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1、学校代码t1 0 6 1 0 学号：B 幢0 6 8 9 四川大学 临床医学博士专业学位论文 喉鳞状细胞癌患者组织 题目盈查煎虫盟蕉佳Q 丛罢垩啦匠宜 作 者L 废_ 奢L 一 学科专业里晨嗵嚏整兰 指导教师臣益j 蔓越撞一 声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外， 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四 川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导
2、下取得的， 论文成果归四川大学所有，特此声明。 申请人：t 橡 特缆 四川大学临床医学博士专业学位论文 喉鳞状细胞癌患者组织及 血液中线粒体D M 突变的研究 研究生：古庆家 导师：粱传余教授 摘要 背景：喉鳞状细胞癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一。迄今为止， 喉鳞状细胞癌仍是一跨世纪的医学难题。人们在基础研究和临床实践方 面面临两大问题：喉鳞状细胞癌发病机理的研究尚无重大突破；喉 鳞状细胞癌的发病率及死亡率逐年上升。肿瘤发生的研究主要集中于核 基因突变，但近年来，作为高等动物细胞内唯一的核外D N A 一线粒体 D N A ( m i t o c h o n d r i a lD N A ，m
3、 t D N A ) 突变在肿瘤发生中的作用也逐渐受 到关注。随着对线粒体及其D N A 研究的曰益深入，人们发现线粒体结构 和功能的改变以及m t D N A 突变不仅与多种疾病的发生有关，而且在肿 瘤发生过程中也可能起着重要的作用，并有学者提出多种线粒体致癌假 说。 目的：本研究的目的是探讨在喉鳞状细胞癌组织中m t D N A 的突变及 其在肿瘤发生、发展中的作用。 方法：提取我科2 0 0 2 年9 月- - 2 0 0 4 年6 月间收治的5 4 例喉鳞状细胞癌 标本( 观察组) ，并同时收集同一患者的距肿瘤1 c m 以上正常黏膜( 由病 理切片确诊，作为对照组) 和外周血清标本作
4、为对照，经P C R 产物扩增 直接测序法测定m t D N A 序列，确定喉鳞状细胞癌组织的m t D N A 突变。 结果；总共分析了5 4 例喉鳞状细胞癌患者的标本，在3 2 例( 6 0 ) 喉 四川大学临床医学博士专业学位论文 鳞状细胞癌组织中总共发现Y 6 8 个m t D N A 突变；包括点突变4 6 个，插入 突变1 3 个，缺失突变9 个。其中所有的插入突变和缺失突变均发生在 D 1 0 0 p 又的重复序列中；所有的点突变均为T C 或G A 间的碱基置换。 在这些突变中，主要为同质性突变( h o m o p l a s m i cm u t a t i o n s )
5、 ，占突变总数 的8 3 8 ( 5 7 6 8 ) ；异质性突变( h e t e r o p l a s m i cm u t a t i o n s ) 0 占1 6 2 ( 11 6 8 ) 。 检测到的这些突变散在分布予m t D N A 的全长序列中，其中4 3 个突变位于 D 1 0 0 p 区，1 8 个m t D N A 点突变位于多肽编码区，其余7 个点突变发生于 1 6 5 r R N A 、t R N A 编码区和位于C O H 和t R N A L y s i n e 编码区之间的非编码 区。 结论：5 4 例喉鳞状细胞癌患者的标本中，总共在3 2 例( 6 0 )
6、喉鳞 状细胞癌组织中发现T 6 8 个m t D N A 突变，从而证实了同其它肿瘤一样， 喉鳞状细胞癌的发生发展过程中具有高频率的线粒体基因的突变。肿 瘤周围正常粘膜的m t D N A 突变为阴性，说明正常粘膜一般不会发生突 变。在这些突变中，主要为同质性突变( h o m o p l a s m i e m u t a t i o n s ) ，占突 变总数的8 3 8 ( 5 7 6 8 ) ；异质性突变( h e t e r o p l a s m i cm u t a t i o n s ) 则占 1 6 2 f 1 1 6 8 ) 。正常和退行性病变的组织中m t D N A 的
7、突变多为异质性， 而肿瘤多为同质性，即肿瘤组织中几乎所有线粒体基因都有此异常改 变。这和本研究的结论也是一致的。检测到的这些突变散在分布于 m t D N A 的全长序列中，其中4 3 个突变位于D - l o o p 区，1 8 个m t D N A 点突变 位于多肽编码区，其余7 个点突变发生于1 6 5 r R N A 、t R N A 编码区和位于 C O H 和t R N A L y s i n e 编码区之间的非编码区。位于多肽编码区的1 8 个 m t D N A 点突变比较均匀地分布于m t D N A 的多肽编码区，而并没有明显的 高突变区。这说明D 1 0 0 p 区是突变
8、的热点区域，而多肽编码区没有明显 的高突变区。分析m t D N A 突变与喉鳞状细胞癌各项临床病理参数的关 系，结果显示m t D N A 突变与喉鳞状细胞癌的分期密切相关( P = O 0 2 ) ， 2 四川大学临床医学博士专业学位论文 与患者年龄、肿瘤大小及肿瘤分型等无明显关系。说明m t D N A 基因突变 在肿瘤的临床期别和组织学分级之间的差异具有显著性，提：示m t D N A 突 变是喉鳞状细胞癌形成中的一个晚期现象，并持续存在于癌症演变的全 过程。在本实验研究中，我们发现在喉鳞状细胞组织中存在高达6 0 ( 3 2 5 4 ) 的m t D N A 突变率，而且大部分是同质
9、性突变。因而提示，m t D N A 突交有希望成为喉鳞状细胞癌诊断的分子标记，检测m t D N A 突变会提高 肿瘤诊断的灵敏度。并且线粒体可成为某些抗肿瘤药物作用的靶点。 四川太学临床医学博士专业学位论文 S t u d yO H t h em i t o c h o n d r i a lD N Am u t a t i o n si n t u m o rt i s s u e sa n dp e r i p h e r a ll y m p h o c y t e so f l a r y n g e a ls q u a m o u sc e l l c a r c i n o
10、m a P o s t g r a d u a t e G u Q i n g j i a T u t o r P r o f L i a n gC h u a n y u A b s t r a c t B a c k g r o u n dL a r y n g e a ls q u a m o u sc e l lc a r c i n o m ai s t h em o s tC O l n n 2 0 n m a l i 即_ a n tt l l T n o ri nt h eh e a da n dn e c k S of a r , i t sp a t h o g e n e
11、 s i si s ad i f f i c u l t p r o b l e m w h i c hh a ss p a n n e ds e v e rc e n t u r i e s P e o p l ea r ef a c e dw i t ht w o p r o b l e m si nt h ef i e l do fb a s i cr e s e a r c ha n dc l i n i c a lp r a c t i s e F i r s t ，ar e s e a r c h o nt h ep a t h o g e n e s i so fl a r y
12、n g e a ls q u a m o u sc e l lc a r c i n o m ah a sn o ta c h i e v e ac o n s i d e r a b l em e d i c a lb r e a k t h r o u g h S e c o n d ，i t si n c i d e n c ea n dm o r t a l i t y i n c r e a s ey e a rb yy e a r T h er e s e a r c ho nt h et u m o r i g e n e s i si s f o c u s e do n n
13、u c l e a rD N Am u t a t i o n s B u ti nr e c e n ty e a r s ，a t t e n t i o nh a sb e e np a i dt ow h a t t h er o l et h em i t o c h o n d r i a lD N A ( m t D N A ) p l a y si nt h et u m o r i g e n e s i s W i t h t h er e s e a r c ho nm i t o c h o n d r i a la n dm t D N Ai n c r e a s
14、i n g l yd e e p , w eh a v ef o u n d t h a tt h es t r u t u r ea n df u n c t i o na l t e r a t i o no f m i t o c h o n d r i a la n dm t D N A a r en o t o n l yc l o s e l yr e l a t e d t os o m ed e g e n e r a t i v ed i s e a s e s ，b u ta l s op l a y s a l l i m p o r t a n t r o l ei n
15、t h e t u m o r i g e n e s i s T h e r e s e a r c h e r s p r o p o s e dm a n y h y p o t h e s e st h a tm i t o c h o n d r i a lw i l ll e a dt ot u m o r O b j e c t i v eT oi n v e s t i g a t et h ec l i n i c a ls i g n i f i c a n c eo fm t D N A m u t a t i o n si n t u m o rt i s s u e
16、so fl a r y n g e a l s q u a m o u sc e l lc a r c i n o m aa n dt h e i rr o l ei nt h e p a t h o g e n e s i sa n dd e v e l o p m e n t o f t u m o r M e t h o d sm t D N Aw a se x t r a c t e df r o mt h et u n l o rt i s s u e s ，c o r r e s p o n d i n gd i s t a l n o r m a lt i s s u e sa n dp e r i p h e r a ll y m p h o c y t e sd e d v e df r o m5 4p a t i e n t sw i t h 4 四川大学临床医学博士专业学位论文 l a r y n g e a ls q u a m o u sc e l
