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1、第十四章 维生素类药物的分析,概 述,维生素维持正常生理功能所必需的、微量营养物质，人体不能合成维生素。必须从外界食物中摄取。,维生素的发现是20世纪的伟大发现之一。1897年,C.艾克曼在爪哇发现只吃精磨的白米即可患脚气病，未经碾磨的糙米能治疗这种病。并发现可治脚气病的物质能用水或酒精提取,当时称这种物质为“水溶性B”。,Christiaan Eijkman 1929 诺贝尔生物医学奖,The Discovery of Vitamin,发现简史,必需维生素 13种,维生素A，维生素B，维生素C，维生素D，维生素E，维生素K，维生素H（生物素），维生素P，维生素PP，维生素M，维生素T，维生素
2、U，水溶性维生素。,分类,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,维生素A的简介,是鱼类肝脏中提取的一种不饱和脂肪醇，又称鱼肝油。目前主要采用人工合成。,在体内以视黄醇的形式储存，缺乏会影响视色素的合成，导致夜盲症，视力减退。,第一节 维生素A的分析,全反式,第一节 维生素A的分析,结构,共轭多烯醇侧链的环己烯,黄色棱形，62-64 ,淡黄色棱形，57-58,无定型，28-29,去氢维生素 VitA2,去水维生素 VitA3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,第一节 维生素A的分析,溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 不稳定性：含有多个不
3、饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。,第一节 维生素A的分析,性质,紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大吸收，可用于鉴别。,第一节 维生素A的分析,第一节 维生素A的分析,天然维生素A主要是反式,CHCl3,可用于鉴别和含量测定,与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳定的蓝色,与三氯化锑呈色反应,第一节 维生素A的分析,鉴别实验,（一）Carr-Price反应,蓝色,紫红,第一节 维生素A的分析,条件： 无水、无醇,SbCl3,水,SbOCl,乙醇可使碳正离子的正电荷消失,第一节 维生素A的分
4、析,要求仪器和试剂必须干燥无水， 三氯甲烷必须无醇,第一节 维生素A的分析,max为326nm 一个吸收峰,max为350390nm 三个吸收峰,五个共轭双键,六个共轭双键,最大吸收峰红移,（二）UV法,第一节 维生素A的分析,第一节 维生素A的分析,维生素A在无水乙醇溶液中溶解,立即进行UV扫描,在360nm处有一最大吸收峰. 当盐酸水浴加热30s,迅速冷却,此过程发生脱水反应,扫描时出现三个吸收峰,USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,BP 对照品法 显色剂 三氯化锑,（三）TLC法,第一节 维生素A的分析,展开剂： 环己烷-乙醚（80：20）,均显蓝色斑点，维生素醇（ Rf= 0
5、.1） 维生素醋酸酯（ Rf= 0.45） 维生素棕榈酸酯（ Rf= 0.7）,酸值,取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大于2.0（附录VIIH）,杂质检查,过氧化值,取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）不得过1.5m
6、l。,杂质检查,第一节 维生素A的分析,含量测定,（一）UV法（三点校正法）,第一节 维生素A的分析,维生素A在325328nm的波长范围内有最大吸收，可用紫外法进行含量测定但维生素A原料常混有杂质如：,第一节 维生素A的分析,维生素A的氧化产物,第一节 维生素A的分析,维生素A在光照下产生的无活性的聚合物,第一节 维生素A的分析,第一节 维生素A的分析,第一节 维生素A的分析,测定对象：VitA醋酸酯时，ChP2015规定,第一法 等波长差法,第一节 维生素A的分析,第二法 等吸收比法,测定对象： VitA醇时，ChP2015规定,第一节 维生素A的分析,合成的或天然的维生素A 均为酯式维生
7、素A，根据供试品中干扰杂质的多少，可采用： （1）直接测定法 （2）皂化法,第一节 维生素A的分析,求,求效价,（1）基本步骤,4. 测定方法,A选择，A328测定或A328校正,求标示百分含量,（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定） 1）方法 取样品适量，精密称定，加环己烷溶解 在300、316、328、340、360nm测吸收度，以确定最大吸收波长（ A328或A328校正）。,第一节 维生素A的分析,b.判断法 最大吸收波长在326-329nm之间，且5个波长下的绝对值差值均不超过0.02时，可直接用328nm波长处的测得的吸收度值求得吸收系数。,a.计算吸收度比
8、值（Ai/A328）：与中国药典的吸收度比值相比较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02。,第一节 维生素A的分析,最大吸收波长在326-329nm之间，计算5个波长下的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应按以下的方法进行判断：,A328校正=3.52（2 A328 A316-A340）,第一节 维生素A的分析,（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定） 1）方法 取样品适量，精密称定，加环己烷溶解 在300、316、328、340、 360nm测吸收度， 确定A 2）计算 a.吸光系数E1%1cm,第一节 维生素A的分析,b.求效价（IU/g）：效价指每g供试品所含
9、维生素的A的国际单位数。,第一节 维生素A的分析,1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯,IU/g=,第一节 维生素A的分析,每克纯品相当多少个单位（IU）?,1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯,第一节 维生素A的分析,第一节 维生素A的分析,c.求维生素A占标示量的百分含量,AA328或A328校正 D供试品的稀释倍数 换算因子维生素A醋酸酯在环己烷中1900； 维生素A醇在异丙醇中1830 W为平均内容物重量；W为称取内容物重量（供试品取用量） L 比色池厚度 标示量为处方中规定的每粒中所含的国际单位数,第一节 维生素A的分析,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格
10、10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,第一节 维生素A的分析,A300 ：0.354 A316 ：0.561 A328 ：0.628 A340 ：0.523 A360 ：0.216,A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328 ：0.29
11、9,求本品中维生素A的含量？,第一节 维生素A的分析,A300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833 A360/A328 ：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+ 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04, ,= = = = =,第一节 维生素A的分析,第一节 维生素A的分析,适用于维生素A醇,（等吸收比法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法, 皂化法、6/7A法 ,（2）第二法,第一节 维生素A的分析,水溶性,脂溶性,第一节 维生素A的分析,判断max是否在3
12、23327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,第一节 维生素A的分析,判断 A300 /A325 是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算A325(校正),0,3%,3%,f,第一节 维生素A的分析,高效液相色谱法,流动相：正己烷异丙醇（9973） 检测波长：325nm 系统适用性实验考察分离度 是否能将维生素A醋酸酯顺式和反式分开,第一节 维生素A的分析,三氯化锑比色法,max 618nm620nm,标准曲线法,第一节 维生素A的分析,优点： 简便 快速,第一节 维生素A的分析,小结,维生素A共轭多烯醇侧链的环乙烯 性质：脂溶性；不稳定，可与
13、三氯化锑呈色 鉴别：三氯化锑反应；UV；TLC 含量测定： 紫外-分光光度法（三点校正） 三氯化锑比色法,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。,第一节 维生素B1的分析,氨基嘧啶环,噻唑环,亚甲基,氯化4-甲基-3(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基-5-（2-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐,结构与性质,维生素B1（盐酸硫胺）,第二节 维生素B1的分析,结构与性质,维生素B1为白色结晶或结晶性粉末 易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚 水溶液呈酸性
14、,1. 溶解性,性质,噻唑环、嘧啶环共轭双键 12.5g/ml盐酸溶液（9 1000）,max = 246nm,2.硫色素荧光反应,3.UV,杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。,4.与生物碱沉淀试剂反应,5.氯化物的特性,与NaOH共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑色沉淀；,6.硫元素反应,7.红外光谱特征,二、鉴别试验,（一）硫色素荧光反应为维生素B1所特有,H2O,溶于丁醇，显蓝色荧光,维生素B1,VitB1,H+,H+,H+,沉淀反应,H+,S元素反应,Cl-反应,硫元素反应和氯化物反应,H+,Company Logo,三、含量测定,高氯酸滴
15、定液（0.1mol/L）的滴定度(T)为16.86mg/ml。 喹那啶红亚甲蓝 (紫红天蓝),非水溶液滴定法,紫外分光光度法,维生素B1分子中具有共轭双键，在紫外区有吸收,注意,维生素B1片的测定,片剂、注射剂,= 421,（每片）相当于标示量的%=,A = ECL,ChP,1,1,（每ml）相当于标示量的,NaOH,硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应,2. 方法,小结,维生素B1（盐酸硫胺）氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成季铵盐。 性质：水溶性；硫色素反应；可与生物碱沉淀剂反应 鉴别：硫色素反应；沉淀反应；Cl、S反应 含量测定：非水滴定；紫外分光光度法； 硫色素荧光法,A,B1,C,
16、D,E,Vitamins,Contents,第三节 维生素C的分析,维生素C是胶原蛋白形成所必需的，有助于保持间质的完整，维生素C 缺乏可导致齿龈肿胀，出血，皮下瘀点，关节及肌肉疼痛，毛囊角化，严重缺乏可引起坏血病。所以维生素C又称为抗坏血酸。,L-抗坏血酸,(有生物活性),L-二酮古罗糖酸,L-去氢抗坏血酸,无生物活性,第三节 维生素C的分析,结构与性质,C3OH的 pKa = 4.17,C2OH的 pKa = 11.57,2.酸性,一元酸,性质,1. 溶解性,易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶于三氯甲烷或乙醚,L(+)抗坏血酸 活性最强 比旋度+20.5+21.5,手性C（C4、C5）,3. 旋光性,*,*,含有四个光学异构体
