器官培养 器官培养.

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1、1,第3章 器官培养,植物组织培养,2,第3章 器官培养,本章主要内容 根的培养 茎尖的培养 叶的培养,第3章 器官培养,3,(1)一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择； (2)掌握茎尖培养的种类和操作步骤； (3)掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整； (4)掌握离体叶片的培养步骤； (5)一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。,第3章 器官培养,本章教学目的与要求,4,器官培养的定义：,第3章 器官培养,研究器官的功能、分化、形态建成； 快速繁殖； 获得脱毒苗 种质保藏等,指植物某一器官的全部或部分或器官原基的离体培养，包括根、茎、叶、花、果实、种子等,培养目的：,5,第一

2、节 根的培养,根培养的意义: 1) 是进行根系生理研究的最优良实验体系; 2) 是研究器官分化、形态建成的良好体系； 3）可建立快速生长的根无性系。,第3章 器官培养,6,一、离体根的培养方法：,1、培养无菌苗 2、切取1.0cm的根尖 3、接种在White培养基或1/2MS培养基中暗培养 4、一周后，取侧根扩大培养，可得到离体根的无性系 培养条件为暗光和25-27,第一节 根的培养,7,培养条件为暗光和25-27 植株再生 根段的离体培养也可以用来再生植株。第一步诱导形成愈伤组织。第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、在愈伤组织上分化成小植株,一、离体根的培养方法：,8,二、培养基：,无机离子

3、较低的White培养基 或者2/3或1/2的MS、B5培养基,9,三、影响离体根生长的因素,第一节 根的培养,10,第二节 茎尖的培养,一、含义及意义 1、类型 茎尖分生组织培养：对长度0.1mm左右，含1-2个叶原基的茎尖进行培养，目的是获得无病毒植株 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是快速繁殖。,第二节 茎尖的培养,11,2、茎尖培养的意义,无性系快速繁殖； 培养无病毒苗，品种改良； 理论基础研究。,第二节 茎尖的培养,蝴蝶兰腋芽萌发,12,茎尖培养步骤 一般方法,二、茎尖培养的一般方法,13,茎尖培养步骤,(1)取材 挑选杂菌污染少，生长不久的茎尖。木本植

4、物可在取材前对茎尖喷几次灭菌药剂。以保证材料不带或少带菌。用于普通茎尖培养，可先从植物的茎、藤或匍匐枝上切取2cra以上的顶梢。 (2)消毒接种 将采集到的茎尖切成0.5-1.0cm长，并将其大叶除去，休眠芽预先剥除鳞片。 将茎尖置于流水冲洗2-4h，再在95的酒精中处理30s，然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min，最后用无菌水冲洗数次，准备接种。 (3)接种 为了减少污染，可在接种前再剥掉一些叶片，使茎尖为05cm左右大小。这样取茎尖大小只能作为快速繁殖。有些植物的茎尖由于多酚氧化酶的氧化作用而变褐。所以在接种时，不能用生锈的解剖刀，动作要敏捷，随切随接，减少伤口在空气中暴露的时间，也

5、可配制1-5Vc液，将切下的茎尖材料浸入处理一下。,14,二、茎尖培养的一般方法,(一) 制备外植体 取1-2cm的枝条顶梢，去小叶-消毒-解剖镜下用解剖刀除去幼叶和叶原基，露出生长点，切下0.1-0.2mm长的茎尖(含1-2个叶原基) (二)培养基 (三)培养方法,第二节 茎尖的培养,15,(二)培养基,多数采用MS 培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA， NAA等，但浓度不能太高，一般用01mgL左右，高于此浓度，往往产生畸变芽或形成愈伤组织 不同植物对生长素的反应是不同的。,16,(三)培养方法,1、固体培养法：试管培养 2、纸桥培养法,17,2、纸桥培养法,含义：用酒杯状的滤纸

6、代替琼脂，使杯底朝上塞入试管中，与液体培养基接触，将离体茎尖置于滤纸上方进行培养。,优点：培养基是液体培养基，营养物质能通过滤纸均衡而持久地供给外植体，有利于外植体的健康成长 ； 缺点：操作工艺复杂 。,第二节 茎尖的培养,18,三、茎尖分生组织培养与脱毒,见第八章 植物脱毒技术,19,四、普通茎尖培养与繁殖技术,概念：快速繁殖(微繁殖):用组织培养的方法，使植物的部分器官、组织迅速扩大培养，并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。 特点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工；节约空间有利于植物的工厂化生产；在无菌条件下进行，不受病虫害侵害。,第二节 茎尖的培养,20,（一）茎尖微

7、繁技术的过程：分5个阶段,1、无菌培养体系的建立、 2、芽的增殖 3、中间繁殖体的增殖 4、诱导生根 5、试管苗的移植,第二节 茎尖的培养,21,1、无菌培养体系的建立,初代培养建立的无性繁殖系包括： 茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。,外植体的制备,培养基,培养条件,第二节 茎尖的培养,22,2、芽的增殖 （1）顶芽和腋芽的发育,顶芽、侧芽生长，形成一个微型的小灌木丛状的丛生苗结构。 丛生苗的每个枝条转接继代，可迅速获得多数的嫩茎。这种繁殖方式称作微型扦插或无菌短枝扦插 优点：不经愈伤组织，所以最能使无性系后代保持原品种的特性。,第二节 茎尖的培养,23,（2）不定芽的发育,不定芽产生的途径：

8、外植体上直接产生 由外植体诱导的愈伤组织上产生。,第二节 茎尖的培养,外植体,脱分化,愈伤组织,再分化,器官原基,24,第二节 茎尖的培养,由第二阶段芽的增殖产生的数量有限的芽、苗、原球茎称为中间繁殖体。 将之转接到新鲜的相同培养基上进行继代培养，3-4周转接一次，扩大培养。,3、中间繁殖体的增殖,25,茎的培养发育方向,腋芽萌发 脱分化后产生胚状体（原球茎） 脱分化后直接产生不定器官 脱分化后形成愈伤组织,第二节 茎尖的培养,26,4、壮苗和生根,壮苗目的：使增殖的嫩枝生根产生小植 株，以便移栽。,第二节 茎尖的培养,27,用White、1/2或1/3MS、B5等生根培养基。 降低N，P，K

9、盐的量。 适当加大生长素（如NAA），不用或少用细胞分裂素，或在无激素的培养基上生根。 蔗糖降低到1.0-1.5%，以增强植株自养能力； 加入1%左右的活性炭； 增加光强度，以提高小植株的光合能力。,第二节 茎尖的培养,试管苗生根的措施,28,5、移栽,生根培养1个月左右。移植时可根据生根情况来进行。若发现新梢基部生有较浓密的不定根，长度在lcm以内，就可移栽人土。移栽时通过几天的炼苗过程，栽入塑料营养钵或育苗盘中，营养钵盛经烧烤或常压灭菌的培养土(1分腐殖土：1分沙)。,29,栽后给予较高的空气湿度条件。培养土要浇透水，所放置的床面也要浇湿，然后搭小拱棚，以减少水分的蒸腾，并且初期要常喷雾处

10、理，保持拱棚薄膜上有水珠出现。当发现小苗有生长趋势，可逐渐减少湿度，将拱棚两端打开通风，并且减少喷水次数。使小苗适应湿度较小的条件。以后揭去拱棚的薄膜，并给予水分控制，少浇水或不浇水，促进小苗长得粗壮。温度管理上要掌握适宜的生根温度，最适宜的温度是16-20。 光照管理上初期可用较弱的光照，在小拱棚上加盖遮阳网或报纸等，以防阳光灼伤小苗和增加蒸腾作用，后期可直接利用自然光照。,5、移栽,30,5、移栽,可用育苗盘进行驯化生根、孔径选择2cm左右即可。孔穴装入蛭石：珍珠岩：草炭土为1：1：05的基质。当小苗长至5cm高左右再移人塑料营养钵中。,31,(二) 影响茎尖培养微繁殖的因素,基因型 外植

11、体的大小 供试植株的生理状态 芽在植株上的部位 供试植株的年龄 培养基 褐变 玻璃化,32,（三）茎段的培养,茎段培养 指不带芽和带1个以上定芽或不定芽的，包括块茎、球茎在内的幼茎切段的无菌培养。培养茎段的主要目的是快繁。 优点 培养技术简单易行，繁殖速度较快；芽生芽方式增殖的苗木质量好，且无病，性状均一；解决不能用种子繁殖的无性繁殖植物的快速繁殖问题等。,33,图示茎段培养过程,植株再生,培养,去叶片用水冲洗茎段,34,(1)材料的选择和处理,取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，若是木本，取当年生嫩枝或一年生枝条，剪去叶片，剪成3-4cm的小段。取材时注意茎的基部比顶部切段，侧芽比顶芽的成活

12、率低，所以应优先利用顶部的外植体，但由于每个新梢仅一个顶芽，也可利用腋芽，茎上部的腋芽培养效果较好。还应注意尽量在生长期取芽，在休眠期取外植体，成活率降低。如苹果在3-6月取材的成活率为60，7-11月下降到10，12-2月都下降10以下。,35,(2)培养,最常用的基本培养基为MS培养基，加入3蔗糖，用07的琼脂固化。培养条件保持25左右。经培养后茎段的切口特别是基部切口上会长出愈伤组织，呈现稍许增大，而芽开始生长，有时会出现丛生芽，从而得到无菌苗。 在茎段培养中，促进腋芽增殖用6-BA是最为有效的，依次为Kt和Zt等。生长素虽不能促进腋芽增殖，但可改善苗的生长。GA对芽伸长有促进作用。,3

13、6,（3）继代,两种途径：一是促进腋芽的快速生长，二是诱导形成大量不定芽。第一种途径的好处是不会产生变异，能保持品种优良特性。且方法简便，可在各种植物上使用，每年从一个芽可增殖10万株以上。第二种途径会产生变异。继代增殖过程注意选用培养基和生长调节剂。,37,（4）生根,降低或除去细胞分裂素而加人生长素。由于在苗增殖时施用了较高浓度的细胞分裂素，并促使苗中保持着一定的量，因此，在生根培养中不需要加细胞分裂素。生长素的浓度，NAA一般01-10mgL，IBA和IAA可稍高。 MS，B5 White等培养基，都可用于诱导生根，但是其含盐浓度要适当加以稀释。前面的几种培养基中，除White外，都富含

14、N，P，K盐，它们都抑制根的发生。因此，应将它们降低到12，13或14，甚至更低的水平。 生根培养时增强光照有利于发根，且对成功地移栽到盆钵中有良好作用。故在生根培养时应增加光照时间和光照强度，但强光直接照射根部，含抑制根的生长，所以在生根培养时最好在培养基中加03活性炭，以促进生根。,38,(5)移植,在驯化时要进行炼苗。然后洗净琼脂，小心移栽，初期湿度要大，基质通气湿润，保湿保温，更要精心管理等。,39,一、定义： 离体叶的培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。,第三节 叶的培养,第3章 器官培养,40,叶培养的意义：,1、是研究叶形态建成、光合作用、叶绿素形成的好

15、方法 2、通过叶组织的脱分化与再分化以证实叶细胞的全能性 3、通过叶组织培养，探索离体叶组织培养的条件和影响因素 4、建立体细胞快速无性繁殖体系 5、叶细胞培养物经诱变筛选突变体。,第三节 叶的培养,41,二、叶组织培养的方法,1、制备外植体： 幼嫩叶片-水洗-消毒- 无菌水洗。 2、影响培养因素： 1）6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈伤组织形成。 2）极性：叶片腹面向上放置利于芽的分化 3）损伤：常从叶柄、叶脉的切口处形成愈伤组织和芽。,第三节 叶的培养,42,三、离体叶组织中再生植株发生途径,1、直接产生不定芽 2、离体叶 愈伤组织 不定芽 3、离体叶 愈伤组织 胚状体 不定芽 4、离体叶 小鳞茎或球状体 愈伤组织,第三节 叶的培养,43,番茄子叶培养,百合鳞叶培养,第三节 叶的培养,烟草叶片培养,叶的培养：,44,(1)植物器官培养的含义。 (2)离体根培养的方法、培养基、影响离体根生长的因素。 (3)茎尖培养的含义；茎尖培养包括普通茎尖培养和茎尖分生组织培养。 (4)纸桥培养的含义 (5)茎尖微繁一般的过程 (6)离体叶组织脱分化和再分化中，茎和芽分化主的4个途径 (7)试管苗诱导生根方法。,第3章 器官培养,本章小结：,45,谢谢!,第3章 器官培养,