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1、血清总蛋白测定,学 习 要 求,了解血清总蛋白的测定方法,假定： 1、所有蛋白质都是单纯的多肽链，糖脂类和金属有机物等不计在内，含氮量平均为16%。 2、各种蛋白质与化学试剂的反应性一致。,血清总蛋白的测定方法,三聚氰胺化学式：C3N6H6，分子量：126。含氮量达66%，加入假奶粉后，会使假奶粉总体含氮量升高，达到国家标准。,毒奶粉事件三聚氰胺,氨基黑、丽春红、考马斯亮兰,白蛋白常用溴甲酚绿或溴甲酚紫等染料结合法测定。,血清TP常用双缩脲法测定，凯氏定氮法可作为血清总蛋白二级标准品的定值方法。其他方法可用于尿液、脑脊液、胸腹腔积液、组织提取液、纯化蛋白等样品中TP的测定。 本实验采用双缩脲法
2、测定血清中总蛋白含量。,实验原理,试剂与器材,试剂与标本 1、6 mol/L NaOH 溶液 2、双缩脲试剂（硫酸铜结晶、酒石酸钠钾、碘化钾） 3、双缩脲空白试剂 4、6070 g/L 蛋白质标准液 5、血清,主要器材 分光光度计,操作步骤,混匀后于37水浴15 min，以蒸馏水调零，540 nm处测定各管吸光度。 标准液浓度：70.0g/L。,结果计算,标准液浓度,参考区间,正常成人血清总蛋白浓度： 立位行走：6483 g/L 静 卧： 6078 g/L 新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月上升，1年后达成人水平。,临床意义,血清TP浓度下降： 常见于血清白蛋白含量下降，少数由免疫球蛋白含量的明显下降引起；其他血清蛋白质减少，一般不能在TP浓度中得到反映。,血清TP浓度增高： 主要见于慢性炎症等所致的多克隆免疫球蛋白增多，以及浆细胞病时单克隆免疫球蛋白的显著增多。,注意事项,双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是结合铜离子，维持铜离子在碱性溶液中的溶解度，加入碘化钾可以防止铜离子自动还原成一价氧化铜沉淀。 黄疸、严重溶血、葡萄糖、酚酞、磺溴酞钠、硫酸铵、Tris及部分氨基酸对本法有明显干扰，可设标本空白管来消除。 严重脂浊会干扰比色。 本法可用于血清总蛋白浓度的标化。,
