反义人血管生成素重组逆转录病毒载体的构建及其体外功能的初步研究

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1、第三军医大学 硕士学位论文 反义人血管生成素重组逆转录病毒载体的构建及其体外功能的 初步研究 姓名:周莹冰 申请学位级别:硕士 专业:临床药理学 指导教师:刘松青 20030501 第三军医大学硕士学位论文 蹙S 6 9 9 英文缩写一览表 英文缩写英文全称 AA d e n o s i n e a aA m i n oa c i d A N G A n g i o g e n i n b p B a s e p a i r C C y t i d i n e e D N A C o m p l e m e n t a r yd e o x y r i b o n u c l e i ca c

2、 i d e f uC l o n ef o r m i n gu n i t D E P C D i e t h y l p r o c a r b o n a t e D M S O D i m e t h y ls u l f o x i d e D N A D e o x y r i b o n u c l e i c a c i d d N T P D e o x y n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t e E BE t l l i d i u mb r o m i d e E D T A E t h y l e n ed i a m i

3、 n e t e t r a a c e t i ca c i d E L I S A E n z y m e l i n k e di m m u n o s o r b e n t a s s a y GG u a n o s i n e hH o u r k bK i l ob a s ep i r e K DK i l o d a l t o n m gM i l l i g r a m M H C M a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e x m i nM i n u t e m lM i l l i l i t

4、e r m R N A M e s s e n g e r r i b o n u c l e i ca c i d m sM i l l i s e c o n d n e o N e o m y c i n O D O p t i c a ld e n s i t y P B S P h o s p h a t e b u f f e r e ds a l i n e P C R P o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n R N a s eR i b o n u c l e a s e l 中文词义 腺替 氨基酸 血管生成素 碱基对 胞苷 互

5、补脱氧核糖核酸 克隆形成单位 二乙基焦碳酸酯 二甲基亚砜 脱氧核糖核酸 三磷酸脱氧核苷 溴化乙锭 乙二胺四乙酸 酶联免疫吸附测定 鸟苷 小时 千碱基对 千道尔顿 毫克 主要组织相容性复合物 分钟 毫升 信使核糖核酸 毫秒 新霉素 光密度 磷酸盐缓冲液 聚合酶链反应 核糖核酸酶 第三军医大学硕士学位论文 r p m R T P C R S T lr l s V E G F u l “g R e v o l u t i o np e rm i n u t e R e v e r s et r a n s c r i p tp o l y m e r a s ec h a i nr e a c t

6、i o n S e c o n d T h y m i d i n e T r i t h y d r o x y m e t h y l a m i n o m e t h a n e V e s s e lE n d o t h e l i a lG r o w t hF a c t o r M i c r o l i t e r M i c r o g r a m m e 2 每分钟转速 逆转录聚合酶链反应 秒 胸苷 三羟甲基氨基甲烷 血管内皮生长因子 微升 微克 一茎三要墨奎兰堡主堂堡堡壅 C o n s t r u c t i o no fR e c o m b i n a n tR

7、 e t r o v i r a lV e c t o r E x p r e s s i n gA n t i s e n s eA n g i o g e n i na n dt h e P r i m a r yS t u d yo f I t sE f f e c ti nV i t r o A b s t r a c t A n g i o g e n e s i sw a sa z li m p o r t a n tp a t h o l o g i c a lp r o c e s si nan u m b e ro fc o n d i t i o n s e s p e c

8、 i a l l yi nt h em a l i g n a n td i s e a s e s I nt h es o l i dm a l i g n a n tt i s s u e ,t h en e o v a s c u l a r i z a t i o n w a sc o n s t a n t l yi n d u c e db yt h ea n g i o g e n i cf a c t o r sf r o mt h en o r m a lh o s tc e l la n dt u m o rc e l l s i t s e l f T u m o rc

9、e i l sr e c e i v e dn u t r i e n t sa n dr e m o v e dw a s t e sv i an e w l yf o r m e dc a p i l l a r i e s T h e r e f o r e ,a n g i o g e n e s i si se s s e n t i a lf o rt h ed e v e l o p m e n ta n dt r a n s l o c a t i o no ft u m o rc e l l s S o m es t u d i e sh a dc o n f i r m e

10、 dt h a ts e v e r a li n h i b i t o r ss p e c i f i ct ot h ed i f f e r e n ta n g i o g e n i c f a c t o r sc o u l di n h i b i tt h et u m o rg r o w t ha n dm e t a s t a s i s F o rt h i sr e a s o n ,t oi n t e r v e n et h e a n g i o g e n e s i si n d u c e db yt u m o r c e i l sm a y

11、i n h i b i tt u m o r Sd e v e l o p m e n ta n dt r a n s l o c a t i o no f t u m o r , A n g i o g e n i n ( A N G ) i sab a s i c ,s i n g l e - c h a i np r o t e i no fm o l e c u l a rw e i g h ta p p r o x i m a t e l y 1 4 1 K D ,i tW a sf i r s td e t e c t e di nc u l t u r em e d i u mo

12、 fh u m a nc o l o nC a n c e rc e l l l i n eH T - 2 9 L i k eo t h e ra n g i o g e n i cp r o t e i n ss u c ha sb a s i cf i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r ( b F G F ) a n dv a s c u l a r e n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ( V E G F ) ,A N GC a ni n d u c en e o v a s c u l a r

13、i z a t i o ns i g n i f i c a n t l y B i n d i n g t oe n d o t h e l i a lc e l l s c e l l - s u r f a c eb i n d i n gp r o t e i n ( a - a c t i n ) ,a n g i o g e n i ni s e n d o c y t o s e db ye n d o t h e l i a lc e l l s B yt h i sm e a l l Sa n g i o g e n i nc a ne n h a n c et h ea b

14、 i l i t yo f e n d o t h e l i a lc e l l st o d i g e s t e x t r a c e l l u l a rm a t r i xc o m p o n e n t sa n dd e g r a d eb a s e m e n t m e m b r a n e ,t h e r e b yf a c i l i t a t i n gc e l li n v a s i o na n dm i g r a t i o n 。N o w , s o m es t u d yi n d i c a t et h a t a n g

15、 i o g e n i np l a yac r i t i c a lr o l ei nt h ep r o c e s s e so fa n g i o g e n e s i s ,i n c l u d i n gp a r t i c i ! c a t i n gt h e o r i g i n a t i o na n dm a t u r eo ft h en e o v a s c u l a r i z a t i o n T h el e v e lo fA N G i nt u m o rt i s s u e sa r e h i g h e rt h a n

16、t h a ti nn o r m a lt i s s u e s T h u s ,A N Gc o u l db eap o t e n t i a lt a r g e tf o rd e v e l o p i n gt h e a n g i o g e n e s i sa n t a g o n i s t s I nt h ep a s ty e a r s ,A N Ga n t a g o n i s t s ,i n c l u d i n g m o n o c l o n e a n t i b o d ym A b 2 6 2 F 、c A b 2 6 - 2 F ,a n t i a n g i o g e n i np c p t i d - - c h A N G 、c h G N A ,A N I E p e p t i d ew h i c hW a sd e r i v e df r o mt h ep h a g ec l o n e ,a e t i na n da n t

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