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1、虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 第三节 DNA多态性分型技术 四川大学华西公共卫生学院 汪川 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 什么是DNA多态性? 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和
2、慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 多态性（polymorphism）是指在一个生物 群体中，同时和经常存在两种或多种不连续 的变异型或基因型或等位基因，亦称遗传多 态性（genetic polymorphism）或基因多态 性。 从本质上来讲，多态性的产生在于基因水平 上的变异，一般发生在基因序列中不编码蛋 白的区域和没有重要调节功能的区域。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如
3、吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 DNA多态性对微生物有哪些实际意义？ 将导致 不同的细菌亚型 耐药菌株出现 毒力变异株出现 抗原漂移与抗原变异 。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 在疾病预防控制中的应用 同源性追踪 细菌分型 传染控制 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病
4、危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 DNA多态性分析常用的方法 限制性片段长度多态性分析 随机扩增多态性DNA分析技术 细菌基因组重复序列PCR技术 扩增片段长度多态性分析技术（自学要考 ） 脉冲场凝胶电泳 。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 一、限制性片段长度多态性分析 restriction fragment length polymorphism， R
5、FLP 以DNA-DNA杂交为基础的第一代遗传 标记，是限制性内切酶、核酸电泳、印迹技 术、探针-杂交技术的综合应用 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 每种生物基因型具有其独特的特征，及独特的限 制酶识别序列分布，其基因组DNA在限制性内切 酶作用下，产生相当多的大小不等片段，这些片 段经电泳以后几乎是连续排列的，如用放射性同 位素标记的DNA作探针，将与被标记的DNA相 关的片段检测出来，即可构建出多态性图谱
6、。 基 本 原 理 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 因此，RFLP即是基于限制性核酸内切酶 酶切消化核酸及标记的DNA探针能与任 何序列相似的片段杂交，通过片段长度 变异性来检测生物体多态性。 基 本 原 理 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍
7、未得到有效控制。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 基本 方法 提取基因组DNA 制性内切酶酶切 琼脂糖凝胶电泳 DNA变性、转膜、固定 核酸杂交 显影、显色、分析 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 限制性内切酶 (restri
8、ction endonuclease， RE） 一类能识别环状或线性双链DNA特定 核苷酸序列的DNA水解酶，在合适反应条 件下，使每条链的一个磷酸二酯键断开 ，产生多种可测量的寡核苷酸片段的酶 。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 内切酶的命名规则 前三个字母代表其来源的细菌种名，用 斜体字母，第四个字母代表菌株名称， 如果同一株菌有不同限制性内切酶系统 ，则不同的内切酶系用罗马数字区分。 例：EcoRI代表
9、该酶来源于E. coli 的R菌株。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 琼脂糖凝胶电泳槽和电泳仪 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 转移电泳槽 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸
10、系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 核酸分子杂交的概念及原理 核酸杂交: 两个不同来源的、含有互补核苷酸顺序 的单股核酸分子，通过碱基配对形成一 个新的、稳定的双股分子的过程。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带
11、来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 核酸经加热变性后，在低于变性温度 20 30时，反应系统中加入的核酸探针 与待测核酸样品中具有互补序列的单链DNA 或RNA形成双链结构，通过检测标记信号即 可检测特定的核苷酸片段。 核酸分子杂交技术原理 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 根据探针上的标记，可用放射自显影 或加入酶底物显色的方式
12、观察结果。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 优点 1可靠性较高 2来源于自然变异 3标记覆盖面广 优 缺 点 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 缺点： 检测步骤多，周期长； 对DNA需求量大，一般需要5l0g ，纯度要求较高；
13、 技术复杂，操作繁琐，工作量大； 具有放射性的危害； 检测成本高。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 讨论： RFLP与脉冲场凝胶电泳都是根据 基因组上的限制性内切酶位点的 多态性来对生物进行基因分型的 ，那么它们两者的异同点有哪些 呢？ 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和
14、膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 基于上述RFLP的缺点，一种更好的 分析技术聚合酶链反应-限制性 片段长度多态性分析技术 （PCR- RFLP ）应运而生。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 结合PCR技术与RFLP技术的优点，其基本原 理是对目的基因片段PCR扩增后，利用多种限 制性内切酶，对扩增产物进行酶切，不同基因 序列，不同限制性内切酶酶切扩增产物，在电 泳后可产生不同电泳图谱，通过对电泳
15、图谱的 分析，得出基因多态性结果。 思考：需要和探针做核酸杂交吗？为什么？ 基本原理 根据名称： PCR-RFLP猜想本方法的原理？ 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 1. 提取DNA 2. 设计特异引物进行目的基因PCR反应 3. 将DNA扩增产物选用合适限制性内切酶酶 切 4. 将酶切出来的具各种长度的DNA片段在琼 脂糖凝胶上电泳分离 5. 对显示出来的带谱进行分析。 基 本 程 序 根据基本原理思考基本
16、程序？ 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 优 缺 点 优点： 敏感性高。 操作简便省时。 缺点： 影响因素较多。 不能完全区分基因非常相似，甚至只有一 个核苷酸差异的生物类型。 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 RFLP与PCR-RFLP的应用 1.结核分枝杆菌IS6110-RFLP分 析 2.厌氧菌16SrRNA基因PCR- RFLP分析 3.其他 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健
