罗氏realtime PCR操作指南(Roche LightCycler480)

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1、LightCycler 480 系统快速操作指南一配制好反应体系,封好膜。接通LC480与电脑电源,电脑帐号operator,密码LC480,点击LC480软件,登录帐号user,密码Master1。二开始实验:点击,在列表中选择对应的程序,如H1N1或HBV,点击窗口右下角的,点击软件界面右下角的,输入实验文件名点击窗口右下角的开始实验。三编辑子集:点击subset editor,点击左下角的,按ctrl键的同时鼠标选择本次实验的孔,最后点击应用。注意,一次实验可以同时运行相同扩增参数的多个实验(如H1N1、HIV与HCV),那么可以分别设置多个子集设置样品:先在subset中选择本次实验的

2、子集,点击左上角的,样品输入样品名,再选择标准品类型和浓度或者阳性对照/阴性对照 四数据分析:实验运行完成后进入,选择Abs Quant/Fit Ppoint,在窗口中的Subset(第二行)中选择本次实验的子集,点击软件界面中上方的,在Noise Band中调节noise band高度,使之处于对数增长期并高于所有噪音信号,如右图。再点击进入,点击软件界面中间偏右的自动设置阈值或手工调节阈值(鼠标左键按住拖动或在输入阈值大小),再点击软件界面左下角的,软件左下方出现每个样品的Ct值或浓度值等以及平均值标准误等信息,该部分可以鼠标拖动滑块或鼠标拖曳、鼠标点击软件右上角的为本次分析命名,如输入H1N1或其它名称五报告输出打印:点击软件右侧的保存当前实验的分析结果,再点击软件左侧的,点击软件中部左侧的detailed 选择需要输出的分析结果,如H1N1,分析中建议选择results或standard curve,点击软件界面左下方的,生成PDF报告,如装了打印机,直接点击软件中间上方的,或者点击,选择pdf文件保存位置后点击save保存1

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