《洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子tlr4和nfκb表达的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子tlr4和nfκb表达的影响（56页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、华中科技大学 硕士学位论文 洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子 TLR4和NF-B表达的影响 姓名：向曦 申请学位级别：硕士 专业：中西医结合临床 指导教师：陈琢 2011-05 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 1 洁泽洁泽 1 号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因 子 号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因 子 TLR4 和和 NF-B 表达的影响表达的影响 中中 文文 摘摘 要要 第一部分：洁泽第一部分：洁泽 1 号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附 率的影响 号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附
2、 率的影响 目的：目的： 观察中药复方洁泽 1 号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响。进一 步明确洁泽 1 号防治外阴阴道假丝酵母菌病可能的作用机制。 方法：方法： 设置模型组、12.5mg/ml 洁泽 1 号组、5umol/L 小檗碱组、3mg/ml 甘露聚糖组 和 5mmol/L 高碘酸组。将人阴道上皮细胞（VK2/E6E7）以不同药物的处理相应时 间，即洁泽 1 号与细胞共孵育 72 小时、小檗碱与细胞共孵育 48 小时、甘露聚糖 与细胞共孵育 2 小时、高碘酸与细胞共孵育 10 分钟后，给予已标记 FITC 的白色 念珠菌室温下避光摇床共孵育 2 小时。MTT 法检测洁泽 1 号
3、及小檗碱的药物细胞 毒性、流式细胞术检测白色念珠菌与阴道上皮细胞的粘附率。 结果：结果： 1、 洁泽 1 号、小檗碱对 VK2/E6E7 细胞的药物毒性： MTT 法检测药物的细胞毒性，结果：洁泽 1 号对 VK2/E6E7 细胞的 IC50为 100.8279mg/ml，IC20为 36.0579mg/ml。小檗碱对 VK2/E6E7 细胞的 IC50为 21.2164umol/L, IC2010.696umol/L。 2、 洁泽 1 号对白色念珠菌与上皮细胞粘附率的影响： 阴道上皮细胞与白色念珠菌孵育 2 小时后，流式细胞术检测法检测白色念珠 菌与 VK2/E6E7 细胞的粘附率：模型组粘
4、附率为(24.5768+1.575)%；甘露聚糖组粘 附率为(7.2167+0.3667)%；高碘酸组粘附率为(22.7767+2.3034)%， ；洁泽 1 号粘附 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 2 率为(11.05+0.3897)%，小檗碱组粘附率为(12.4667+1.266)%。洁泽 1 号组、小檗碱 组较模型组 VK2/E6E7 细胞与白念菌粘附率下降，结果有统计学意义（p0.05） ， 较甘露糖组粘附率增高，结果有统计学意义（p0.05） ，甘露糖组较模型组粘附率 下降， 结果有统计学意义 （p0.05） 。 结论：
5、结论： 中药复方洁泽 1 号能减少白色念珠菌与宿主细胞，即 VK2/E6E7 的粘附，增 强阴道上皮细胞抵抗念珠菌入侵的能力。 关键词：关键词：洁泽 1 号；人阴道上皮细胞；白色念珠菌；粘附。 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 3 第二部分：洁泽 1 号对阴道上皮细胞天然免疫因子 TLR4 及 NF-B 表达的影响 第二部分：洁泽 1 号对阴道上皮细胞天然免疫因子 TLR4 及 NF-B 表达的影响 目的：目的： 研究洁泽 1 号对经白色念珠菌刺激后的阴道上皮细胞， 其天然免疫因子 TLR4 及 NF-B 表达的影响，探讨洁泽 1
6、号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌感染的部分 天然免疫机制。 方法：方法： 设置空白对照组、 模型组、 12.5mg/ml 洁泽 1 号组、 5umol/L 小檗碱组、 3mg/ml 甘露聚糖组和 5mmol/L 高碘酸组。将人阴道上皮细胞与白色念珠菌热灭活孢子 37共培养 12 小时后，与药物共孵育相应时间。免疫荧光技术观察 TLR4 在胞浆 的表达时间以及 NF-B 由胞浆进入胞核的时间，Western-blotting 技术检测经白色 念珠菌刺激后阴道上皮细胞 TLR4 的表达及 NF-B 在细胞核内的表达。 结果：结果： 1、 TLR4 在细胞浆及 NF-B 由胞浆进入胞核的时序变化 予白
7、色念珠菌热灭活孢子与阴道上皮细胞 37共培养，激光共聚焦显微镜观 察可见：共培养 2 小时后，TLR4 开始表达，4 小时、6 小时后 TLR4 表达逐渐增 多，12 小时表达达到高峰，24 小时表达开始回落。NF-B 亦以同样的时间趋势进 入细胞核内。 即白色念珠菌与细胞共培养 12 小时为 TLR4 与 NF-B 的表达高峰的 时相。 2、 白色念珠菌刺激后各组 VK2/E6E7 细胞 TLR4 及 NF-B 的表达 在 TLR4 的表达上，模型组与正常组相比，TLR4 表达增多，结果有极显著统 计学意义 （P0.05） ； 洁泽 1 号组、 小檗碱组、 高碘酸组较模型组减少， 均有极显著
8、统计学意义 （P0.01） 。 在 NF-B 的表达上，模型组与正常组相比，NF-B 表达增多，结果有极显著 统计学意义（P0.01） 。高碘酸组、洁泽 1 号组、小檗碱较模型组 NF-B 表达减少， 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 4 结果均有极显著统计学意义（P0.01） ；甘露糖组较模型组 NF-B 表达增多，其结 果有统计学意义（P0.05） 。 结论结论: 洁泽 1 号下调感染白色念珠菌后 VK2/E6E7 细胞天然免疫因子 TLR4 的表达、 减少细胞内 NF-B 的激活，可能因此导致其下游炎性因子分泌减少，起到阻止急
9、 性炎症反应的作用。 关键词：关键词：天然免疫；Toll 样受体；NF-B；白色念珠菌；阴道上皮细胞。 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 5 JieZeNO.1 Modify the Adhesion of Vaginal Epithelial Cells-Candida Albicans and the Expression of Innate Immune Factors TLR4/NF-B Part One: The Effects of JieZe NO.1 on Adhesion of Vaginal Epithelial
10、 Cells and Candida Albicans Abstract Objective: Observing the effect of JieZe NO.1 on the adhesion between vaginal epithelial cells and Candida albicans cells; Demonstrating the possible mechinsm of the drug to treat Candidal albicans Vaginitis. Methods: There are five groups: model control, 12.5mg/
11、ml JieZe NO.1 control, 5umol/L bererine control, 3mg/ml mannan control, 5mmol/L periodic control. In order to demonstrate and better unserstand the anti-Candida activity of the probiotic microorganisms in an in vitro model simulating vaginal candidiasis, a human vaginal epithelial cell lines(VK2/E6E
12、7) was infected with C. albicans(ATCC90028) after challenged by medcines. At proper time points, the adheresion will be tested by Flow Cytometry. Results： 1. The impact of drugs on cells. The impact of drugs on cells were studied by MTT assey. The IC50 of JieZe NO.1 on VK2/E6E7 was 100.8279mg/ml and
13、 the IC20 was 36.0579mg/ml; The IC50 of bererine 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 6 on VK2/E6E7 was 21.2164umol/L and the IC20 was 10.696umol/L。 2. The effects of JieZe NO.1 on the ability of vaginal epithelial cells to bind Candida albican cells. The adhesion were studied by flow cyt
14、ometric analysis. And the adhesion of JieZe NO.1 control and mannose control produced a significant decrease in the number of vaginal epithelial cells that bound FITC-positive Candida compared with model control (11.05+0.3897% and 7.2163+0.3667% VS 24.5767+1.575%), p0.05. Conclusion: JieZe NO.1 prod
15、uced a significant decrease the adhesion between VK2/E6E7 and Candida Albicans, which demonstrated that the drug can inhance the ability of VK2/E6E7 against Candida Albicans. Keywords: JieZe NO.1; human vaginal epithelial cells; Candida Albicans; adhesion. 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位
16、 论 文 7 Part Two: The Effects of JieZe NO.1 on the Expression of Innate Immune Factors TLR4 and NF-B Abstract Objective: Observing the effect of JieZe NO.1 on the expression of TLR4 and NF-B after stimulated by Candida cells. To demonstrate the effects of this drug on partly molecular mechnism of innate immune responses about vaginal epithelial cells against Candida Albicans. Methods: There are six groups: normal control, model control, 12.5mg/ml JieZe NO.1 control, 5
