《异种mmp2+dna疫苗联合小剂量化疗治疗肿瘤转移的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《异种mmp2+dna疫苗联合小剂量化疗治疗肿瘤转移的实验研究（87页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、四川大学 博士学位论文 异种MMP-2 DNA疫苗联合小剂量化疗治疗肿瘤转移的实验研究 姓名：陈兢 申请学位级别：博士 专业：肿瘤学 指导教师：魏于全 20040428 异种MMP - 2 D N A疫苗联合小剂量化疗 治疗肿瘤转移的实验研究 研究生陈兢 导师魏于全 教授 中 文 摘 要 基质金属蛋白 酶( M a t ri x m e ta l l o p r o t e in a s e s , M M P s ) 家族， 特别是 其中的 基 质金属蛋白 酶- 2 ( M a t r ix m e t a l l o p r o t e i n a s e - 2 , M M P - 2
2、) ， 降 解细 胞外基质 (ex tr a c e l l u l a r m a t ri x， E C M) ，引起邻近正常基质破坏，在恶 性肿瘤转移的发生发展过程中扮演着重要角色。 我们通过主动免疫的方 法， 用异种MMP - 2 D N A疫苗打破对自身MMP - 2 的免疫耐受， 并联合 小剂量的抗肿瘤化疗药，以达到抗恶性肿瘤转移的目的。 本实验我们构 建了编码与人类及鼠类MMP - 2高度同源的鸟类 MMP - 2分子的表达质 粒作为D N A疫苗 ( c - MM P - 2 ) 联合小剂量的顺铂( D D P ) 治疗小鼠( 6 - to 8 - w e e k s o f
3、a g e f e m a l e B A L B / c m i c e ) 结 肠 癌 肺 转 移。 实 验发 现， c - M M P - 2 D N A疫苗和小剂量的顺铂联合治疗组在结 肠癌肺转 移模型中 产生了显著的抗肿瘤转移效果， 表现为联合治疗组肺部肿瘤转移灶明显 少于对照组， 肺的重量明显小于对照组， 同时联合组小鼠生存期显著长 于对照组。 免疫组化显示联合治疗组肿瘤组织中新生血管密度显著低于 对照组。T U N E L法检测肿瘤细胞凋亡结果显示联合治疗组肿瘤细胞凋 亡率显著高于对照组。E L I S A 法检测结果显示 。 - MMP - 2治疗组和 c - MMP - 2
4、联合 D D P 组治疗组小鼠血清中有针对MMP - 2 的自 身反应性抗 体，且c - M M P - 2引 起的抗体产生以I g G I 和 I g G 2 b 为主。同时，过继 性免疫结果也显示含有抗MM P - 2 抗体的血清联合小剂量顺铂的治疗组 小鼠生存期显著长于对照组。上述结果表明异种 M MP - 2 D N A疫苗与 小剂量的顺铂联合治疗恶性肿瘤转移有协同抗肿瘤转移作用。 该项研究 初步表明使用异种 M MP - 2 D N A疫苗产生自 身抗体并联合小剂量的抗 肿瘤化疗药为治疗恶性肿瘤转移提供一重要的策略。 关键词:基质金属蛋白 酶一 2 ，小剂量顺铂，免疫治疗，化疗，肿瘤
5、 转移 Ab s t r a c t M a t r ix M e t a l lo p r o t e i n a s e ( M M P 2 ) , in p a r tic u l a r M M P - 2 , in d u c e d in th e a d j a c e n t n o r m a l s t r o m a a r e n e c e s s a ry f o r t h e d e g r a d a t io n o f e x t r a c e l l u l a r m a t r i x ( E C M ) e s s e n t i a l f o
6、 r c a n c e r m e t a s t as i s . T h e b r e a k in g o f i m m u n e t o l e r a n c e o f MMP - 2 c o m b in e d l o w - d o s e c h e m o t h e r a p y s h o u l d b e a n a p p r o a c h t o t r e a t m e n t c a n c e r m e t as t as i s b y a c t i v e i m m u n i t y a n d c h e m o t h e
7、r a p y . F o r t e s t t h i s c o n c e p t , w e c o n s t r u c t e d a p l a s m i d D N A e n c o d i n g c h i c k e n h o m o l o g o u s MM P - 2 ( c - M MP - 2 ) , c o m b i n a t i o n t h e r a p y w i t h l o w - d o s e c i s p l a t i n ( D D P ) . I n t h i s e x p e r i m e n t , l
8、u n g m e t a s t a s i s o f m u r i n e c o l o n A d e n c a r c i n o m a ( C 2 6 ) i n t u m o r m o d e l w e r e e s t a b l i s h e d i n 6 - t o 8 - w e e k s o f a g e f e m a l e B A L B I c m i c e , a n d t h e n t re a t e d w it h 0 .9 % N a C L s o l u t i o n ( N S ) , D D P , c - M
9、MP - 2 , o r c - MMP - 2 c o m b i n e d D D P . We f o u n d t h a t b o t h c - MMP - 2 a n d l o w - d o s e D D P t r e a t m e n t i n d i v i d u a l l y r e s u l t e d i n c a n c e r m e t as t asi s i n h i b i t i o n t o cer t a i n e x t e n t . R e m a r k a b l y , c o m b i n a t i o
10、 n t h e r a p y r e s u lt e d i n s i g n i fi c a n t l y d e c r e as e d th e n u m b e r o f l u n g s u r f a c e m e t a s t a s is n o d u l e s , m a r k e d l y d e c r e a s e d l u n g s o f w e i g h t , a n d p r o lo n g a t i o n o f t h e s u r v i v a l o f t u m o r - b e a r i n
11、 g . l m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n in g o f t h e t u m o r s d e m o n s t r a t e d a n o b v i o u s l y d e c r e as e d n u m b e r o f b l o o d v e s s e l s in c o m b i n a t i o n t r e a t m e n t g r o u p c o m p a r e d w i t h o t h e r g r o u p s , w h e r e as t e
12、 r m i n a l d e o x y n u c l e o t i d y l t r a n s f e r a s e - m e d i a t e d n i c k e n d l a b e l in g ( T U N E L ) s h o w e d a s ig n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i n m i c e o f t u m o r c e l l s a p o p t o s i s i n c o m b i n a t i o n t r e a t m e n t g r o u p . A u t
13、 o a n t i b o d i e s a g a in s t MM P - 2 i n s e r u m o f m i c e i m m u n iz e d w i t h c - MMP - 2 a n d c - M MP - 2 c o m b i n e d D D P a r e f o u n d b y e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s p o t a s s a y ( E L I S A ) , c - M M P - 2 g r o u p a n d c - M M P - 2 c o m b i n e d
14、 D D P g r o u p a l o n e i s a p p a r e n t l y i n c r e a s e d i n I g G I a n d I g G 2 b . A t t h e s a m e t i m e , a d o p t i v e i m mu n i t y a l s o d e m o n s t r a t e d c o m b in a t i o n t h e r a p y r e s u lt e d i n o b v i o u s p r o l o n g a t i o n s u r v i v a l o
15、f m i c e - b e a r i n g . T h u s t h e c o mb i n a t i o n o f c - MMP - 2 a n d l o w- d o s e DDP r e s u l t e d a n a d d i t i v e e f f e c t o f a n t i m e t a s t a s i s . T h e o b s e r v a t i o n m a y p r o v i d e a n i m p o rt a n t s t r a t e g y f o r t r e a t me n t c a n
16、c e r me t a s t a s i s . K . c h e mo t h w o r d s : m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e - 2 , lo w - D D P , i m m u n o t h e r a p y , me t a s t a s i s N il舌 恶性肿瘤患者大多死于转移， 侵袭及转移是癌细胞重要的生物学特 性，治疗恶性肿瘤的侵袭及转移是许多学者关注的热点。传统的治疗， 例如手术治疗、 放射治疗、化学治疗治疗恶性肿瘤转移都很局限 ( 1 . 理想的治疗恶性肿瘤转移方法应是系统地、全面地消灭恶性肿瘤细胞 11 。 关于这一点，主动免疫治疗联合小剂量化疗是很有吸引力的，因 为 它能较彻底地根除肿瘤细胞。 完善的细胞外基质和基底膜可以限制肿瘤细胞的侵袭和转移， 在组 织学上，基底膜完整性的破坏被认为是恶性肿瘤侵袭开始的一个标志。 肿瘤的转移是一个复杂的过程， 肿瘤细胞从原发灶脱离， 穿越基底膜及 细胞外基质， 侵润迁移并进入血管， 粘附于血管内皮， 进入循环系统并 随血流到达远
