《反相液相色谱分离肾上腺皮质激素》由会员分享，可在线阅读，更多相关《反相液相色谱分离肾上腺皮质激素（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、112 Modern Scientific Instruments 2006 4 反相液相色谱分离肾上腺皮质激素 John Henderson, William Long, Ronald Majors (Agilent Technologies, Inc., USA) 摘 要 使用安捷伦新的C 1 8 反相色谱柱 以水/ 乙腈或水/ 甲醇为流动相可以轻松分离肾上腺皮质激素 本文应用等 度洗脱成功开发了一个 O T C 膏剂中氢化可的松的定量分析方法 1 引 言 肾上腺皮质激素类药物包括皮质醇( 氢化可的松) 皮质酮( 体内自然存在的肾上腺激素) 以及部分合成药物 如氟羟泼尼松龙和泼尼松作为有效
2、的抗炎药肾上腺 皮质激素被用于各种口服制剂吸入剂及外用药用以 治疗各种自身免疫和炎症由于肾上腺皮质激素应用广 泛对它在各种基质中的分析十分重要H P L C 是分析 和定量这些药物的方便快速而灵敏的技术 2 实 验 肾上腺皮质激素分子体积庞大且结构相近图1 显 示了部分常用肾上腺皮质激素的分子结构式肾上腺皮 质激素在水中的溶解度从可溶微溶到完全不溶不等 大部分肾上腺皮质激素溶于有机溶剂因此肾上腺皮 质激素非常适用于反相液相色谱分离 1 - 5 尽管结构相 近此次考查的几种肾上腺皮质激素的色谱保留却相差 很大有时甚至需要梯度洗脱来获得理想的分离时间 本文介绍了制药行业中重要肾上腺皮质激素的分析
3、方法并描述了一外用制剂中肾上腺皮质激素的实际分 析应用 图1 肾上腺皮质激素结构式 3 液相色谱分离肾上腺皮质激素 图2 显示了四种肾上腺皮质激素在反相C 1 8 柱上的 等度分离色谱柱填装的是5 m A g i l e n t T C C 1 8 填料 规格4 . 61 5 0 m m 是典型的分析色谱柱鉴于疏水性 的差异几种肾上腺皮质激素( 结构式如图 1 所示) 在该 色谱柱上具有不同的保留由于没有可电离的基团这 些中性化合物并不需要使用缓冲溶液但是对于真实 样品来说样品基质或其它赋型剂中的干扰物可能能够 电离因此需要缓冲溶液来调节 p H 或离子强度以将 它们与待测肾上腺皮质激素很好地
4、分离在实验中的色 谱条件( 如图2 所示) 下色谱分离良好峰形对称( 所有 峰的 U S P ( 5 % ) 拖尾因子小于 1 . 1 ) 且重现性好( 保留时间 R S D 1 % ) 图2 肾上腺皮质激素混合标样的甲醇/ 水等度分离 4 氢化可的松软膏分析 肾上腺皮质激素通常用于外用制剂 氢化可的松是 常用的止痒药在 O T C 药物中常以 1 % 的乳膏出现参 考 U S P 方法 6 我们分析了一款市售药物其标识药物 浓度为 1 % 氢化可的松活性成分该药物中同时含有芦 荟尼泊金表面活性剂等惰性成分 样品制备过程为 取相当于含氢化可的松2 . 5 5 m g 的软膏2 7 0 m g
5、置于容量 瓶加 1 0 m L 甲醇超声 1 0 分钟后用 P T F E 膜过滤因 样品中只含有一种肾上腺皮质激素 采用6 0 : 4 0 甲醇/ 水 等度洗脱该L 1 色谱柱( 详见方法) 将氢化可的松对照品 ( S i g m a H 4 0 0 1 - 1 G ) 制备成3 0 m g / m L 甲醇溶液 用前1 0 倍 稀释 进样1 L 氢化可的松标准稀释液用以考察响应因子 ( 结果未显示) 1 L 过滤好的氢化可的松软膏供试品的 色谱分离结果详见图 3 除了氢化可的松 色谱图还显示了其它一些化合物 的存在经研究惰性赋形剂的性质推测这些化合物可 现代科学仪器 2 0 0 6 4 1
6、 1 3 能是烷基尼泊金事实上甲基尼泊金和丙基尼泊金标 样分析结果表明( 数据未提供) 它们的保留时间与图3 中的完全匹配 图3 反相色谱水/ 甲醇等度分离1 % 氢化可的松软膏 通过单点校正测得软膏中活性成分的含量为 1 . 1 % 当然若作为耐用而可重现的实验室方法 还 需要进行更完全的定量校正 图4 反相色谱水/ 乙腈等度分离1 % 氢化可的松软膏 5 流动相对分离的影响 以乙腈替代甲醇的等度洗脱被用来研究有机相对分 离的影响色谱级的乙腈比甲醇价格要贵但是不少人 喜欢用乙腈作有机相因为它的粘度低且在紫外低波 长吸收弱在相同条件下以等效洗脱强度( 即与6 0 : 4 0 甲醇/ 水洗脱强度
7、相当) 的5 0 : 5 0 乙腈/ 水混合液为流动相 分析氢化可的松软膏同甲醇 / 水的分离效果相比所 有组分的保留时间都有所缩短而且甲基尼泊金与氢 化可的松之间的选择性大大改变( 从图5 可见 两者的流 出顺序颠倒了) 这种现象并不罕见 而且恰恰证实了调 整流动相在液相分离中的重要作用 6 总结 以乙腈 / 水或甲醇/ 水为流动相采用安捷伦新型 C 1 8 色谱柱可以有效分离肾上腺皮质激素本应用建立 了一个分析市售 O T C软膏中氢化可的松的等度分离方 法 图5 等效洗脱强度流动相选择性对比 参考文献 1 C. Woodward, “Small Scale Preparative Iso
8、lation of Corticosteroid Degra- dation Products Using Mass-Based Fraction Collection“, Agilent Technologies, publication 5989-2683EN, 2 C. Woodward and R. Majors, “Preparative Purification of Corticosteroids by HPLCScalability and Loadability using Agilent Prep C18 HPLC Columns, Agilent Technologies
9、, publication 5989-2484EN, 3 R. Ricker, “Steroids“, Agilent Technologies, publication 5988-6409EN, www. 4 I. Miksik, M. Vylitova, J. Pacha, and Z. Deyl, (1999) J. Chromatogr. B, Biomedical Applications, 726(1-2), 59-69 5 S. Ahmed and M. Riaz, (1991) 31 Chromatographia, (1-2), 67-70 6 United States Pharmacoepeia Method USP27-NF22 Page 922. 7 C. Barbas, J. Ruperez, A. Dams, and R. Majors, “Separation of Paraben Preservatives by Reversed-Phase HPLC“, Agilent Technologies, publica- tion 5989-3635E,
