三氧化二砷对bcrabl耐药突变细胞株抑制作用及其作用机制

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1、C l a s s i f i e dI n d e x :Q 7 8 U D C : D i s s e r t a t i o nf o rt h eM a s t e r SD e g r e e I N H I BI T I O NO FA R SE N I CT I U O X I D EI N BC R A B LM U T A N T C E L LSA N DT H E M E C H A N I S M C a n d i d a t e : S u p e r v i s o r : A c a d e m i cD e g r e e A p p l i e df o r

2、 : S p e c i a l i t y : D a t eo fO r a lE x a m i n a t i o n : U n i v e r s i t y : J i n h u aL i u P r o f D e s h a nL i M a s t e ro fS c i e n c e M i c r o b i o l o g y M a y , 2 0 1 0 N o r t h e a s t A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y 1 目录 j 1 ll lIII I III I I ! f i l l lI l l

3、 f l l l Y 17 8 7 3 6 0 、目录 中文摘要I 英文摘要i 1 引言1 1 1C M L 传统治疗3 1 2C M L 的治疗现状4 1 2 1 酪氨酸激酶抑制剂的靶向治疗。4 1 2 2 异基因造血干细胞移植11 1 2 3 其他能克服I m a t i n i b 耐药的靶向治疗1 2 1 2 4 三氧化二砷1 3 1 3 前景展望1 7 1 4 研究的目的与意义1 7 2 材料19 2 1 细胞株19 2 2 培养基及生化试剂1 9 2 3 主要仪器和设备1 9 2 4 抗体2 0 2 5 实时荧光定量P C R 引物及试剂盒2 0 3 方法2 1 3 1 细胞培养2

4、 l 3 1 1 细胞复苏2 l 3 1 2 细胞传代2 l 3 1 3 细胞冻存2l 3 2 台盼蓝拒染法测定细胞存活率2 2 3 2 1 台盼蓝拒染法检测细胞对I M 的敏感性2 2 3 2 2 台盼蓝拒染法检测细胞对A T O 的敏感性2 3 3 3R e a lt i m eP C R 法检测A T O 作用于细胞后细胞内B c r - A b lm R N A 水平的变化2 4 3 3 1K 5 6 2 、K 5 6 2 R 、K B M 5 、K B M 5 R 总R N A 的提取2 4 3 3 2K 5 6 2 、K 5 6 2 R 、K B M 5 、K B M 5 Rm R

5、 N A 的制备一2 4 3 3 3K 5 6 2 、K 5 6 2 R 、K B M 5 、K B M 5 Re D N A 的合成2 5 3 3 4 实时荧光定量P C R 分析A T O 作用细胞后B c r - A b lm R N A 水平的变化2 5 3 4W e s t e r nb l o t 法检测A T O 作用于细胞后B c r - A b l 蛋白水平的变化2 6 3 4 1K 5 6 2 、K 5 6 2 R 、K B M 5 、K B M 5 R 细胞加药处理及蛋白制备2 6 3 4 2 用B r a n d f o r d 法测定K 5 6 2 、K 5 6 2

6、R 、K B M 5 、K B M 5 R 细胞蛋白含量2 7 东北农业人学理学硕- f - 学位论文 3 4 3W e s t e r nb l o t 法检测A T O 作用于K 5 6 2 、K 5 6 2 R 、K B M 5 、K B M 5 R 细胞后B c r - A b l 蛋白的水平2 7 3 5D T N B 比色法测定细胞内谷胱甘肽含量2 8 3 6 台盼蓝拒染法检测B S O 在A T O 抑制细胞生长中的作用2 9 3 7A n n e x i nV 标记检测细胞凋亡2 9 3 8 统计学处理2 9 4 结果3 0 4 1 台盼蓝拒染法检测各细胞株对I M 的敏感性3

7、 0 4 1 1 台盼蓝拒染法检测K 5 6 2 、K 5 6 2 R 株对I M 的敏感性3 0 4 1 2 台盼蓝拒染法检测K B M 5 、K B M 5 R 株对I M 的敏感性3 1 4 1 3 台盼蓝拒染法检测3 2 D p 2 1 0 等细胞株对I M 的敏感性3 2 4 1 4 台盼蓝拒染法检测A T O 对K 5 6 2 、K 5 6 2 R 细胞株的生长抑制作用3 5 4 。1 5 台盼蓝拒染法检测A T O 对K B M 5 、K B M 5 R 细胞株的生长抑制作用3 6 4 1 6 台盼蓝拒染法检测A T O 对3 2 D p 2 1 0 等细胞株的生长抑制作用3 7

8、 4 2A T O 作用于K 5 6 2 、K 5 6 2 R 、K B M 5 、K B M 5 R 细胞株后细胞内B e r - A b lm R N A 水平的变 化3 9 4 2 1e D N A 的合成3 9 4 2 2 检测A T O 对K 5 6 2 、K 5 6 2 R 细胞B c r - A b lm R N A 水平的影响一3 9 4 2 3 检测A T O 对K B M 5 、K B M 5 R 细胞B c r - A b lm R N A 水平的影响4 0 4 3W e s t e r nb l o t 法检测A T O 作用于K 5 6 2 、K 5 6 2 R 、K

9、 B M 5 、K B M 5 R 细胞后B c r - A b l 蛋白 水平的变化4 1 4 3 1B r a n d f o r d 法测蛋白浓度4 1 4 3 2W e s t e r nb l o t 法检测A T O 作用于K 5 6 2 、K 5 6 2 R 细胞后B e r - A b l 蛋白水平的变化4 2 4 3 3W e s t e r nb l o t 法检测A T O 作用于K B M 5 、K B M 5 R 细胞后B e r - A b l 蛋白水平的变化 4 :; 4 4B c r - A b l 野生型和耐药型细胞内G S H 含量4 4 4 5 检测B S

10、 O 对A T O 作用效果的影响4 5 4 5 1 台盼蓝拒染法检测B S O 对A T O 作用效果的影响4 5 4 5 2A n n e x i nV 标记检测细胞凋亡4 8 5 讨论5 0 5 1C M L 遗传学特点5 0 5 2 伊马替尼耐药5 0 5 3 三氧化二砷诱导细胞凋亡5 2 5 4 三氧化二砷诱导细胞凋亡机理5 3 6 结论5 6 致谢! ;7 参考文献5 8 附录A 6 6 要茎昙:“= := := := := 6 7 攻读硕士学位期间发表的学术论文二二二二二二二二二茹 - l L 丫 东北农业大学理学硕士学位论文 C O N T E N T S C h i n e s eA b s t r a c t I E n g l i s hA b s t r a c t i 1I n t r o d u c t i o n

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