四份、选择对角部分）。对于小单位的样品（如小水果如草莓，豆类，谷物），在称量部分半成测试样品前，样品必须充分混合。当样品是由较大的单位组成，从每个单元选取楔形部分（例如瓜）或截面（如黄瓜），包括皮肤（外表面） 2 。5.1.4试验样品 从每一半成测试样品，任何会导致均化困难的部分都应被剔除。在含石头的水果中，石头应该被剔除。被剔除的部分应该要记录保存。应采取预防措施，以避免任何的果汁或果肉损失。这是测试样品。残留量的计算应根据原试样的质量（包括石头）。 在测试样品的均匀性是不充分的或可能由于明显大粒径而影响残留物的提取，应使用适当的手段进行密集的粉碎。在室温条件下，如果肉和汁分离或农药降解不显着。在冷冻状态下粉碎的样品，不稳定的化学农药的损失明显减少，通常会导致更小的颗粒尺寸和更加均匀。粉碎前，用刀粗切割样品（如3厘米3
