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1、抽象转到：介绍RAS 同源（RHO）GTP 酶包括 Ras 超家族小 GTP 酶，一大分支与 Rac1 的 Cdc42 和 RhoA 蛋白是最好的特征。 - 3 Rho GTP 酶的重要调节肌动蛋白细胞骨架组织，细胞极性和迁移，细胞周期进程和基因表达。像 RAS，其功能异常与人类癌变和其他疾病相关。 1 -然而，不像频繁直接激活的 Ras 突变在癌症，Rho GTP 酶不直接突变，相反，他们的功能都放开间接通过改变的 Rho 调节蛋白的表达和活性。 至目前为止，最好的机制之一涉及不适当的鸟嘌呤核苷酸交换因子激活（RhoGEFs）促进形成的 Rho GTP 酶激活，GTP结合的形式，GTPase
2、 激活蛋白的表达和损失（ RhoGAPs）的加速 GTP 水解和无效 GDP 结合 Rho GTP 酶的形成。 第三类监管机构的参与，罗 GDP 解离抑制剂（RhoGDIs ），是很好理解的少，并在最近获得了更多的关注，因为可能用于治疗癌症的治疗靶点。 4 ， 5三个人类 RhoGDI 亚型， RhoGDI1（也称为 GDI，GDI），RhoGDI2（LyGDI/D4GDI/GDI ），RhoGDI3（GDI），通常被认为是负向调节功能的 Rho GTPase 活性首先通过三个不同的生化机制。6RhoGDIs 绑定和掩码翻译后连接到靶序列的 Rho 家族小 GTP 酶的 C-端膜的 C-末端异
3、戊二烯组。 的 Rho GTP 酶 RhoGDI 结合形式在细胞质中的无效复杂，因为异戊二烯的脂质修饰是必不可少的，适当的亚细胞定位和生物活性膜协会。 其次，RhoGDIs 抑制 RhoGEF 介导的 GDP-GTP 交换，有利于的无效 GDP 结合的形式。 第三，他们与 GTP 结合的形式进行交互抑制 GTP 水解，RhoGAP 的催化 GTPase 活性的，防止与下游效应目标的相互作用。 然而，RhoGDIs 也可以作为积极的监管通过针对 Rho GTP 酶亚膜，它们与不同的效应或保护 Rho GTP 酶，蛋白酶降解。 最后，不同的组织表达模式，亚细胞定位和特定的 Rho GTP 酶家族成
4、员的互动与建议鲜明三个 RhoGDIs 功能。而 RhoGDI1 广泛表达，在多种癌症中表达的改变 RhoGDI1 和/或 RhoGDI2 的 RhoGDI2 正常造血组织中优先表达，据报道，在参考文献 4 和 5 。 然而，癌细胞生长的 RhoGDI1 RhoGDI2 的确切作用是复杂的，有时是相反的作用及可能的肿瘤的类型不同描述的功能。 在膀胱癌转移抑制 RhoGDI2 角色已经建立。 应用基因芯片分析，Theodorescu 和他的同事们报告说，减少 RhoGDI2 但不 RhoGDI1 更微创 HRAS 突变阳性 T24 膀胱癌的细胞株变种基因/ 蛋白表达与 7 异位修复的 RhoGD
5、I2 表达在侵入 T24 变种减少转移由尾静脉肺肿瘤在小鼠体内定植。 最后，免疫组织化学（IHC）分析发现 51 例膀胱肿瘤，RhoGDI2 过度表达与较短的时间内针对特定疾病的死亡。 8一种肿瘤促进作用 RhoGDI2 过度相反的结果与膀胱癌，胃癌在一项研究中。 RhoGDI2 蛋白表达被发现胃癌肿瘤组织中高，较正常胃组织的表达水平的 RhoGDI2 与淋巴结转移相关的蛋白质。 9 异位过表达RhoGDI2 在光线侵入胃癌细胞显着增加基底膜体外侵袭。 相反，枯竭内源性 RhoGDI2 在过表达RhoGDI2 的胃癌细胞抑制体外侵袭。 这些细胞系中表达 RhoGDI2 强制增加在小鼠的肿瘤生长
6、，血管生成和肺转移。 因此，在对比的膀胱癌细胞，RhoGDI2 过表达促进而不是抑制侵袭和转移的乳腺癌和胃肿瘤细胞株。已经描述了更复杂的，有时是相对的，表达的变化和角色在乳腺癌组织中的 RhoGDIs。 一项研究发现膀胱癌相似，表达的 RhoGDI1 RhoGDI3 减少，但不 RhoGDI2 在乳腺肿瘤组织与正常时的表现，而该亏损与淋巴结和远处转移，预后较差。 11 相比之下，第二项研究中，使用免疫组织化学染色 71 肿瘤病人中发现了双相模式增加 RhoGDI2 表达与乳腺增生，但进展及淋巴结转移的表达减少 12 在第三项研究，表达RhoGDI2 的是不相关的两个大乳房要么无病或总生存期癌症
7、的同伙，但他们发现，RNAi 抑制增强RhoGDI2 表达的 MDA-MB-231 乳腺癌细胞体外侵袭。 10 最后，第四个研究发现，高 RhoGDI2 在肿瘤中的表达，但不是良性的乳腺肿瘤细胞株，并击倒 RhoGDI2 MDA-MB-231 细胞活力下降，基底膜体外侵袭导致， 13 这些对比观察，防止建立一个清晰的格局 RhoGDI2 表达变化在肿瘤进展和为 RhoGDI2 在乳腺癌恶性生长的功能作用。已经描述了只有有限的 RhoGDI 在卵巢癌中的表达和功能的评价。 在一项研究中，被认定通过三个侵入卵巢肿瘤中过度表达的蛋白质组分析 RhoGDI1 蛋白表达，相比三低潜在恶性卵巢肿瘤， 14
8、 符合促进侵袭和转移中的作用 RhoGDI1。 在基因芯片研究的六个的浆液 cystadenocarcoma 和一个囊腺瘤，上调 RHOGDI2转录相关的癌相比，良性腺瘤组织。 15 然而，没有蛋白表达的分析。 此外，在芯片技术的研究，以确定 16浆液性卵巢癌组织中的免疫组织化学分析发现，RhoGDI2 蛋白的过度表达是不接受紫杉醇为基础的化疗的患者与卵巢癌紫杉醇耐药相关基因表达的变化，RhoGDI2 过度表达与阻力。阶段或组织学分级密切相关，但更常出现无应答者（四五例）比应答者（16 例）。 他们的结论是 RhoGDI2 的表达可能是预测标记的紫杉醇不仅在紫杉醇耐药细胞株的电阻，而且患者样品
9、中。目前，只有有限的 RhoGDI1 和 RhoGDI2 蛋白在卵巢癌中的表达和功能的分析已经完成。 在目前的研究中，我们发现，RhoGDI2，但不 RhoGDI1 蛋白质表达差异很大面板卵巢癌的细胞株和卵巢肿瘤，此外，在 Ras转化的人类卵巢表面上皮细胞升高，提示，RhoGDI2 过度表达可能促进肿瘤生长。 RhoGDI2 明显过度表达在高档比低档卵巢癌的。 然而，RhoGDI2 水平没有与卵巢癌的阶段，并表示在两个癌和良性囊肿。 令人惊讶的是干扰 RNA 抑制 RhoGDI2，增加基底膜的 HeyA8 卵巢癌细胞株侵袭和增加肺癌定植在一个尾静脉肺转移实验。 我们的研究结果支持 RhoGD2
10、 的侵袭和转移抑制的作用。转到：结果可变的 RhoGDI2 蛋白在卵巢癌的细胞系和肿瘤组织中的表达。虽然以前的研究认为，RhoGDI2 蛋白的过度表达与卵巢肿瘤的进展， 15 只计算这些分析基因的转录并没有卵巢肿瘤生长的功能贡献分析解决。 因此，我们首先进行了蛋白质凝胶印迹分析，评估人类卵巢癌细胞株的面板和另外配对的永生化人类卵巢表面上皮细胞（T29）和转化突变激活的 Ras ectopicallyexpressed RhoGDI2 蛋白质的表达（ T29，T29 H-ras 基因 K-RAS）（ 图 1A ）。 非常低或无法 RhoGDI2 的表达被认为在未转化的 T29 细胞，以及三个卵巢
11、肿瘤细胞系（A2780，OVCAR-8 和 SKOV-3）。 与此相反，我们发现高 RhoGDI2 四个卵巢癌细胞系（OVCAR-3， HeyA8，OVCAR-4 和 OVCAR-5）的水平。 我们还发现，在两个 T29 H-Ras 和 T29 的 K-ras 基因细胞的升高 RhoGDI2 表达，提示的作用 RhoGDI2 转型。 与此相反，RhoGDI1 表达水平分别相当于对所有细胞系。 没有 RhoGDI2 过度表达与细胞的侵袭能力通过基底膜或锚地独立增长的软琼脂（数据未显示）。 这些数据表明，可伴有 RhoGDI2 的过度表达与卵巢癌的细胞转化和致瘤性的生长。图 1变量水平的 RhoG
12、DI2，但不 RhoGDI1 蛋白表达在人卵巢癌细胞系。（A）蛋白质印迹分析 RhoGDI1 RhoGDI2 蛋白的表达。 细胞溶胞产物进行免疫印迹分析，利用特异的抗体 RhoGDI1，.要确定是否过度表达 RhoGDI2 可以与具体的病理表型在 patientderived 卵巢癌组织中，我们评估了先前描述和验证 388 例手术切除的人卵巢癌组织中含有已知的临床病史的卵巢组织芯片 RhoGDI2 蛋白表达。 17-我们使用福尔马林固定，石蜡包埋的细胞系抗体 IHC 首次验证了 RhoGDI2 的。 在与我们的蛋白质凝胶印迹数据（ 图 1A ），我们发现，抗-RhoGDI2 抗体染色阴性 A2
13、780 细胞和积极在 HeyA8 细胞（ 图 1B ）。RhoGDI2 染色主要见于卵巢肿瘤细胞的细胞质中，在细胞核中也观察到染色。RhoGDI2 显着高表达中高档（344 例）相比，低度恶性卵巢癌（ 43 例），虽然表达不与卵巢癌的阶段（ 图 1B 和 表 1 ）。 表达 RhoGDI2 和组织学亚型之间的关联有统计学意义（ 表 1 ）。 此外，癌 70 例，良性囊肿 32 例（ 表 1 ）之间无显着差异表达。 透明细胞癌低表达 RhoGDI2 比例更加频繁相比，浆液性和移行细胞癌，粘液浆液性，低分化，恶性苗勒管混合瘤（肉瘤），混合型癌相比，子宫内膜浆液性和混合型癌相比（ 表 2 ）。 虽然
14、没有统计学意义，但有一个趋势卵巢癌患者，高水平的 RhoGDI2 有一个总体生存率下降（ 图 1C ）。表 1分级，分期和肿瘤的诗句表达的 RhoGDI2 和组织学亚型之间的相关性，非肿瘤性卵巢癌患者组织表 2p 值两两协会之间不同的组织学亚型抑制 RhoGDI2 表达增强 HeyA8 卵巢肿瘤细胞在体外和体内的生长特性。为了确定如果 RhoGDI2 过度表达导致卵巢癌细胞的生长和侵入型，我们选择研究 HeyA8 细胞，表现出非常高的水平 RhoGDI2 蛋白表达（ 图 1A ）。 我们专注于的 HeyA8 细胞株的理由是基于最初是从一个女人与先进，治疗难治性卵巢癌，此行乃代表的极端增长见于临
15、床疾病的事实。 最后，HeyA8 的细胞在小鼠尾静脉肺定植转移实验常用，因为通过血管侵入细胞的能力，附加并和肺菌落形成。 20 ， 21 HeyA8 细胞稳定地感染逆转录病毒载体表达任一控制目标 shRNA 的（ GFP）针对 RhoGDI2（指定 RhoGDI2 我和第二RhoGDI），或两个独立的 shRNA。 感染三天后，细胞嘌呤选择建立大规模人口稳定感染细胞，并进行印迹分析验证表达 RhoGDI2 的抑制。 的 GFP shRNA 的 offtarget 的的控制结构有没有影响，而两个RhoGDI2 我和 RhoGDI2 II 对 RhoGDI2 表达 shRNA 的表达细胞显示90稳
16、态蛋白表达水平下降（ 图2A ）。 此外，RhoGDI1 表达水平没有改变击倒 RhoGDI2 后，表示没有代偿性增加图 2稳定抑制 RhoGDI2 在 HeyA8 细胞增加基底膜侵袭，锚地独立生长在软琼脂和肺部定植尾静脉肺转移鼠标实验。 （A）稳定地 shRNA 的抑制 RhoGDI2 蛋白表达。 HeyA8 细胞 .稳定抑制 RhoGDI2 表达并没有引起细胞形态，还是在体外的生长速率（数据未示出）中的可检测的改变。然而，当细胞通过基质胶侵袭进行了评价的，令人惊讶的是，显示 HeyA8 RhoGDI2 敲除细胞浸润增加约2 倍相比，与对照细胞（ 图 2B ）。 此外，RhoGDI2 抑制显着增加所测得，与对照细胞（ 图 2C 和 D）相比时，在软琼脂中集落形成频率 anchorageindependent HeyA8 增长。 因此，出乎意料的是，虽然RhoGDI2 在 HeyA8 细胞中表达升高，这些结果支持抑制肿瘤和侵袭，而不是一个原癌基因在卵巢肿瘤细胞功能 RhoGDI2。要确定是否下调 Rho
