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1、 设计实验可见分光光度法测定新血宝胶囊中铁的条件实验实验者：摘要：采用分光光度法 测定的铁，并且讨论了吸收波长，显色剂用量，溶液 ph，显色时间和显色温度等因素对吸光度的影响，从而找到最佳实验条件，然后在此条件下测定新血宝胶囊中铁的含量。关键词：可见分光光度法：铁含量：新血宝：测定条件：实验1 综 述：新血宝胶囊，为胶囊剂，内容物 为棕黄色的粉末；气香，味微苦、甘，有铁腥味。为内科虚证类非处方药药品。功能主治： 补血益气，健脾和胃。用于痔疮出血、月经过多、偏食等原因所致的缺铁性贫血。成分为鸡血藤、黄芪、大 枣、当归、白术、 陈皮、硫酸亚铁。本 实验主要是采用邻二氮菲分光光度法测定新血宝胶囊中硫
2、酸亚铁中的铁。采用这种办法将受到很多因素的影响，如显色剂的用量，最大吸收波长，溶液 ph，显色时间，显色温度等的影响，经查文献知最佳的实验条件：显色剂用量为 0.15% 0.82.4ml1，最大吸收波长 510514nm4，溶液 ph 582，显色时间（室温下）1 分钟5，显色温度 293.15K 及以上3等。亚铁离子容易被氧化生成三价铁离子，三价铁离子与邻二氮菲也能生成淡蓝色络合物但其不稳定。故在显色前用盐酸羟胺将三价铁离子还原成亚铁离子，化学方程式： 2 Fe3+ + 2 NH2OHHCl = 2 Fe2+ + N2 + 2 H2O + 4 H+ + 2 Cl-。2.仪器与试剂仪器：721
3、 分光光度计，phS-2 型酸度计，8 个 25ml的容量瓶，7 个 50ml的容量瓶，恒温箱 5个，不同规格的移液管. 试剂：供试液，铁标准液（160ug/ml ），邻二氮菲（0.15%），ph=5 的 HAc-NaAc 缓冲液，HCl（0.1mol/L），HCl（0.001mol/L），HCl（0.0001mol/L ），NaOH（0.01mol/L）NaOH（0.001mol/L），NaOH（0.0001mol/L），NH2OHHCl（10%）供试品溶液的制备：取本品内容物 0.25 克，精密称定，置于 250ml 容量瓶中，加硫酸溶液（1-20）2.5ml 和水 100ml,混匀，加水
4、稀释至刻度，摇匀， 滤过，精密量取滤液 2ml ，置于 50ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。对照品溶液浓度:160ug/ml.。3.实验条件的选择3.1 显色剂的用量原理：不同量的邻二氮菲与亚铁离子在 ph=29 的还原性溶液中生成橙红色的配合物在 510nm 测得其吸光度。据资料1可知 100ug/ml 的铁标准液稀释 50 倍，显色剂邻二氮菲（0.15%）的用量为 13ml 时，吸光度值基本不变。本 实验选用的铁标 准液为 160ug/ml，稀释 50倍后，粗估邻二氮菲的用量应在 25ml 之间。方法:取 8 个 25ml 的容量瓶，各加 铁标准液 0.5ml，及 5ml 的 H
5、Ac-NaAc 缓冲液，1ml 的 10%的 NH2OHHCl 溶液，摇匀，放置两分 钟后分别加入 0.15%的邻二氮菲 1.0ml，2.0ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml, 4.0ml，4.5ml, 5.0ml，用水稀释至刻度， 摇匀。在 721 分光光度计上用 1cm 的吸收池，在选定的波长 510nm 测定溶液的吸光度（A）。绘 制吸光度 -邻二氮菲体积曲线。V 显色剂 0.5 1.0 2.0 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0A绘制 A-v 图像选取吸光度最大且恒定的显色剂用量。3.2 最大吸收波长原理：亚铁离子与适量的邻二氮菲在 pH=29 的还原性的溶液中生成橙红色的配
6、合物，在不同的波长（500530nm）下 测定吸光度（A）。据资料3可知 亚铁离子与邻二氮菲的配合物在 510514nm 波长处有最大吸收，故将波长范围确定在 490530nm 之间。方法:取 25ml 的容量瓶，加 铁标准液 0.5ml，及 5ml 的 HAc-NaAc 缓冲液，1ml 的10%的 NH2OHHCl 溶液，摇匀，放置两分 钟后加入 0.15%的邻二氮菲 ml，用水稀释至刻度，摇匀。在 721 分光光度计上用 1cm 的吸收池，在不同的波长（490530nm）测定溶液的吸光度（ A）。绘制吸光度-波长曲线。选取吸光度最大且恒定的波长。波长 490 500 510 512 514
7、 516 518 520 530A3.3 溶液 ph原理：亚铁离子与适量的邻二氮菲在 pH=39 的还原性的溶液中生成橙红色的配合物，在最大吸收波长下测定吸光度（A）。据资料3可知 邻二氮菲与亚铁离子显色生成橙红色络合物在 ph=58 范围内吸光度最大。故实验选择的 ph 范围为 39.方法:取 7 个 25ml 的容量瓶，各加 标准液 0.5ml 及 1ml10%的 NH2OHHCl 溶液，摇匀，放置两分钟后加入 0.15%的邻二氮菲 ml，如下表加入 NaOH 和 HCl，用水稀释至刻度，摇匀，并用 ph 计测定溶液 ph。在 721 分光光度计上用 1cm 的吸收池，在最大吸收波长测定溶
8、液的吸光度（A）。 绘制吸光度-PH 曲线。选取吸光度最大且恒定的 ph。HCl（0.1mol/L） NaOH（0.01mol/L） pH（估计值） pH（测量值）酸碱配比 1ml 7.5ml 3酸碱配比 1ml 9.75ml 4HCl（0.001mol/L） NaOH（0.0001mol/L） pH（估计值） pH（测量值）酸碱配比 1ml 7.5ml 5酸碱配比 1ml 9.75ml 6酸碱配比 1ml 10ml 7HCl（0.0001mol/L）NaOH（0.001mol/L） pH（估计值） pH（测量值）酸碱配比 9.75ml 1ml 8酸碱配比 7.5ml 1ml 93.4 显色时
9、间原理：亚铁离子与适量的邻二氮菲在 pH=29 的还原性的溶液中生成橙红色的配合物，不同的时间（535 分钟）在最大吸收波长下测定吸光度（A）。方法:取 25ml 的容量瓶，加 标准液 0.5ml，及 5ml 的 HAc-NaAc 缓冲液，1ml 的 10%的NH2OHHCl 溶液，摇匀，放置两分钟后分别加入 0.15%的邻二氮菲 ml，用水稀释至刻度，摇匀。在 721 分光光度计上用 1cm 的吸收池， （535 分钟） 在选定的波长 nm 测定溶液的吸光度（A）。绘制吸光度-时间曲线。min时间 5 10 15 20 25 30 35A3.5显色温度原理：在不同的温度下（535 度）亚铁离
10、子与适量的邻二氮菲在 pH=29 的还原性的溶液中生成橙红色的配合物，适宜的时间最大吸收波长下测定吸光度（A）。PH 3 4 5 6 7 8 9A据资料6可知 显色时间达 20 分钟当温度在 2030 度时， ，吸光度最大且稳定不变.方法:取 6 个 25ml 的容量瓶，各加 标准液 0.5ml，及 5ml 的 HAc-NaAc 缓冲液，1ml 的 10%的 NH2OHHCl 溶液，摇匀，分 别放置恒温箱（5,10,15,20,25,30,35 度）中两分钟，同时将 0.15%的邻二氮菲 ml 放入相应的恒温箱中 2 分钟,然后同温度亚铁离子与邻二氮菲混合，用水稀释至刻度摇匀并置与恒温箱中 分
11、钟之后的，在 721 分光光度计上用 1cm 的吸收池，在 选 定的波长 510nm 测定溶液的吸光度。绘制吸光度- 温度曲线。温度 5 10 15 20 25 30 35A总结：测量水中铁含量最佳的实验条件。1显色剂用量2 最大吸收波长3 溶液 ph4 显色时间5 显色温度4. 可见分光光度法测定新血宝胶囊中铁方法：:取 6 个 50ml 的容量瓶，各加标准液 0.00,0.25,0.50,1.00,1.50,2.00 ml 及 5ml 的 HAc-NaAc缓冲液，1ml 的 10%的 NH2OHHCl 溶液，摇匀，放置两分 钟后分别加入 0.15%的邻二氮菲 ml,用水稀释至刻度，摇匀。在
12、 721 分光光度计上用 1cm 的吸收池，在选定的波长 510nm测定溶液的吸光度 A。绘制铁离子浓度-吸光度标准曲线。并求出线性回归方程。C(ug/ml) 0 0.8 1.6 3.2 4.8 6.4A在同样的条件下，测定供试液(调 ph)与邻二氮菲配合物的吸光度。带入线性回归方程求出供试液的铁离子浓度为 c1（ug/ml）.新血宝内容物（0.25g）里含有亚铁离子质量为 m1(ug)K为稀释倍数 k=50/2=25m1=c1*K*250结论：新血宝胶囊中铁的含量为 m1药典: 新血宝胶囊中铁的含量为 之间故判断该药品是否合格。参考文献1 秦岩.邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验的改进.J 沈阳医学院报,2008,10(1) :44-452 李建雄.自来水铁含量测定的实验研究.J内蒙古石油化工，2011， （6）:4-63 陈静静，曾亚丽.邻菲啰啉比色法测定铁含量的过程中显色温度与显色时间的控制.J玻璃与搪瓷，1999,27（6）:30,424 王来成， 郑连 明.邻二氮菲比色法 测定铁含量.J徐州医学院报，1995,15（1）:54-555.岳至劲，王海青，刘永文，孟双明，郭永.邻二氮菲分光度法测定黄芪中铁的溶出率.J光谱实验室，2008,25（2）：205-207
