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1、 分类号：R 7 1 1 密级： 厶 单位代码：1 0 4 2 2 学号：2 0 0 7 2 0 7 7 7 茧只孥 博士学位论文 S h a n d o n g U niV S f Sit yD o c toraI Dis ser t a tio n 论文题目：上皮性卵巢癌的发生及早期诊断研究 T h e S t u d yo fe p i t h e l i a lo v a r i a nc a n c e rt u m o r e g e n e s i s 作 a n de a r l yd e t e c t i o n 专业 导师 合作导师 2 0 10 年5 月6 日 - -r
2、 I j 、歹f、芦9 冷p 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。 对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方 式标明。本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：盖阻 日期：型盟坠盟 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、
3、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 做作者签名： 牡导师签名： 芝壁坠 日期： ， 中文摘要 英文摘要 符号说明 前言 第一部分 引言 材料方法 结果 讨论 结论 附图 参考文献 第二部分 目录 弓I言 4 9 材料与方法5l 结果 5 8 讨论 6 0 结论 6 5 附图 6 7 参考文献8 0 文献综述 8 6 致谢 10 3 攻读学位期间发表的学术论文 1 0 4 学位论文评阅及答辩情况表1 0 5 英文论文1 英文论文2 | | | | 黼 | | 二二| 詈 = | | 腆 二二二二 | | | | 蚍 = 二| | = 二二 | | =
4、 二二二 二二 = = 二磊 | | | | 嗽 = | | | | = | | 二锵 二| | 二 二| | 骱 |=二三腕 一一 一 一 一一 C O N T E N T S A b s t r a c ti nC h i n e s e l A b s 仃a c ti nE n g l i s h ”， A b b 州a t i o 潞。I 4 P r e f a c e ”l O P A R To N E 阳。i m m 矾a l i z e dn o n t u m 。d g e n i ch u m a no v a r i a n 刚搬印i 也e l i a l c e l ll
5、 i n e si n f e c t e dw i t hr e t r o v i r u sc o n t a i n i n g H E R 2 n e uc D N A m 仃o d u c t i o n z ) M a t 耐a I sa n dM e t h o d s z 5 R e s u l t s _ j O D i s u s s i o n j 西 C 0 n c l u s i o n s 珥l F i 昏臌 珥z R e f e r e n c 船4 6 P A R TT w oT h eS t u d y 。f T 2 9 Na n d T 8 0 Na n
6、dt h ex o n o g r a f t t u r n o rc e l l sT 2 9 N t a n dT 8 0 N ti nv i t r oa n di nv i v o I n 仃0 d u c t i o n 珥y M a t e r i a l s 觚dM e t l l o d s l R e s u l t s 5 8 D i s u s 咖6 u c o n c l u s i o m 0 5 F i 邮s 。O ， R e f e r e n c e s 毽u R 州e w 酌 A c k n o w l e d g 锄e n t s l u j P u b
7、l i c a t i 。n s 1 0 4 P a p e r l P a p e r 2 山尔人学博+ 学位论文 上皮性卵巢癌的发生及早期诊断研究 专 业：妇产科学妇科 博士研究生：郑靖芳 博士生导师：刘培淑教授 刘劲松教授 R o b e r tC B a s tJ r 教授 摘要 【研究背景与目的】 卵巢癌是妇科肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤。由于缺乏有效的早期筛查手 段，早期症状及临床表现不典型，约8 5 的患者初诊时已属疾病晚期。上皮性卵 巢癌( E p i t h e l i a lo v a r i a nc 锄c 虬E O C ) ，是卵巢癌中最常见类型，也是妇科肿瘤中 死亡率最
8、高的肿瘤类型，其死亡率高于其他所有妇科肿瘤之和。原因主要有早期 筛查手段缺乏，早期诊断治疗对于延长患者生存时间是非常重要的一个环节，但 是卵巢癌发生的分子生物学机制仍是未解之谜，给卵巢肿瘤的早期诊断带来困难 和挑战。上皮性卵巢癌中又以卵巢高分化浆液性乳头状癌是常见的病理类型，普 遍认为这种类型有部分起源于卵巢表面上皮细胞。然而，到目前为止，还没有任 何直接实验证据证明卵巢表面上皮细胞能够形成高分化浆液性乳头状癌。研究表 明，人卵巢恶性肿瘤的组织学类型分化是受多种因素影响的，包括上皮细胞一系 列基因型和表现型的改变，可归纳为多种因素共同产生的生物学现象。探索卵巢 癌的发生机制具有深远的理论和现实
9、意义。 H E R 2 n e u 基因是一种原癌基因，位于1 7 号染色体长臂上，编码1 8 5K D 跨膜 蛋白，具有酪氨酸激酶活性，属于人类表皮生长因子受体家族。以往对于H E R 2 n e u 基因的研究，主要集中于对乳腺癌的诊断、预后及靶向治疗的效果，而在上皮性 卵巢癌中研究较少。研究表明，H E R 2 n e u 基因扩增及蛋白的过度表达与卵巢癌 的预后及治疗有密切联系。2 5 - 3 0 的乳腺癌和卵巢癌中发现H E R 2 n e u 基因扩增 及蛋白的过度表达，并被认为是与预后不良相关的因素，H E R 2 n e u 基因通过多 种机制参与卵巢癌的演进，H E R 2
10、n e u 蛋白高表达与卵巢癌的多种临床特征相关， 如临床分期较晚、手术中发现巨大肿块几率高、病理学分化差、较高复发率、生 山东人学博十学位论文 存时问短和对以铂类药为主的化疗不敏感。 上皮一问质转化( e p i t h e l i a l m e s e n c h y m a lt r a n s i t i o n ，E M T ) 是指上皮细胞 在形态学上发生向成纤维细胞或问充质细胞表型的转变并获得迁移的能力。其主 要特征为上皮表型缺失和问质表型获得。E M T 在肿瘤发生与转移以及多种慢性疾 病的发生发展过程中也起着重要的作用，研究发现，上皮一问质转化是细胞发生分 子转换，失去上皮
11、特性而获得间质特性，继而具备运动性以挣脱细胞间黏附，并 侵犯到其他部位的过程。此外，肿瘤微环境通过特异因子的作用影响着肿瘤细胞 的生物学特性。 为了探讨H E R 2 n e u 基因过表达对卵巢上皮性肿瘤( E p i t h e l i a lo v a r i a no a n c e r ， E O C ) 形成的作用，以及基因作用对上皮性卵巢癌生成的意义；进一步揭示肿瘤 发生过程中上皮间质转化作用( E p i t h e l i a l - m e s e n c h y m a lT r a n s i t i o n ，E M T ) 以及 肿瘤细胞生长微环境( T u m o
12、 rM i c r o e n v i r o n m e n t ) 的影响。本文进行了以下几个 方面的研究：1 建立遗传背景明确的过表达H E R 2 n e u 基因的T 2 9 N t 、T 8 0 N t 卵巢 癌细胞模型。2 建立实验动物模型，揭示遗传成分与腹膜腔微环境共同诱导作用 对正常人类卵巢表面上皮向卵巢恶性肿瘤转化过程的影响。3 观察并检测肿瘤生 物学特性，为更多的卵巢肿瘤研究建立可靠稳定的肿瘤细胞模型，为临床卵巢恶 性肿瘤的早期诊断提供实验基础和理论依据。 2 山尔人学博十学位论文 第一部分 通过逆转录病毒介导将H E R 2 n e u 基因导入永生化人类 卵巢肿瘤前细
13、胞系 【研究目的】 构建表达H E R 2 n e u 基因的逆转录病毒，将逆转录病毒感染两个永生化的人 卵巢上皮肿瘤前细胞系T 2 9 、T 8 0 ，经过药物筛选获得稳定过表达H E R 2 n e u 基因 的T 2 9 N 、T 8 0 N 永生化细胞系。观察稳定过表达H E R 2 n e u 基因的T 2 9 N 、T S O N 细 胞株形态特征，并通过软琼脂实验检测细胞进行活体外探测评价和定量分析细胞 纯系化集落生长的潜力和生物学特性。 【研究方法】 1 将带有H E R 2 n e u 基因的p B a b e H E R 2 n e u n e o m y c i n 质粒转染P h o e n i x a m p h o t r o p i c 包装细胞，获得带有目的基因的重组载体病毒上清。 2 用带H E R 2 n e u 基因的逆转录病毒感染两个永生化的人类卵巢表面上皮 肿瘤前细胞系T
